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蒙古冰草半胱氨酸蛋白酶基因MwCP1的克隆 被引量：2
1
作者 敖特根白音 杨学举 +3 位作者 郎明林 云锦凤 赵勇 陈桂顺 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期11-17,共7页
利用RACE技术从蒙古冰草中分离到1个半胱氨酸蛋白酶基因序列,命名为MwCP1,Genbank注册号为KJ534636。序列分析表明:MwCP1基因全长1042bp,含有1个579bp的开放型阅读框,编码192个氨基酸,含有1个CP保守区,属于CP1家族成员。基因编码蛋白的... 利用RACE技术从蒙古冰草中分离到1个半胱氨酸蛋白酶基因序列,命名为MwCP1,Genbank注册号为KJ534636。序列分析表明:MwCP1基因全长1042bp,含有1个579bp的开放型阅读框,编码192个氨基酸,含有1个CP保守区,属于CP1家族成员。基因编码蛋白的分子量为20.908KD,理论等电点为5.339,属于亲水性、非跨膜蛋白。其编码的氨基酸序列与Genbank中粗山羊草半胱氨酸蛋白酶蛋白(登录号:EMT10192.1)具有较高的氨基酸一致性。 展开更多
关键词 蒙古冰草 半胱氨酸蛋白酶基因 克隆 序列分析
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华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆和表达(英文)
2
作者 吴德 余新炳 +5 位作者 吴忠道 徐劲 陈守义 胡旭初 彭寨玉 何东苟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期173-176,共4页
华支睾吸虫病严重危害着人们的身体健康 ,研制快速诊断试剂盒对于华支睾吸虫病的防治显得非常重要。目前 ,市场上销售的快速诊断试剂盒 ,其诊断抗原主要来自华支睾吸虫成虫的粗抗原 ,抗原敏感性高 ,特异性却不高 ,所以寻找并生产基因工... 华支睾吸虫病严重危害着人们的身体健康 ,研制快速诊断试剂盒对于华支睾吸虫病的防治显得非常重要。目前 ,市场上销售的快速诊断试剂盒 ,其诊断抗原主要来自华支睾吸虫成虫的粗抗原 ,抗原敏感性高 ,特异性却不高 ,所以寻找并生产基因工程重组抗原有着非常重要的意义。半胱氨酸蛋白酶是一类含有半胱氨酸残基的蛋白水解酶 ,多种寄生虫都能产生或分泌半胱氨酸蛋白酶 ,它对寄生虫的生存、发育以及在寄生虫与宿主的相互关系上均有着极其重要的作用。越来越多的科研工作者开始重视它的免疫诊断价值 ,本文研究的目的是为华支睾吸虫快速诊断试剂盒寻找基因工程重组抗原。我们根据已知华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因序列设计一对引物 ,用文库构建试剂盒提取总RNA ,并反转录成cDNA ,以cDNA为模板 ,通过PCR技术从cDNA中扩增出目的基因。PCR产物通过测序鉴定 ,用工具酶BamHI和XholI同时消化目的基因和pGEX - 4T - 1原核表达载体 ,消化后的产物用连接酶连接 ,构建成 pGEX - 4T - 1-CP重组体 ,并将其转入Jm10 9大肠杆菌中。用PCR初步筛选阳性克隆 ,共获得阳性克隆 8个 ,再用双酶切和测序进一步鉴定初步筛选的阳性克隆。挑取阳性克隆 ,37℃条件下用IPTG诱导重组体表达 ,表达产物通过SDS -PAGE电泳鉴定。通过上述实验 。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 半胱氨酸蛋白酶基因 扩增 克隆 表达
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猬裂头蚴27kD半胱氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及生物信息学分析 被引量：1
3
作者 焦梦涵 刘艳丹 +1 位作者 陈艳 李金福 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期120-125,共6页
目的克隆、表达猬裂头蚴27kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)基因,并分析其生物学特性。方法提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增27kDa半胱氨酸蛋白酶(27kDa CP)基因,克隆入pMD-19T载体,测序正确后将27kDa-CP基因亚克... 目的克隆、表达猬裂头蚴27kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)基因,并分析其生物学特性。方法提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增27kDa半胱氨酸蛋白酶(27kDa CP)基因,克隆入pMD-19T载体,测序正确后将27kDa-CP基因亚克隆入表达载体pET-28a(+),构建pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒,转入大肠埃希菌Transetta(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白27kDa CP。用镍离子柱亲和层析法纯化目的蛋白。表达产物用SDS-PAGE及Western Blotting进行分析,并运用NCBI和ExPASy等有关的生物信息学分析工具,对27CP基因及其编码蛋白进行预测和分析。结果 CP基因序列的开放阅读框长为1 011bp,去除信号肽序列长954bp,登录到GenBank,获得登录号ANA52569。该基因编码一个含317个氨基酸的蛋白多肽,属于Peptidase_C39_like超家族,理论分子量约35 669.9Da,等电点5.92。pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒经IPTG诱导后,蛋白在大肠埃希菌中成功表达,经纯化后的蛋白利用Western blotting检测,证明与预期大小相符,且与猬裂头蚴感染阳性血清有较好的结合反应。结论成功克隆、表达了猬裂头蚴27kDa CP基因,获知CP基因及其编码的氨基酸序列和生物信息学。 展开更多
