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PEDV S1蛋白多表位单克隆抗体制备及结果比对
1
作者
赵晶
朱建国
《农业开发与装备》
2016年第5期71-71,74,共2页
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由PED病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性传染病,其中S糖蛋白携带主要的B淋巴细胞抗原决定簇,能够诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的重要结构蛋白。主要针对PEDV S1蛋白选择九条...
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由PED病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性传染病,其中S糖蛋白携带主要的B淋巴细胞抗原决定簇,能够诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的重要结构蛋白。主要针对PEDV S1蛋白选择九条不同的多肽片段,并利用BALB/C小鼠单克隆抗体制备技术得到识别相应多肽片段的单克隆抗体,针对九条不同多肽表位获得的单克隆抗体与重组原核表达的PEDV S1蛋白识别效果进行对比,最后证实在所选的九条多肽表位片段中,以序列90至102、621至637、718至731这三条多肽的抗原性最好。
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关键词
PEDV
S1蛋白
多肽片段表位设计
单克隆抗体制备
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职称材料
Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4兔源单克隆抗体的制备和鉴定
2
作者
孔维光
袁新婕
+2 位作者
丁广义
张环宇
徐镇
《渔业研究》
2025年第5期609-619,共11页
【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-Ⅱ...
【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-ⅡVP4基因表达载体,在真核表达系统中制备重组VP4蛋白;将纯化后的重组蛋白作为免疫原多次免疫新西兰白兔,分离出脾脏单个抗原特异性记忆B细胞;随后通过聚合酶链式反应(PCR)扩增抗体可变区、恒定区基因片段,构建重组表达载体并转染HEK293F细胞进行单克隆抗体表达。最终通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光分析(IF)评估抗体的抗原结合特性。【结果】通过对分离培养的单个B细胞上清液进行筛选,利用ELISA筛选出对VP4蛋白具有较好结合能力的三种B细胞克隆(1D5、1F9、1H1),并结合IF实验验证了其能结合病毒感染组织中的VP4抗原。进一步通过抗体重组表达获得了三株抗VP4重组单克隆抗体(1D5、1F9、1H1),其ELISA效价均达1∶128000。Westernblot分析结果显示,1D5、1F9和1H1单克隆抗体能特异性识别GCRV-YX246感染的脑细胞中65.4kDa的蛋白质条带,该分子量大小与病毒VP4蛋白理论分子量一致。IF实验结果也进一步证实1D5、1F9和1H1可特异性识别GCRV-YX246毒株感染的草鱼头肾组织切片中的病毒抗原。【结论】本研究成功制备并筛选出抗GCRV-ⅡVP4重组单克隆抗体,为GCRV-Ⅱ病毒快速诊断试剂盒的研发和VP4蛋白功能研究奠定基础。
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关键词
Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒
VP4蛋白
单个B细胞技术
单克隆抗体制备
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职称材料
流式细胞分选技术及其在单克隆抗体制备中的应用
3
作者
王振宇
纪元
+2 位作者
李玉萍
刘尧
林骏
《动物医学进展》
2024年第11期105-110,共6页
单克隆抗体是一类在疾病防治、药物开发、生命科学研究领域具有重要作用的生物活性蛋白质,目前已有多种制备途径。随着PCR技术的发展,单个细胞生产抗体技术迅速兴起;与其他制备技术相比,流式细胞分选技术依靠强大的光学分析与分选系统...
