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实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测火器伤骨折愈合过程中骨形态发生蛋白的表达
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作者 李秉胜 陈英剑 +3 位作者 张强 范长春 郑吉波 蔡锦方 《中国康复理论与实践》 CSCD 2006年第11期963-965,共3页
目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测兔火器伤骨折愈合过程中骨形态发生蛋白(BMP)-2mRNA水平。方法建立外固定架固定一期治疗兔股骨火器伤骨折的动物模型和BMP-2 mRNA表达水平的SYBR G reenⅠ荧光定量RT-PCR方法,分别... 目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测兔火器伤骨折愈合过程中骨形态发生蛋白(BMP)-2mRNA水平。方法建立外固定架固定一期治疗兔股骨火器伤骨折的动物模型和BMP-2 mRNA表达水平的SYBR G reenⅠ荧光定量RT-PCR方法,分别于术后第1、2、3、4周取断端组织,通过实时荧光定量RT-PCR检测标本标本中BMP-2 mRNA水平。结果在对照组,创伤后的兔骨组织BMP-2 mRNA表达水平在1周开始增高,在第2周达到高峰后下降,第4周即可恢复正常。而实验组,受枪伤的兔骨组织BMP-2 mRNA表达水平在第3周表达最高,与对照组相比,升高较慢,表达量也偏低(P<0.05)。结论BMP-2mRNA SYBR G reenⅠ荧光定量RT-PCR可以很好地反应枪击伤对兔骨组织BMP-2 mRNA表达水平的影响。枪击伤后的兔骨组织BMP-2 mRNA表达水平与对照组相比升高较慢,表达量也偏低。 展开更多
关键词 火器伤骨折 骨形态发生蛋白(BMP-2) 实时荧光定量 逆转录聚合反应(rt-pcr)
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实时RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶mRNA用于乳腺癌鉴别诊断及与c-Myc基因的相关性 被引量:3
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作者 唐峰 陈忠清 +5 位作者 包芸 朱腾芳 王虹 朱虹光 许祖德 胡锡琪 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期727-731,共5页
目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定... 目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定量RT-PCR技术(Real-ti me RT-PCR)定量检测hTERT和c-Myc基因的转录水平。结果以NhTERT=10为临界值,所有正常组织和良性病变NhTERT值均小于临界值,而hTERT基因转录升高的导管原位癌及浸润性导管癌其NhTERT值均大于此临界值。显示hTERT和c-Myc基因转录水平呈正相关(γ=0.7395,P<0.01)。结论实时荧光定量PCR技术检测hTERT基因表达具有高敏感性和特异性,能为常规病理学诊断提供客观的参考指标,从而提高乳腺不典型导管增生与导管原位癌鉴别诊断的准确性。原癌基因c-Myc转录水平上调可能与乳腺癌hTERT基因转录激活有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒 实时荧光定量逆转录聚合链式反应 人端粒逆转录 C-MYC原癌基因
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半定量RT-PCR法检测赤霞珠葡萄白藜芦醇合酶STS基因的表达
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作者 张晓丽 秦晨亮 代红军 《湖北农业科学》 2016年第3期756-758,763,共4页
以赤霞珠葡萄(Vitis vinifera L.)为材料,以Actin基因为内参,采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测葡萄果实发育过程中白藜芦醇合酶(STS)基因表达量的变化,以期建立适于检测该基因表达的RT-PCR试验体系。结果表明,在退火温度58... 以赤霞珠葡萄(Vitis vinifera L.)为材料,以Actin基因为内参,采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测葡萄果实发育过程中白藜芦醇合酶(STS)基因表达量的变化,以期建立适于检测该基因表达的RT-PCR试验体系。结果表明,在退火温度58℃,扩增循环31次的时候,STS基因能够进行较好的扩增。在赤霞珠葡萄浆果发育的过程中,花后20、50 d STS基因表达量较少,在花后80 d表达量增到最大,花后110 d又降低。 展开更多
关键词 赤霞珠葡萄(Vitis VINIFERA L.) 白藜芦醇合(STS)基因 定量逆转录聚合链式反应(rt-pcr)
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一步法逆转录荧光定量PCR检测食源性沙门氏菌 被引量:4
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作者 周晓清 李苗云 +5 位作者 刘杰 赵改名 柳艳霞 田玮 黄现青 高晓平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第12期182-188,共7页
