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题名体外拼接破伤风毒素C片段基因
被引量：1
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作者
杨晓强
武金宝
姜泊
赵亚刚
陈学清
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机构
广州军区广州总医院消化内科
南方医科大学南方医院消化内科
浙江大学附属邵逸夫医院消化内科
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出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期363-365,369,共4页
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基金
国家自然科学基金(30570839)
广东省自然科学基金(05004735)~~
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文摘
目的以破伤风毒素C片段(TETC)基因为例,探讨区段基因拼接方法。方法根据已知的TETC基因序列(GenBank登记号M12739,367-1719),结合乳链菌氨基酸密码子的基因编码情况,设计适于在乳链菌内表达的TETC基因序列,为进一步克隆,根据同义突变的原理消除序列中的EcoRI和KpnI的酶切位点,在TETC基因的5′端加上SalI酶切位点,3′端加上XhoI和HindⅢ酶切位点,序列全长1383bp。将其中1380bp的片段使用DNAstar6.0设计为68条长40bp的寡核苷酸TETC_1-TETC_68,设计TETC_69作为下游引物。分3个区段分别拼接TETC_1-24、TETC_23-46、TETC_45-68,随后分别以TETC_1、TETC_69为上下游引物,进行TETC全长基因的拼接,将获得的TETC基因经SalI和HindⅢ双酶切后连接到经相同双酶切的p BluescriptⅡSK(+),得到的阳性克隆经测序鉴定。结果分别拼接出大小约500bp的TETC_1-24、TETC_23-46、TETC_45-68,等浓度的3个区段混合后,拼接出了全长为1383bpTETC基因,目的基因连接到载体后测序与设计的TETC基因完全一致。结论区段基因拼接法采用分段拼接的方法先拼接出全长基因的组成部分,随后进行全长基因拼接,更适合长基因片段的体外拼接。
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关键词
区段基因拼接
破伤风毒素
C片段
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Keywords
PCR based gene assembly
tetanus toxin c fragment
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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