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家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶基因的克隆及表达和亚细胞定位 被引量:2
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作者 林立鹏 潘国庆 +6 位作者 李田 马成 边茂飞 党晓群 罗洁 邓远洪 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期82-91,共10页
半胱氨酸脱硫酶是一类活性依赖于磷酸吡哆醛的酶类,可催化L-半胱氨酸转化为L-丙氨酸和硫烷硫原子,为铁硫簇组装提供硫原子。基于家蚕微孢子虫基因组数据,克隆了家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶(NbNfs)基因。序列结构分析显示NbNfs含有其活... 半胱氨酸脱硫酶是一类活性依赖于磷酸吡哆醛的酶类,可催化L-半胱氨酸转化为L-丙氨酸和硫烷硫原子,为铁硫簇组装提供硫原子。基于家蚕微孢子虫基因组数据,克隆了家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶(NbNfs)基因。序列结构分析显示NbNfs含有其活性所需的保守氨基酸位点,但不具有线粒体型N端导肽;系统发育分析表明微孢子虫半胱氨酸脱硫酶与真菌线粒体型半胱氨酸脱硫酶聚为一类,属于类群Ⅰ,起源于α-变形细菌;共线性分析表明半胱氨酸脱硫酶基因在不同微孢子虫之间其基因座位保守,具有共线性。构建重组质粒pET30a(+)-NbNfs,并转化到E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达NbNfs融合蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后,将融合蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,Western blotting检测NbNfs在成熟家蚕微孢子虫具有表达。胶体金免疫定位显示NbNfs主要定位于成熟家蚕微孢子虫的细胞质中。研究结果为家蚕微孢子虫铁硫簇组装途径的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 半胱氨酸脱硫酶 基因克隆 表达 亚细胞定位
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橡胶树半胱氨酸脱硫酶基因的克隆及其在低磷胁迫下的表达分析
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作者 覃怀德 高乐 +3 位作者 高伟 何鹏 王大鹏 韦家少 《湖南农业科学》 2013年第12期1-3,9,共4页
橡胶树是天然橡胶的主要来源,是我国海南、云南等热带地区的重要经济作物。磷是植物所需的三大重要营养元素之一,磷对橡胶树生长发育,产排胶具有重要的作用。研究利用低磷胁迫差减文库获得的EST,克隆了一个橡胶树应答低磷胁迫基因半胱... 橡胶树是天然橡胶的主要来源,是我国海南、云南等热带地区的重要经济作物。磷是植物所需的三大重要营养元素之一,磷对橡胶树生长发育,产排胶具有重要的作用。研究利用低磷胁迫差减文库获得的EST,克隆了一个橡胶树应答低磷胁迫基因半胱氨酸脱硫酶(Cysteine Desulfurase,HbNfs),并利用实时荧光定量PCR技术进行表达分析。结果表明:HbNfs全长1 481 bp,包含一个1 182 bp的完整读码框(ORF),编码395个氨基酸。实时荧光定量分析表明HbNfs在橡胶树根中受低磷诱导上调表达,表明该基因可能在应答低磷胁迫中起重要作用。 展开更多
关键词 橡胶树 半胱氨酸脱硫酶 基因克隆 基因表达
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半胱氨酸脱硫酶突变体H104Q,E156Q,D180G,Q183E和K206A通过改变对磷酸吡哆醛的结合影响酶活性
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作者 张婷 李唐 +1 位作者 赵津 谭国强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期944-951,共8页
大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶(cysteine desulfurase,Isc S)是一类依赖磷酸吡哆醛(pyridoxal phosphate,PLP)的同质二聚体的酶.IscS能催化游离底物L-半胱氨酸脱硫,生成L-丙氨酸和单质硫.在此催化过程中,可形成与酶结合的半胱氨酸过硫化物中间... 大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶(cysteine desulfurase,Isc S)是一类依赖磷酸吡哆醛(pyridoxal phosphate,PLP)的同质二聚体的酶.IscS能催化游离底物L-半胱氨酸脱硫,生成L-丙氨酸和单质硫.在此催化过程中,可形成与酶结合的半胱氨酸过硫化物中间物,并出现了7种具有不同特征性吸收峰的中间反应物.为了研究PLP的结合及中间反应物的形成及累积,对IscS中与PLP结合相关,及IscS半胱氨酸活性口袋中特定氨基酸残基位点(His104,Glu156,Asp180,Gln183和Lys206)进行定点突变,结果发现:1)IscS突变体H104Q、D180G、Q183E、K206A对PLP的结合能力具有不同程度的减弱,酶的活性明显降低甚至消失,PLP与蛋白结合的特异吸收峰消失,或发生明显偏移并出现新的吸收峰,且这些新出现的吸收峰又与蛋白形成的各种中间反应物的吸收峰一致;2)IscS突变体E156Q的活性增高,PLP与蛋白结合的吸收峰明显增加.这些结果都表明,IscS氨基酸残基可通过影响PLP的结合及质子转移引起催化过程中不同中间反应物的形成及累积,同时提高或降低蛋白的活性. 展开更多
关键词 半胱氨酸脱硫酶(IscS) 吡哆醛(PLP) 酮亚胺 醛亚胺
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