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华癸中慢生根瘤菌atpA基因在共生固氮中的功能研究
1
作者 余福燕 邹倩 +1 位作者 阎春兰 程国军 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第4期133-142,共10页
为探究华癸中慢生根瘤菌7653R ABC转运体渗透酶基因atpA在根瘤菌与豆科植物共生固氮中的作用,利用单交换插入突变获得atpA基因突变体,研究其在自生生长及与紫云英共生条件下的功能。结果显示:atpA基因突变会使根瘤菌提前进入稳定期,减... 为探究华癸中慢生根瘤菌7653R ABC转运体渗透酶基因atpA在根瘤菌与豆科植物共生固氮中的作用,利用单交换插入突变获得atpA基因突变体,研究其在自生生长及与紫云英共生条件下的功能。结果显示:atpA基因突变会使根瘤菌提前进入稳定期,减弱其生物膜形成能力。接种突变株的植株叶片泛黄、缺氮症状突出,其植株高度、地上部分鲜质量、结瘤数和固氮酶活性分别降低了14.3%、33.3%、31.5%和18.8%。通过蛋白质组学分析,突变株类菌体中共鉴定到78个差异表达蛋白,其中23个表达上调,55个表达下调。在这些差异表达蛋白中,有10个氨基酸转运相关蛋白和12个固氮复合物形成相关蛋白。研究表明,华癸中慢生根瘤菌ABC转运体渗透酶基因atpA在根瘤菌生长及与宿主紫云英共生过程中起着至关重要的作用。 展开更多
关键词 华癸中慢生根瘤菌7653R ABC转运体渗透酶 共生固氮 蛋白组学分析
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利用细菌双杂交文库筛选华癸中慢生根瘤菌7653R中与外膜蛋白Opa22互作的蛋白 被引量：6
2
作者 李一星 李芳 +2 位作者 周鑫兰 谢福莉 李友国 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期28-33,共6页
为研究华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R外膜蛋白Opa22在共生固氮过程中的作用机制,构建了细菌双杂交基因组随机文库,并以Opa22为诱饵,钓取与其相互作用的候选靶蛋白。结果获得12个与Opa22蛋白互作的阳性克隆,为后续研究Op... 为研究华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R外膜蛋白Opa22在共生固氮过程中的作用机制,构建了细菌双杂交基因组随机文库,并以Opa22为诱饵,钓取与其相互作用的候选靶蛋白。结果获得12个与Opa22蛋白互作的阳性克隆,为后续研究Opa22的作用机制提供了新的线索和思路,同时也为开展根瘤菌蛋白互作的研究构筑了良好的技术平台。 展开更多
关键词 华癸中慢生根瘤菌7653R 细菌双杂交文库 共生固氮 Opa22 互作蛋白
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华癸中慢生根瘤菌7653R MCHK_8182基因的共生固氮功能 被引量：9
3
作者 路达 彭杰丽 +2 位作者 谢福莉 陈大松 李友国 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期56-61,共6页
根据华癸中慢生根瘤菌7653R全局转录组分析结果,获得在共生固氮阶段显著上调表达的基因MCHK_8182;设计重叠延伸PCR引物,构建MCHK_8182双交换突变重组质粒载体;通过三亲本杂交,将突变载体导入7653R;在蔗糖压力培养下进行筛选,最终获得MCH... 根据华癸中慢生根瘤菌7653R全局转录组分析结果,获得在共生固氮阶段显著上调表达的基因MCHK_8182;设计重叠延伸PCR引物,构建MCHK_8182双交换突变重组质粒载体;通过三亲本杂交,将突变载体导入7653R;在蔗糖压力培养下进行筛选,最终获得MCHK_8182双交换突变株。PCR及测序验证双交换突变株构建成功。植物盆栽试验结果显示,与7653R野生型接种的植株相比,MCHK_8182突变菌株接种的植株根瘤数减少,但固氮酶活未见明显差异。 展开更多
关键词 华癸中慢生根瘤菌 细胞色素P450 双交换 突变株 共生固氮 共生基因MCHK8182 表型
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华癸中慢生根瘤菌7653R SraG sRNA的共生固氮功能 被引量：6
4
作者 李振鹏 马春草 +2 位作者 谢福莉 陈大松 李友国 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期51-57,共7页