建立采用一步法逆转录荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测食源性沙门氏菌的检测方法并初步应用。以沙门氏菌的invA基因为目的基因设计引物,优化PCR反应体系和反应条件,同时进行特异性、灵敏度和重复性实验;并用所建立的方法检测人工污染... 建立采用一步法逆转录荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测食源性沙门氏菌的检测方法并初步应用。以沙门氏菌的invA基因为目的基因设计引物,优化PCR反应体系和反应条件,同时进行特异性、灵敏度和重复性实验;并用所建立的方法检测人工污染的猪肉样品,通过与传统计数方法的结果对比验证所建立方法的适用性。优化后的逆转录荧光定量PCR检测条件为:42℃、5min,95℃、10s,95℃、5s,67℃、34s;此步骤进行40个循环;上、下游引物的最佳终浓度均为0.16μmol/L。结果表明:该方法的特异性为100%;重复性良好;对沙门氏菌的检测下限为150CFU/mL;检测人工污染食品样品的结果100%符合传统计数结果。建立的检测方法具有快速、灵敏、简单等特点,非常适用于食源性沙门氏菌的检测。 展开更多
关键词 沙门氏菌 RNA 逆转录荧光定量聚合链式反应
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用半定量RT-PCR方法分析小麦TaMlo-A1c基因的表达 被引量:28
5
作者 张丽娜 牛吉山 于玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1368-1371,共4页
以小麦稳定表达的肌动蛋白基因(Actin)作为对照,利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对与抗白粉病有关的小麦(TriticumaestivumL.)TaMlo-A1c基因的表达进行了研究。结果发现:TaMlo-A1c基因在小麦的叶、茎、根中均表达,... 以小麦稳定表达的肌动蛋白基因(Actin)作为对照,利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对与抗白粉病有关的小麦(TriticumaestivumL.)TaMlo-A1c基因的表达进行了研究。结果发现:TaMlo-A1c基因在小麦的叶、茎、根中均表达,穗中不表达,在白粉菌(Blumeriagraminis(DC.)E.O.Speerf.sp.triticiEm.Marchal,Bgt)诱导不同时间后小麦叶片中的表达稍微有所增强。研究表明,用半定量RT-PCR技术研究小麦基因表达,具有特异性高、操作简便和可靠性强的优点。 展开更多
关键词 小麦 表达 TaMto—Alc基因 肌动蛋白基因 定量转录聚合链式反应
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用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的影响因素 被引量:5
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作者 陈名红 陈毅坚 +2 位作者 叶艳青 苏源 李成云 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期28-30,33,共4页
半定量逆转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)以其灵敏、简捷及特异性高等优点已逐渐成为分析基因表达水平的一种有效手段。着重对用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的相关影响因素进行了综合论述,并讨论了半定量RT-PCR法在基因表达研究... 半定量逆转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)以其灵敏、简捷及特异性高等优点已逐渐成为分析基因表达水平的一种有效手段。着重对用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的相关影响因素进行了综合论述,并讨论了半定量RT-PCR法在基因表达研究方面的应用潜力。 展开更多
关键词 定量逆转录聚合链式反应 基因表达 影响因素
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基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞 被引量:11
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作者 祝儒刚 吕淑霞 +1 位作者 刘月萍 张良 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期219-225,共7页
将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法。结果表明:使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA... 将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法。结果表明:使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA的最佳曝光时间为20min;不抑制副溶血弧菌活细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度为2.0μg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度为1.0μg/mL;人工污染牡蛎样品,不经过富集,在2.0×103~2.0×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且纯培养与人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测限均为2×103CFU,即人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞;冻融实验表明,在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时,冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响。该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。 展开更多
关键词 叠氮溴化乙锭(EMA) 实时定量聚合链式反应(rt-pcr) 海产品 副溶血弧菌 活细胞
