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乙型脑炎病毒膜蛋白B区多肽抗原的表达、纯化及血清学评价
被引量：
4
1
作者
周惠琼
江立敏
+3 位作者
郑夔
顾耀亮
梁文燕
柯昌文
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期53-55,82,共4页
目的在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋白(E蛋白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评价。方法利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段,酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3...
目的在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋白(E蛋白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评价。方法利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段,酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3)并表达B区多肽抗原,表达产物经液相层析纯化;用乙脑病人血清对纯化后的B区多肽抗原进行评价。结果重组质粒pET22b-JEB经双酶切,其插入的外源基因片段为372 bp,与预期DNA片段大小一致。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约16kD的外源基因蛋白带,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA血清学评价,表明重组B区多肽抗原具有较高的灵敏性及特异性。结论成功构建了表达载体pET22b-JEB,在原核系统中表达的B区多肽抗原具有良好的血清学检测价值。
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关键词
乙型脑炎病毒
包膜糖蛋白b区
原核表达系统
蛋白
纯化
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职称材料
题名
乙型脑炎病毒膜蛋白B区多肽抗原的表达、纯化及血清学评价
被引量：
4
1
作者
周惠琼
江立敏
郑夔
顾耀亮
梁文燕
柯昌文
机构
广东省疾病预防控制中心
中山生物工程有限公司
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期53-55,82,共4页
基金
广东省医学科学研究基金(No.WSTJJ20021210440102196303133230)
文摘
目的在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋白(E蛋白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评价。方法利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段,酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3)并表达B区多肽抗原,表达产物经液相层析纯化;用乙脑病人血清对纯化后的B区多肽抗原进行评价。结果重组质粒pET22b-JEB经双酶切,其插入的外源基因片段为372 bp,与预期DNA片段大小一致。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约16kD的外源基因蛋白带,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA血清学评价,表明重组B区多肽抗原具有较高的灵敏性及特异性。结论成功构建了表达载体pET22b-JEB,在原核系统中表达的B区多肽抗原具有良好的血清学检测价值。
关键词
乙型脑炎病毒
包膜糖蛋白b区
原核表达系统
蛋白
纯化
Keywords
Japanese encephalitis virus
envelope
b
domain protein
prokaryotic expression system
protein purification
分类号
R373.3 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乙型脑炎病毒膜蛋白B区多肽抗原的表达、纯化及血清学评价
周惠琼
江立敏
郑夔
顾耀亮
梁文燕
柯昌文
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
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