基于前期对华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653RsRNA(small non-coding RNA,sRNA)的生物信息学预测,经Northern blot验证获得SraGsRNA。本研究采用RACE与转录组高通量深度测序确定了SraG全长,并分别利用RNAfold软件和TargetRN... 基于前期对华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653RsRNA(small non-coding RNA,sRNA)的生物信息学预测,经Northern blot验证获得SraGsRNA。本研究采用RACE与转录组高通量深度测序确定了SraG全长,并分别利用RNAfold软件和TargetRNA软件预测了SraG二级结构和靶位点,进而构建了M.huakuii 7653R的SraG插入失活突变体(M.huakuii SraGmut),并对突变体接种紫云英的共生表型进行了检测。盆栽试验结果表明,与野生型菌株M.huakuii 7653R相比,接种突变株M.huakuii SraGmut的固氮能力显著下降,突变株固氮酶活性下降约40%,植株鲜质量和根瘤数目也显著降低。结果表明,SraG的功能与M.huakuii 7653R的共生固氮过程相关,作为sRNA可能参与根瘤菌的共生固氮调控过程。 展开更多
关键词 华癸中慢生根瘤菌 SRNA 突变体 共生固氮 表型
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华癸中慢生根瘤菌焦磷酸硫胺素结合蛋白基因tpp的功能研究 被引量：2
5
作者 吴和涛 谢婧 +3 位作者 罗莎 何冬兰 李晓华 程国军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期77-82,共6页
在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突... 在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突变对菌株生长及共生固氮功能的影响。结果显示:tpp基因突变会减缓菌株生长,突变菌株胞内的谷胱甘肽还原酶活性显著降低。植物盆栽试验表明,突变菌株感染紫云英宿主形成有效的红色根瘤,但是其固氮酶活降低了26.4%。结果表明:tpp基因在根瘤菌的生长和共生固氮中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 华癸中慢生根瘤菌 焦磷酸硫胺素结合蛋白 tpp基因 共生固氮
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中慢生华癸根瘤菌nodD-突变株的筛选及其对紫云英的促生作用 被引量：1
6
作者 杜寒春 高轶静 +2 位作者 郑会明 钟增涛 朱军 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期529-532,共4页
通过二亲接合的方式,将含有sacB基因和nodD基因部分片段的质粒与中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)93(Mh93)菌株进行同源重组,在含10%蔗糖的TY平板上成功地筛选到了nodD基因突变株Mh93-27。利用温室盆栽试验研究了紫云英单作及... 通过二亲接合的方式,将含有sacB基因和nodD基因部分片段的质粒与中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)93(Mh93)菌株进行同源重组,在含10%蔗糖的TY平板上成功地筛选到了nodD基因突变株Mh93-27。利用温室盆栽试验研究了紫云英单作及紫云英-小麦间作体系Mh93-27对紫云英的促生作用,结果表明,接种Mh93-27后,紫云英的地上部生物量和全氮含量以及根部生长得到了不同程度的提高,但只有在小麦孕穗期和收获期时,根瘤菌才表现出显著的促生作用。 展开更多
关键词 中慢生华癸根瘤菌 sacB NODD 紫云英 促生 氮素
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中慢生型华癸根瘤菌Mesorhizobium huakuii AS9自体诱导物合成酶基因的筛选及其功能分析 被引量：5
7
作者 袁全 杨梦华 +2 位作者 郑会明 钟增涛 朱军 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期459-463,共5页
