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半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体
1
作者
刘蓓蓓
韦艳娜
+7 位作者
陈蓉
谢星
倪博
郝飞
张珍珍
白昀
袁厅
冯志新
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2024年第4期682-689,共8页
为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规...
为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示,本研究获得了相对分子质量为3.5×104的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠,在第21 d即可达到融合要求,本试验方法(重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫)较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞,挑选效价较高的3株(9A4、9H6、11F5)进行鉴定,重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160000~1∶320000和1∶200~1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体,为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。
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关键词
非洲猪瘟病毒
pA104蛋白
单克隆抗体
半固体培养法
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职称材料
微生物源生防杀菌剂的筛选方法研究
被引量：
6
2
作者
张志刚
王开梅
+2 位作者
吴兆圆
万中义
方伟
《湖北农业科学》
2022年第18期78-83,共6页
以胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)作为模式靶标,使用半固体培养基法(PDB培养基加入适量琼脂)及平板对峙法(PDA...
以胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)作为模式靶标,使用半固体培养基法(PDB培养基加入适量琼脂)及平板对峙法(PDA培养基),对真菌及放线菌杀菌剂标准菌株的发酵液、上清液和菌丝进行了杀菌活性比较。结果表明,样品的活性与筛选方法和培养时间有直接关联。半固体培养基法中发酵液及菌丝的活性分辨度差,而对真菌及放线菌标准菌株的上清液的活性反应清晰;平板对峙法中,随着培养时间的增加,发酵液及菌丝的活性增强,而真菌及放线菌杀菌剂标准菌株的上清液的活性减弱。半固体培养基法适用于针对不含活菌的上清液的筛选,平板对峙法适用于针对含有活菌的发酵液、菌丝和上清液的筛选,根据样品的类型选择适当的筛选方法和培养时间可以减少假阴性结果。
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关键词
模式靶标
生物杀菌剂
半
固体
培养
基
法
平板对峙
法
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职称材料
题名
半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体
1
作者
刘蓓蓓
韦艳娜
陈蓉
谢星
倪博
郝飞
张珍珍
白昀
袁厅
冯志新
机构
江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室
兽用生物制品<泰州>国泰技术创新中心
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2024年第4期682-689,共8页
基金
国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(2019YFE0107300)
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(22)2037]。
文摘
为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示,本研究获得了相对分子质量为3.5×104的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠,在第21 d即可达到融合要求,本试验方法(重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫)较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞,挑选效价较高的3株(9A4、9H6、11F5)进行鉴定,重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160000~1∶320000和1∶200~1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体,为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。
关键词
非洲猪瘟病毒
pA104蛋白
单克隆抗体
半固体培养法
Keywords
African swine fever virus
pA104 protein
monoclonal antibody
semi-solid medium method
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
微生物源生防杀菌剂的筛选方法研究
被引量：
6
2
作者
张志刚
王开梅
吴兆圆
万中义
方伟
机构
湖北省生物农药工程研究中心/湖北省农业科技创新中心生物农药分中心
出处
《湖北农业科学》
2022年第18期78-83,共6页
基金
国家重点研发计划重点专项(2017YFD0201301-4)
湖北省农业科技创新中心创新团队项目(2019-620-000-001-27)。
文摘
以胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)作为模式靶标,使用半固体培养基法(PDB培养基加入适量琼脂)及平板对峙法(PDA培养基),对真菌及放线菌杀菌剂标准菌株的发酵液、上清液和菌丝进行了杀菌活性比较。结果表明,样品的活性与筛选方法和培养时间有直接关联。半固体培养基法中发酵液及菌丝的活性分辨度差,而对真菌及放线菌标准菌株的上清液的活性反应清晰;平板对峙法中,随着培养时间的增加,发酵液及菌丝的活性增强,而真菌及放线菌杀菌剂标准菌株的上清液的活性减弱。半固体培养基法适用于针对不含活菌的上清液的筛选,平板对峙法适用于针对含有活菌的发酵液、菌丝和上清液的筛选,根据样品的类型选择适当的筛选方法和培养时间可以减少假阴性结果。
关键词
模式靶标
生物杀菌剂
半
固体
培养
基
法
平板对峙
法
Keywords
mode target
bio-fungicide
semi-solid medium method
disk diffusion method
分类号
S482.2 [农业科学—农药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体
刘蓓蓓
韦艳娜
陈蓉
谢星
倪博
郝飞
张珍珍
白昀
袁厅
冯志新
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
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职称材料
2
微生物源生防杀菌剂的筛选方法研究
张志刚
王开梅
吴兆圆
万中义
方伟
《湖北农业科学》
2022
6
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职称材料
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