关键词 猬迭宫绦虫 裂头蚴 半胱氨酸蛋白酶基因 原核表达 生物信息学
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水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转化桑树获得转基因植株的初报 被引量：12
4
作者 王洪利 楼程富 +2 位作者 张有做 谈建中 焦锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期291-294,共4页
利用基因枪法将水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 (OC)导入桑树组织 ,经抗性筛选和组织培养获得再生植株 ,通过对转基因植株的PCR Southern杂交及RNA点杂交等检测 ,证实OC基因转化桑树成功 ,为选育抗虫性桑树品种奠定了基础。
关键词 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 桑树 遗传转化 基因枪 抗虫育种 转基因植株
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乌鳢半胱氨酸蛋白酶3基因克隆及表达分析
5
作者 赵浩航 丘金珠 +6 位作者 周秀莹 唐怀庆 赵天珍 梁富 宋海霞 喻大鹏 宋长江 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期3405-3415,共11页
【目的】克隆和表达分析乌鳢(Channa argus)的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase)3基因(caspase-3),为探究该基因在乌鳢机体中的免疫应答作用及在其他鱼类免疫上的作用提供理论依据。【方法】根据NCBI公布的乌鳢... 【目的】克隆和表达分析乌鳢(Channa argus)的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase)3基因(caspase-3),为探究该基因在乌鳢机体中的免疫应答作用及在其他鱼类免疫上的作用提供理论依据。【方法】根据NCBI公布的乌鳢基因组信息,对乌鳢的caspase-3基因序列进行克隆,对推导的caspase-3氨基酸序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测caspase-3基因在健康乌鳢各组织中的表达分布及在不同刺激物[鰤鱼(Seriola quinqueradiata)诺卡氏菌(Nocardia seriolae)、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)]刺激下的时序表达情况。【结果】caspase-3基因序列全长855 bp,编码284个氨基酸残基,蛋白分子量为31.069 kD,理论等电点(p I)为6.17。caspase-3蛋白含有1个CASc结构域。多序列比对结果显示,乌鳢的caspase-3氨基酸序列与秘鲁笛鲷(Lutjanus peru)的caspase-3氨基酸序列相似度最高,达81.7%;系统发育进化树分析结果表明,乌鳢的caspase-3氨基酸序列与秘鲁笛鲷的caspase-3氨基酸序列聚为一支。实时荧光定量PCR检测结果表明,乌鳢caspase-3基因在肌肉、皮肤、鳃、心脏、胸腺、脑、头肾、脾脏、肝脏和血液等组织中均有表达,其中在脾脏和头肾的表达量最高;在不同刺激物刺激下,caspase-3基因在乌鳢脾脏、肾脏、血液和肝脏组织中的表达量均发生显著变化(P<0.05);用灭活鰤鱼诺卡氏菌、LPS和PolyI:C孵育乌鳢头肾白细胞后,caspase-3基因表达量均显著升高,且具有明显的时间依赖性。【结论】乌鳢caspase-3基因可能在乌鳢抵御细菌和病毒入侵的免疫反应中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 乌鳢 半胱氨酸蛋白酶3基因(caspase-3) 组织分布 免疫应答
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森林草莓RD21基因的克隆与蛋白酶域的原核表达及抗血清制备
6
作者 余维琪 吴浩 +2 位作者 杨先初 宋培培 江彤 《西北农业学报》 北大核心 2025年第4期702-708,共7页