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水稻GA20ox-2基因mRNA的TaqMan荧光定量RT-PCR检测 被引量:4
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作者 高东 何霞红 +2 位作者 王云月 李成云 朱有勇 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期309-314,共6页
成功建立了一项基于TaqMan实时荧光定量的RT-PCR技术,定量分析水稻半矮化关键基因之一GA20ox-2转录水平。该技术体系中重组质粒标准品的制备方法具有很好的实用性;质粒标准品对基因GA20ox-2表达的实时定量准确、可靠、便捷。标准曲线表... 成功建立了一项基于TaqMan实时荧光定量的RT-PCR技术,定量分析水稻半矮化关键基因之一GA20ox-2转录水平。该技术体系中重组质粒标准品的制备方法具有很好的实用性;质粒标准品对基因GA20ox-2表达的实时定量准确、可靠、便捷。标准曲线表明,所建立的GA20ox-2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,灵敏度高,可达102拷贝;线性范围广,可达102~107拷贝;扩增效率高(E=100.3%);稳定性、重复性好,可靠性高,批内和批间变异系数仅分别为0.12%~0.31%和0.21%~0.34%;循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r=0.999),可对GA20ox-2基因表达进行准确实时定量。 展开更多
关键词 水稻 矮秆基因 基因表达 实时定量 逆转录-聚合链式反应 探针
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转录因子κB和早期生长反应因子1在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达 被引量:5
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作者 丁艳 赵雷 +3 位作者 贾德胜 黄志华 梅红 彭罕鸣 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期879-884,共6页
目的研究转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和早期生长反应因子1(early growthresponse factor-1,Egr-1)在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达及意义。方法将α-异硫氰酸萘酯(ANIT)按50 mg/kg 一次灌胃大鼠,建立急... 目的研究转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和早期生长反应因子1(early growthresponse factor-1,Egr-1)在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达及意义。方法将α-异硫氰酸萘酯(ANIT)按50 mg/kg 一次灌胃大鼠,建立急性肝内胆汁淤积性肝损伤的动物模型,免疫组织化学法和实时荧光定量 PCR 分别检测灌胃后24、48、72 h 肝组织中 NF-κB p65蛋白表达和 Egr-1 mRNA 表达量,全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)。结果模型组24、48、72 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量分别为(12.73±3.02)×10^(-2)、(8.19±2.29)×10^(-2)、(5.79±0.78)×10^(-2),24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05);模型组24、48、72 h肝组织 NF-κB p65核表达阳性细胞率分别为48.3%、26.5%、2.7%,其中24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级分别与同一时间点的血清 TB、DB、ALT 呈正相关(P 均<0.05);模型组24、48 hEgr-1 mRNA 表达量分别与同一时间点的血清TB、DB、AIT、GGT 呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 NF-κB p65、Egr-1 mRNA 表达量与72 h 时血清 TB、DB、ALT、GGT 无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级与同一时间点的血清 GGT 亦无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 Egr-1 mR-NA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级无相关关系(P 均>0.05)。结论 NF-κB和 Egr-1在肝内胆汁淤积性肝损伤肝组织中表达增高,与肝损伤程度相关,参予了肝内胆汁淤积性肝损伤的病理过程。[临床儿科杂志,2008,26(10):879-884] 展开更多
关键词 核因子ΚB 早期生长反应因子1 免疫组化 实时荧光定量逆转录聚合链式反应 胆汁淤积 肝损伤
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IL-12调节蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达 被引量:3
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作者 张慧云 林青 +3 位作者 林丽艳 张忠芳 杨海伟 何韶衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期612-614,618,共4页