单克隆抗体是一类在疾病防治、药物开发、生命科学研究领域具有重要作用的生物活性蛋白质,目前已有多种制备途径。随着PCR技术的发展,单个细胞生产抗体技术迅速兴起;与其他制备技术相比,流式细胞分选技术依靠强大的光学分析与分选系统能够精准高效地将免疫细胞分群,后续通过基因工程的方法获得单克隆抗体。利用该技术生产的单克隆抗体具有可变区天然构象与抗原结合特异性强等显著优势,在病毒感染机制研究、抗肿瘤治疗、抗自身免疫病等方面具有重要价值。论文对单克隆抗体开发过程中各技术优劣对比与流式细胞分选在单克隆抗体开发中的过程、应用与发展趋势进行综述,以期为单克隆抗体制备技术的研究进展提供参考。
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关键词
单克隆抗体制备
流式细胞术
单个B细胞分选
套式PCR
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职称材料
新城疫病毒单克隆抗体的制备及鉴定
被引量:
3
4
作者
王琴
罗晶璐
+2 位作者
蒋文泓
聂飞
任涛
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期112-114,共3页
以纯化的新城疫病毒ND35免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经筛选,获得5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.特异性试验表明,7G5单克隆抗体仅与ND35病毒株反应,而不与禽流感病毒AIV(H5亚型)、产蛋下降综合症病毒(EDS-...
以纯化的新城疫病毒ND35免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经筛选,获得5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.特异性试验表明,7G5单克隆抗体仅与ND35病毒株反应,而不与禽流感病毒AIV(H5亚型)、产蛋下降综合症病毒(EDS-76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、马立克氏病毒(MDV)、禽肺病毒(APV)反应.通过Western-blot对7G5单克隆抗体进行鉴定,发现其在相对分子质量47 500~62 000之间出现条带,表明其与NDV抗原有特异性结合.这5株单克隆抗体属于IgG1、IgG2b亚类,κ轻链.
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关键词
新城疫病毒
单克隆
抗体
单克隆抗体制备
单克隆
抗体
鉴定
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职称材料
题名
PEDV S1蛋白多表位单克隆抗体制备及结果比对
1
作者
赵晶
朱建国
机构
上海交通大学农业与生物学院/上海市兽医生物技术重点实验室
出处
《农业开发与装备》
2016年第5期71-71,74,共2页
文摘
猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由PED病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性传染病,其中S糖蛋白携带主要的B淋巴细胞抗原决定簇,能够诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的重要结构蛋白。主要针对PEDV S1蛋白选择九条不同的多肽片段,并利用BALB/C小鼠单克隆抗体制备技术得到识别相应多肽片段的单克隆抗体,针对九条不同多肽表位获得的单克隆抗体与重组原核表达的PEDV S1蛋白识别效果进行对比,最后证实在所选的九条多肽表位片段中,以序列90至102、621至637、718至731这三条多肽的抗原性最好。
关键词
PEDV
S1蛋白
多肽片段表位设计
单克隆抗体制备
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4兔源单克隆抗体的制备和鉴定
2
作者
孔维光
袁新婕
丁广义
张环宇
徐镇
机构
中国科学院水生生物研究所
出处
《渔业研究》
2025年第5期609-619,共11页
基金
国家自然科学基金(32225050、U24A20461、32303053)。
文摘
【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-ⅡVP4基因表达载体,在真核表达系统中制备重组VP4蛋白;将纯化后的重组蛋白作为免疫原多次免疫新西兰白兔,分离出脾脏单个抗原特异性记忆B细胞;随后通过聚合酶链式反应(PCR)扩增抗体可变区、恒定区基因片段,构建重组表达载体并转染HEK293F细胞进行单克隆抗体表达。最终通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光分析(IF)评估抗体的抗原结合特性。【结果】通过对分离培养的单个B细胞上清液进行筛选,利用ELISA筛选出对VP4蛋白具有较好结合能力的三种B细胞克隆(1D5、1F9、1H1),并结合IF实验验证了其能结合病毒感染组织中的VP4抗原。进一步通过抗体重组表达获得了三株抗VP4重组单克隆抗体(1D5、1F9、1H1),其ELISA效价均达1∶128000。Westernblot分析结果显示,1D5、1F9和1H1单克隆抗体能特异性识别GCRV-YX246感染的脑细胞中65.4kDa的蛋白质条带,该分子量大小与病毒VP4蛋白理论分子量一致。IF实验结果也进一步证实1D5、1F9和1H1可特异性识别GCRV-YX246毒株感染的草鱼头肾组织切片中的病毒抗原。【结论】本研究成功制备并筛选出抗GCRV-ⅡVP4重组单克隆抗体,为GCRV-Ⅱ病毒快速诊断试剂盒的研发和VP4蛋白功能研究奠定基础。