细菌在高细胞密度下通过产生一类化学信号分子(autoinducer,自体诱导物)感知细胞群体密度变化,从而对基因表达进行调控,这一现象被称为群体感应(quorum sensing)。以中慢生型华癸根瘤菌Mesorhizobium huakuii AS9为出发菌株,利用转座子... 细菌在高细胞密度下通过产生一类化学信号分子(autoinducer,自体诱导物)感知细胞群体密度变化,从而对基因表达进行调控,这一现象被称为群体感应(quorum sensing)。以中慢生型华癸根瘤菌Mesorhizobium huakuii AS9为出发菌株,利用转座子随机突变的方法获得了自体诱导物缺失突变株YQ1,并克隆得到了其自体诱导物合成酶基因,命名为mrhI;构建PmrhI-lacZ转录融合表达质粒pYQ1,通过同源重组的方法得到在华癸根瘤菌中mrhI-lacZ融合表达而且mrhI基因突变菌株YQ3。突变株YQ3的培养液上清不含有自体诱导物分子,通过lacZ报告基因的表达发现mrhI的表达受自体诱导物的调控,说明mrhI基因是M.huakuii AS9的群体感应体系中的自体诱导物合成酶基因。 展开更多
关键词 中慢生华癸根瘤菌 群体感应 自体诱导物合成酶基因
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糖类碳源对中慢生华癸根瘤菌群体感应基因mrhI/R表达的影响
8
作者 朱庆成 毛怡玲 +3 位作者 茅冬梅 郑会明 钟增涛 朱军 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期856-861,共6页
克隆了中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)的mrh I和mrh R群体感应基因的启动子区域,至Lac Z翻译融合表达质粒载体p RA302中,经β-半乳糖苷酶活性检测发现,mrh I和mrh R的表达均受mrh I基因产物(自体诱导物)的正向调控。两种PTS糖... 克隆了中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)的mrh I和mrh R群体感应基因的启动子区域,至Lac Z翻译融合表达质粒载体p RA302中,经β-半乳糖苷酶活性检测发现,mrh I和mrh R的表达均受mrh I基因产物(自体诱导物)的正向调控。两种PTS糖类:葡萄糖和果糖的外源添加可以显著增加细菌的生长量,但却都同时抑制了mrh I和mrh R基因的表达,暗示在中慢生华癸根瘤菌中群体感应基因的表达可能受细菌中普遍存在的碳源代谢物阻遏现象的调节。 展开更多
关键词 中慢生华癸根瘤菌 群体感应 葡萄糖 果糖 碳源代谢物阻遏
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紫云英-小麦混作体系中氮素转移对小麦生长的促进作用 被引量：13
9
作者 杜寒春 郑会明 +4 位作者 周晶 曹慧 沈标 娄无忌 钟增涛 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1043-1046,共4页
关键词 中慢生华癸根瘤菌 nodD基因缺失菌株 小麦 氮素 PGPR
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磷转运蛋白AsPT6对紫云英结瘤及固氮酶活性的影响 被引量：1
10
作者 陈冲 李友国 +1 位作者 赵斌 林会 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期50-58,共9页
采用组织定位、超表达及RNAi等方法对紫云英中的Pht1家族磷转运蛋白AsPT6进行了研究。时空表达结果显示,AsPT6基因在根、茎、叶中均有表达,接种根瘤菌后在根和根瘤中高量表达;化学组织定位分析表明,AsPT6在根和根瘤的维管组织及根和根... 采用组织定位、超表达及RNAi等方法对紫云英中的Pht1家族磷转运蛋白AsPT6进行了研究。时空表达结果显示,AsPT6基因在根、茎、叶中均有表达,接种根瘤菌后在根和根瘤中高量表达;化学组织定位分析表明,AsPT6在根和根瘤的维管组织及根和根瘤连接处均有表达,起到向根瘤转运磷的作用;超表达及RNAi结果显示AsPT6能显著影响紫云英的结瘤及固氮酶活性。这些研究结果表明,AsPT6参与根瘤形成和发育过程中磷的转运。 展开更多
关键词 紫云英 华癸中慢生根瘤菌 结瘤 磷转运蛋白 Pht1家族
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