为了明确森林草莓(Fragariavesca)RD21蛋白对草莓镶脉病毒致病性的影响,本研究采用原核表达技术获得RD21蛋白酶域(Protease)重组蛋白并制备其抗血清。先克隆森林草莓半胱氨酸蛋白酶RD21基因,分析RD21基因的遗传多样性。再将RD21基因蛋... 为了明确森林草莓(Fragariavesca)RD21蛋白对草莓镶脉病毒致病性的影响,本研究采用原核表达技术获得RD21蛋白酶域(Protease)重组蛋白并制备其抗血清。先克隆森林草莓半胱氨酸蛋白酶RD21基因,分析RD21基因的遗传多样性。再将RD21基因蛋白酶域片段(RD21-3)克隆至原核表达载体pET-32a,重组质粒pET-RD21-3转化大肠杆菌,IPTG诱导RD21蛋白酶域融合蛋白表达。结果表明,RD21基因序列全长1410nt,编码470个氨基酸。序列比对发现,森林草莓RD21基因与9种蔷薇科植物RD21基因的序列相似性较高,为83.4%~94.2%。构建RD21基因系统关系树,发现森林草莓与其他蔷薇科植物的RD21基因聚成一个分支,说明森林草莓与蔷薇科植物的亲缘关系较近。用纯化的RD21蛋白酶域融合蛋白免疫家兔,获得融合蛋白的抗血清。ELISA法测定抗血清效价达1∶512000,Westernblot分析显示,制备的抗血清可与融合蛋白发生特异性反应,说明本研究制备的RD21蛋白酶域融合蛋白的抗血清能够成功检测出靶标蛋白。 展开更多
关键词 森林草莓 半胱氨酸蛋白酶RD21基因 蛋白酶域 原核表达 抗血清
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CSTB基因启动子区十二核苷酸重复序列d[CGCGGGGCGGGG]n形成串联G-四链体的研究
7
作者 李馨妍 刘亚泠 +1 位作者 于凯男 崔晓杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1374-1380,共7页
DNA串联重复序列扩展是引起多种神经性疾病的一个重要因素。对重复序列形成的高级结构研究可为相关疾病的发病机制和治疗策略提供重要的理论基础。位于半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(cystatin B,CSTB)基因启动子区的一段十二核苷酸重复序列d[CG... DNA串联重复序列扩展是引起多种神经性疾病的一个重要因素。对重复序列形成的高级结构研究可为相关疾病的发病机制和治疗策略提供重要的理论基础。位于半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(cystatin B,CSTB)基因启动子区的一段十二核苷酸重复序列d[CGCGGGGCGGGG]n的扩展是导致其表达异常,进而引起神经退行性疾病进行性肌阵挛癫痫(progressive myoclonus epilepsy,EPM1)的主要原因。但对其可能机制及高级结构的研究尚未见报道。本研究采用圆二色光谱法(circular dichroism spectroscopy,CD)和核磁共振波谱法(nuclear magnetic resonance spectroscopy,NMR),对含有多个重复单元的d[CGCGGGGCGGGG]n(n=2,4)形成的高级结构进行了解析。结果发现,含有2个重复单元的d[CGCGGGGCGGGG]2序列,可在1价阳离子K+诱导下,形成稳定的平行链G-四链体结构。而含4个重复单元的d[CGCGGGGCGGGG]4序列,可在分子内形成串联G-四链体堆叠排列。说明含多个重复单元的十二核苷酸重复序列,可形成分子内串联堆叠G-四链体高级结构。这些结果为十二核苷酸重复序列扩展,导致CSTB基因表达异常的分子机制提供了一种可能的合理假说,并为后续寻找小分子配体识别十二核苷酸串联重复扩展序列,进而调控CSTB基因表达的EPM1治疗策略提供了理论基础。 展开更多
关键词 DNA串联重复序列 G-四链体 半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(cystatin B CSTB)基因 进行性肌阵挛癫痫(EPM1)
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重组腺病毒r-caspase3的靶向性实验研究
8
作者 王炜 沈浩元 刘猛 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第14期2506-2508,共3页
目的:观察构建靶向性反向半胱氨酸蛋白酶3(r-caspase3)重组腺病毒对AFP表达阳性肝癌细胞凋亡诱导的效果和特异性。方法:采用AFP表达强阳性细胞HepG2、表达弱阳性细胞7721、正常肝细胞L-02以及AFP表达阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别感染... 目的:观察构建靶向性反向半胱氨酸蛋白酶3(r-caspase3)重组腺病毒对AFP表达阳性肝癌细胞凋亡诱导的效果和特异性。方法:采用AFP表达强阳性细胞HepG2、表达弱阳性细胞7721、正常肝细胞L-02以及AFP表达阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别感染构建之重组腺病毒Ad-r-caspase3、Ad-EAFPPALB/r-caspase3及Ad-PALB/r-caspase3,SRB染色测定O.D值,计算细胞死亡率和IC50;流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果:HepG2、7721细胞对各腺病毒敏感程度为Ad-EAFPPALB/r-caspase3>Ad-PALB/r-caspase3>Ad-r-caspase3;流式细胞术检测结果显示重组腺病毒Ad-EAFPPALB/r-caspase3具有极强的凋亡选择性,AFP表达越强,凋亡指数越高。结论:靶向性Ad-EAFP-PALB/r-caspase3重组腺病毒具有肝细胞性肝癌凋亡选择性,同AFP表达呈正相关。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 腺病毒 反向半胱氨酸蛋白酶3基因 靶向性
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