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抗人红细胞血型A抗原单链抗体原核表达及活性测定
被引量：
3
1
作者
王长军
唐家琪
+2 位作者
李先富
潘秀珍
操敏
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期271-273,共3页
目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chainFv)蛋白。方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50AmAbV和VL基因间引入连结短肽,体外构建50AScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a...
目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chainFv)蛋白。方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50AmAbV和VL基因间引入连结短肽,体外构建50AScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达;并以免疫印迹测定重组蛋白的生物学活性。结果序列分析表明,50AScFv基因全长747bp,编码249个氨基酸;重组体表达产物聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为29000左右,与预期的结果一致,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在;光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体总蛋白的16.2%,免疫印迹试验显示,重组小分子抗体保留了亲本mAb的特异性和力。结论成功地构建50AScFv基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研制基因工程血型检定抗体奠定了基础。
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关键词
ABO血型系统
基因工程
抗体
半链抗体表达
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职称材料
题名
抗人红细胞血型A抗原单链抗体原核表达及活性测定
被引量：
3
1
作者
王长军
唐家琪
李先富
潘秀珍
操敏
机构
南京军区军事医学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期271-273,共3页
基金
国家自然科学基金资助
No.39670645
+1 种基金
"九五"全军医药科研基金资助
No.96M025
文摘
目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chainFv)蛋白。方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50AmAbV和VL基因间引入连结短肽,体外构建50AScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达;并以免疫印迹测定重组蛋白的生物学活性。结果序列分析表明,50AScFv基因全长747bp,编码249个氨基酸;重组体表达产物聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为29000左右,与预期的结果一致,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在;光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体总蛋白的16.2%,免疫印迹试验显示,重组小分子抗体保留了亲本mAb的特异性和力。结论成功地构建50AScFv基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研制基因工程血型检定抗体奠定了基础。
关键词
ABO血型系统
基因工程
抗体
半链抗体表达
Keywords
ABO blood group substance
engineering antibody
ScFv
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人红细胞血型A抗原单链抗体原核表达及活性测定
王长军
唐家琪
李先富
潘秀珍
操敏
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
3
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