目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响。方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后,在不同时间点,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM),在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在肥大... 目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响。方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后,在不同时间点,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM),在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在肥大细胞P815表面和胞内的表达情况。结果:IL-12下调肥大细胞膜表面PAR-2蛋白的表达,上调肥大细胞膜表面和胞质内PAR-4蛋白的表达,IL-12抗体的应用可阻断IL-12对肥大细胞PARs蛋白表达的影响;IL-12上调肥大细胞PAR-1、3、4 mRNA的表达,下调PAR-2 mRNA的表达。结论:IL-12在过敏性炎症反应中的调节作用可能与IL-12调节肥大细胞PARs表达有关。 展开更多
关键词 蛋白激活受体 肥大细胞 实时定量逆转录聚合链式反应(q-rt-pcr) 流式细胞术(FCM)
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RT-PCR检测猪粪便中猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立 被引量:2
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作者 刘才根 何后军 +2 位作者 罗咏梅 邬向东 潘金发 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期434-436,442,共4页
通过逆转录-聚合酶链扩增(RT-PCR)反应,建立从猪粪便中检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RNA的方法,以此方法检测了2个猪场8份样本,结果显示6份猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性。
关键词 PRRSV 逆转录-聚合链式反应(rt-pcr) 建立
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结核分枝杆菌Ag85B mRNA定量检测作为化疗监测指标的初步研究 被引量:1
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作者 陆宇 高孟秋 +2 位作者 初乃惠 马丽萍 朱孟秋 《中国防痨杂志》 CAS 2005年第5期281-284,共4页
目的探讨痰标本中结核分枝杆菌Ag85B mRNA分子作为肺结核患者化疗反应监测指标的可行性和临床价值。方法应用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对15例初治涂阳肺结核患者应用标准短程化疗方案治疗过程中2、4、7、14、306、0 d痰标本的结... 目的探讨痰标本中结核分枝杆菌Ag85B mRNA分子作为肺结核患者化疗反应监测指标的可行性和临床价值。方法应用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对15例初治涂阳肺结核患者应用标准短程化疗方案治疗过程中2、4、7、14、306、0 d痰标本的结核分枝杆菌Ag85B mRNA进行系列检测,并与培养法(CFU)作比较。结果痰标本中结核分枝杆菌Ag85B mRNA在治疗的前2 d下降明显且与CFU的下降基本一致,治疗7 d Ag85B mRNA检测阴性11例,治疗14 d阴性的12例,治疗30 d除1例阳性外,其余均为阴性,治疗60 d时全部阴性。结论结核分枝杆菌Ag85B mRNA在接受治疗的肺结核患者的痰标中快速下降,是活菌数量下降的反映,痰标本中mRNA的变化可作为快速评价化疗反应的分子指标。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 结核 mRNA rt-pcr 化疗监测 MRNA定量检测 结核分枝杆菌 AG85B 化疗反应 监测指标 定量逆转录聚合反应 步研究 标准短程化疗方案 肺结核患者
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黄瓜花叶病毒的RT-PCR检测 被引量:4
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作者 王惠哲 李淑菊 +1 位作者 霍振荣 庞金安 《长江蔬菜》 2004年第9期40-41,共2页
根据黄瓜花叶病毒(CMV)的复制酶基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,CMV质粒作为RT-PCR反应的阳性对照,进行cDNA合成和PCR扩增。对2002-2003年采集的98份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的... 根据黄瓜花叶病毒(CMV)的复制酶基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,CMV质粒作为RT-PCR反应的阳性对照,进行cDNA合成和PCR扩增。对2002-2003年采集的98份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的767bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物。结果表明98份材料中96.94%检测到CMV。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 rt-pcr 雀麦花叶病毒科 逆转录-聚合链式反应 质粒
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烟草环斑病毒RT-PCR检测体系的优化 被引量:3