关键词
Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒
VP4蛋白
单个B细胞技术
单克隆抗体制备
Keywords
grass carp reovirus genotypeⅡ(GCRV-Ⅱ)
VP4 protein
single B cell technology
monoclonal antibodies preparation
分类号
S941 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
流式细胞分选技术及其在单克隆抗体制备中的应用
3
作者
王振宇
纪元
李玉萍
刘尧
林骏
机构
深圳市药品检验研究院
出处
《动物医学进展》
2024年第11期105-110,共6页
基金
广东省药品监督管理局2022年科技创新项目(2022TDB54)。
文摘
单克隆抗体是一类在疾病防治、药物开发、生命科学研究领域具有重要作用的生物活性蛋白质,目前已有多种制备途径。随着PCR技术的发展,单个细胞生产抗体技术迅速兴起;与其他制备技术相比,流式细胞分选技术依靠强大的光学分析与分选系统能够精准高效地将免疫细胞分群,后续通过基因工程的方法获得单克隆抗体。利用该技术生产的单克隆抗体具有可变区天然构象与抗原结合特异性强等显著优势,在病毒感染机制研究、抗肿瘤治疗、抗自身免疫病等方面具有重要价值。论文对单克隆抗体开发过程中各技术优劣对比与流式细胞分选在单克隆抗体开发中的过程、应用与发展趋势进行综述,以期为单克隆抗体制备技术的研究进展提供参考。
关键词
单克隆抗体制备
流式细胞术
单个B细胞分选
套式PCR
Keywords
monoclonal antibody preparation
fluorescence-activated cell sorting
single B cell sorting
nested-PCR
分类号
S852.5 [农业科学]
在线阅读
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职称材料
题名
新城疫病毒单克隆抗体的制备及鉴定
被引量:
3
4
作者
王琴
罗晶璐
蒋文泓
聂飞
任涛
机构
农业部养禽与禽病防治重点开放实验室华南农业大学兽医学院
广东省农业厅
出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期112-114,共3页
基金
教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0723)
国家高技术研究发展计划(2006AA10A205)
+1 种基金
广东省自然科学基金(5500-E07106)
广东省科技计划项目(2005A20401003)
文摘
以纯化的新城疫病毒ND35免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经筛选,获得5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.特异性试验表明,7G5单克隆抗体仅与ND35病毒株反应,而不与禽流感病毒AIV(H5亚型)、产蛋下降综合症病毒(EDS-76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、马立克氏病毒(MDV)、禽肺病毒(APV)反应.通过Western-blot对7G5单克隆抗体进行鉴定,发现其在相对分子质量47 500~62 000之间出现条带,表明其与NDV抗原有特异性结合.这5株单克隆抗体属于IgG1、IgG2b亚类,κ轻链.
关键词
新城疫病毒
单克隆
抗体
单克隆抗体制备
单克隆
抗体
鉴定
Keywords
newcastle disease virus
monoclonal antibodies
preparation of monoclonal antibodies
identification of monoclonal antibodies
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PEDV S1蛋白多表位单克隆抗体制备及结果比对
赵晶
朱建国
《农业开发与装备》
2016
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4兔源单克隆抗体的制备和鉴定
孔维光
袁新婕
丁广义
张环宇
徐镇
《渔业研究》
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
流式细胞分选技术及其在单克隆抗体制备中的应用
王振宇
纪元
李玉萍
刘尧
林骏
《动物医学进展》
2024
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
新城疫病毒单克隆抗体的制备及鉴定
王琴
罗晶璐
蒋文泓
聂飞
任涛
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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职称材料
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