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小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备
1
作者
薛潘
董阳超
+7 位作者
武福星
陈洋
张剑
元航
武苏闪
袁若栋
李宝莉
雷迎峰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期447-454,共8页
目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表...
目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。
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关键词
寨卡病毒(ZIKV)
包膜蛋白
胞外区
(
eecto
)
原核表达
单克隆抗体
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题名
小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备
1
作者
薛潘
董阳超
武福星
陈洋
张剑
元航
武苏闪
袁若栋
李宝莉
雷迎峰
机构
延安大学医学院
空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期447-454,共8页
基金
空军军医大学军事医学珠峰工程人才计划(zfrclyf)
陕西省重点研发计划(2021ZDLSF01-05)。
文摘
目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。
关键词
寨卡病毒(ZIKV)
包膜蛋白
胞外区
(
eecto
)
原核表达
单克隆抗体
Keywords
Zika virus(ZIKV)
envelope protein extracellular domain(
eecto
)
prokaryotic expression
monoclonal antibody
分类号
S718.85 [农业科学—林学]
Q939.47 [生物学—微生物学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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出处
发文年
被引量
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1
小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备
薛潘
董阳超
武福星
陈洋
张剑
元航
武苏闪
袁若栋
李宝莉
雷迎峰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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