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作者 郇晓雪 刘晓宇 +5 位作者 房乐 杜传印 李广强 耿超 李向东 田延平 《山东农业科学》 北大核心 2021年第6期98-102,共5页
烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物。建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障。本研究在分析... 烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物。建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障。本研究在分析引物的特异性、优化退火温度及dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶浓度的基础上,建立了完善的TRSV RT-PCR检测体系。筛选出的TRSV特异性引物对为1-1F/1-1R,在退火温度为53℃、dNTPs终浓度为0.075 mmol/L、引物终浓度为0.30μmol/L、Taq DNA聚合酶终浓度为0.035 U/μL条件下检测效率最高,可从发病植物总RNA量为0.090 ng中检测到目的片段。研究结果对准确灵敏地检测TRSV具有重要意义。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒 检测体系 逆转录聚合链式反应(rt-pcr) 优化
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雌孕激素对SMMC-7721人肝癌细胞α-1,6岩藻糖基转移酶的调控 被引量:1
15
作者 耿飞 石必枝 吴兴中 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期161-164,177,共5页
目的 探讨雌孕激素在肝癌细胞中对于α - 1 ,6岩藻糖基转移酶表达的调控。方法 通过对SMMC- 772 1细胞分别按不同时间点和不同浓度给予雌二醇和孕酮处理 ,观察细胞生长状态和形态学的改变 ,并进行半定量逆转录 -聚合酶链式反应和小扁... 目的 探讨雌孕激素在肝癌细胞中对于α - 1 ,6岩藻糖基转移酶表达的调控。方法 通过对SMMC- 772 1细胞分别按不同时间点和不同浓度给予雌二醇和孕酮处理 ,观察细胞生长状态和形态学的改变 ,并进行半定量逆转录 -聚合酶链式反应和小扁豆凝集素 (LCA)印迹分析以检测α - 1 ,6岩藻糖基转移酶基因 (FUT8)转录水平和底物蛋白核心岩藻糖基化水平的改变。结果 雌激素能明显上调FUT8基因的转录 ,并显著提高Mr 为1 35× 1 0 3 、1 0 0× 1 0 3 和 6 0× 1 0 3 LCA反应阳性的糖蛋白的表达水平 ,同时改善了细胞的生长状态 ;而孕激素则可以明显下调FUT8基因的转录 ,并显著降低Mr 为 1 35× 1 0 3 、1 1 5× 1 0 3 、1 0 0× 1 0 3 和 6 0× 1 0 3 的LCA反应阳性的糖蛋白的表达水平 ,同时改变了细胞的正常形态。结论 雌孕激素能通过调节α - 1 ,6岩藻糖基转移酶的表达 ,改变靶蛋白的核心岩藻糖基化修饰 ,从而参与肿瘤的发生发展过程。 展开更多
关键词 岩藻糖基转移 雌孕激素 人肝癌细胞 SMMC-7721细胞 调控 聚合链式反应 细胞生长状态 小扁豆凝集素 转移基因 不同浓度 不同时间 印迹分析 转录水平 发生发展 糖基化 糖蛋白 表达 雌二醇 形态学 逆转录 定量 雌激素 LCA 靶蛋白 Mr 阳性
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扁蓿豆MrERF1的转录激活活性、亚细胞定位及表达分析 被引量:3
16
作者 雷雨晴 张业猛 王海庆 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1119-1127,共9页
乙烯应答因子(ethylene responsive factor,ERF)广泛存在于植物中,在植物生长、发育和逆境胁迫响应的调节中具有重要作用。本研究根据扁蓿豆(Medicago ruthenica)低温胁迫转录组测序信息,设计特异性引物,利用反转录聚合酶链式反应(rever... 乙烯应答因子(ethylene responsive factor,ERF)广泛存在于植物中,在植物生长、发育和逆境胁迫响应的调节中具有重要作用。本研究根据扁蓿豆(Medicago ruthenica)低温胁迫转录组测序信息,设计特异性引物,利用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆了一个受低温胁迫诱导表达的ERF转录因子基因MrERF1。序列分析表明,MrERF1基因包含了一个948 bp的开放阅读框,编码由316个氨基酸组成的序列中含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)MtABR1蛋白的同源性最高。构建表达MrERF1融合增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的载体,本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片下表皮细胞瞬时表达结果证明Mr ERF1蛋白定位于细胞核。结果表明,构建pGBKT7-MrERF1载体转化AH109酵母感受态细胞具有转录激活活性。对MrERF1在不同组织中的表达分析发现,该基因在扁蓿豆的茎、叶、芽和花序中均有表达,但在根中不表达。进一步分析发现,MrERF1基因的转录与光周期和生物节律无关。此外,MrERF1的表达受高盐、干旱、水淹、低温和脱落酸(abscisic acid,ABA)诱导。本研究表明,MrERF1能够响应多种非生物胁迫,为进一步分析MrERF1的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 扁蓿豆 ERF转录因子 亚细胞定位 转录激活 表达分析 定量转录聚合链式反应 非生物胁迫
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食源性沙门氏菌磁性纳米粒子RT-PCR检测方法的研究
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作者 张弛 楮庆华 +9 位作者 孟瑾 杨捷琳 顾鸣 韩奕奕 沈鹤柏 赵渝 郭鲁申 李敏 支援 包建强 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第22期293-297,共5页
建立适合食源性沙门氏菌的RT-PCR检测体系。根据沙门氏菌的转录起始因子rpoD设计引物Salmrpod2/5,以rpoD基因的mRNA为检测对象,在样品制备时采用新型的磁性纳米粒子分离mRNA技术,建立快速检测食品中沙门氏菌的逆转录聚合酶链式反应(RT-P... 建立适合食源性沙门氏菌的RT-PCR检测体系。根据沙门氏菌的转录起始因子rpoD设计引物Salmrpod2/5,以rpoD基因的mRNA为检测对象,在样品制备时采用新型的磁性纳米粒子分离mRNA技术,建立快速检测食品中沙门氏菌的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法。结果表明,Salmrpod2/5引物能有效地将沙门氏菌与其他亲缘关系较近的肠杆菌科细菌区分开来。样品中沙门氏菌添加实验表明,该方法对沙门氏菌的检测下限为10CFU/25ml,检测时间少于18h。该方法具有灵敏、特异、快速的特点,适宜于在食品卫生行业中进行推广及应用。 展开更多
关键词 沙门氏菌 磁性纳米粒子 逆转录聚合链式反应(rt-pcr)
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牛病毒性腹泻诊断方法及综合防治 被引量:1
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作者 赵合臣 《北方牧业》 2024年第20期31-31,共1页
牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种疾病。数据显示,动物的品种、饲养模式是导致牛病毒性腹泻病毒感染的高风险因子。检测分析牛群患病情况中,牦牛检出率最高,生物学检测结果为20.0%;散养牛群检出率高于规模化养殖场牛群(6.6%)... 牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种疾病。数据显示,动物的品种、饲养模式是导致牛病毒性腹泻病毒感染的高风险因子。检测分析牛群患病情况中,牦牛检出率最高,生物学检测结果为20.0%;散养牛群检出率高于规模化养殖场牛群(6.6%),为18.1%。可见,牛病毒性腹泻患病率高,且与养殖环境的关系密切。1牛病毒性腹泻诊断方法牛病毒性腹泻最常用效果相对较好的几种诊断方法分别是病毒分离鉴定、电镜观察、分子生物学检测以及血清学检测等。其中病毒分离鉴定是诊断牛病毒性腹泻的常用方法。通过采集病畜的全血、排泄物、血清、脾脏和肠系膜淋巴结等样本,利用牛睾丸或牛肾细胞进行病毒分离和鉴定。分子生物学检测是最灵敏且特异性最明显的检测法,从病畜的耳组织或血液中提取核酸样本,然后利用逆转录聚合酶链式反应、实时荧光定量聚合酶链式反应等技术,对牛病毒性腹泻病毒的基因进行特异性扩增和检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻 分子生物学检测 病毒分离鉴定 牛群 饲养模式 逆转录聚合链式反应 实时荧光定量聚合链式反应 肠系膜淋巴结
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采用RT—PCR技术检测苹果病毒 被引量:15
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作者 张开春 侯义龙 +3 位作者 胡文玉 吴禄平 林珂 张晓明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期370-371,共2页
研究建立了危害仁果类果树的苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的RT—PCR检测体系。其检测灵敏度高,专一性强,为仁果类果树的病毒检测提供了一种分子生物学检测方法。应用该体系对田间的苹果树携带上述... 研究建立了危害仁果类果树的苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的RT—PCR检测体系。其检测灵敏度高,专一性强,为仁果类果树的病毒检测提供了一种分子生物学检测方法。应用该体系对田间的苹果树携带上述三种病毒的情况进行了调查,发现单独感染率和复合率均很高,达84.2%~100%。 展开更多
关键词 逆转录-聚合链式反应 苹果 病毒 检测 rt-pcr
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枸杞多糖对衰老小鼠原癌基因c-myc表达的影响 被引量:28
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作者 陈智松 农志飞 +2 位作者 吴志奎 蔡永春 王蕾 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期356-359,共4页
目的 :探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型 ,分别连续灌服枸杞多糖 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c myc表达的变化。结果 :... 目的 :探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型 ,分别连续灌服枸杞多糖 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c myc表达的变化。结果 :老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠骨髓原癌基因c myc表达量明显高于青年小鼠和正常对照小鼠 (P <0 .0 0 1) ,给药后则可明显得到抑制 (P <0 .0 5 )。结论 :抑制原癌基因c myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一。 展开更多
关键词 枸杞多糖 逆转录-聚合反应 rt-pcr 原癌基因 c-myc D-乳糖 衰老 中医药治疗
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