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两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较 被引量：3
1
作者 曹卉 王薇 +3 位作者 肖敬川 黄邓高 高元慧 朱丹 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期800-808,共9页
目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要。本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibrobl... 目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要。本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF),以探讨两种方法的优缺点。方法:ITCM是将剪碎的皮肤组织置0.1%Ⅱ型胶原酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,对真皮组织采用0.25%胰酶于室温下再次消化15 min,待组织块贴壁于培养皿后进行培养。EDM是将剪碎的皮肤组织置0.25%胰酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,将真皮组织再次于4℃下用0.1%Ⅱ型胶原酶消化过夜,然后将组织块与酶的混合物一起过滤、挤压,用含有胎牛血清的培养基冲洗滤网,对得到的细胞悬液进行培养。ITCM与EDM均采用两种酶进行消化,但两种酶的使用顺序、消化时间及温度不同,最终接种于培养皿中进行后续培养的分别是组织块和细胞悬液。本研究利用ITCM和EDM分离、培养HFF,观察ITCM组和EDM组HFF的原代至第3代(Passage 0~Passage 3,P0~P3)的细胞形态;染色波形蛋白、CD68和角蛋白以鉴定细胞纯度;绘制P3生长曲线对比两组细胞的增殖能力。采取120 mJ/cm^(2)的中波紫外线(medium-wave ultraviolet,UVB)照射P3 ITCM组和EDM组HFF,建立光损伤模型。根据有无照射紫外线,实验分为UVB组和未照射对照组(Control)。采取二次离心法提取贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP),用含不同浓度(0,2.5%,5.0%及10.0%)PPP的完全培养基对ITCM组和EDM组的HFF进行分组培养,加入PPP 24 h后用CCK-8试剂盒检测损伤细胞的增殖情况。结果:ITCM组培养至第3天时可观察到大量HFF,受杂质影响小;EDM组HFF形态的观察受到较多杂质影响;第9天时,两组细胞均可传代;两种方法体外分离培养的HFF均呈长梭形、旋涡状生长。HFF培养至P2时ITCM组和EDM组波形蛋白的阳性率比较差异有统计学意义[(97.36±0.76)%vs(99.4±0.56)%,P<0.01],CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(70.8±0.46)%vs(78.37±0.75)%,P<0.01],pan-keratin的表达分别为阳性和阴性。HFF培养至P3时ITCM组与EDM组比较,波形蛋白和角蛋白染色结果差异无统计学意义(均P>0.05),CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(74.73±1.37)%vs(85.27±2.63)%,P<0.001]。EDM组P3 HFF的增殖能力显著高于ITCM组(P<0.05)。经UVB(120 mJ/cm^(2))照射后,两种方法获取的HFF出现光损伤改变;2.5%PPP组修复损伤细胞的能力显著高于其余浓度组(P<0.05或P<0.001)。结论:与ITCM法比较,EDM法获得的HFF具有纯化速度快、增殖能力强的优点;PPP对HFF的紫外线损伤具有修复作用。实验结果可为后续临床治疗研究提供理论依据。 展开更多
关键词 人包皮成纤维细胞 改良组织块培养法 酶消化培养法 细胞鉴定
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包皮成纤维细胞的生物学特性研究 被引量：4
2
作者 黎晓莉 张雁 吴宏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期41-44,共4页
目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ cells．hEG cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行... 目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ cells．hEG cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态观察，纯度鉴定，生长曲线及细胞周期检测，并就不同浓度丝裂霉素作用不同时间对人包皮成纤维细胞生长的影响进行研究。结果：0．25％胰酶，4℃消化过夜（12～16h）较37℃，5％CO2孵育2h更容易分离表皮和真皮；包皮成纤维细胞波形蛋白染色呈强阳性，纯度达95％以上；细胞生长曲线没有明显的滞留期，在1-6d处于快速增殖期，第7d开始处于平台期；细胞周期大多数处于Go／G，期，细胞周期与细胞生长曲线保持一致。丝裂霉素抑制包皮成纤维细胞增殖的适宜浓度及时间为12．5ug／ml作用2．5h。结论：包皮成纤维细胞的生物学特性表明其可以作为人EG细胞长期体外培养的饲养层。 展开更多
关键词 生物学特性 包皮成纤维细胞 饲养层
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脐带血血浆对包皮成纤维细胞生长影响的实验研究
3
作者 丁妍 卢智勇 +4 位作者 袁雅红 梦淑艳 冯静波 李东升 曾毅 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第5期548-551,共4页
目的探讨人脐带血血浆(HUP)能否维持人包皮成纤维细胞(HFF)的生长。方法将脐血浆经盐析、透析等处理后,按10%体积成分培养HFF,并与同样浓度的胎牛血清(FBS)进行比较,观察细胞的贴壁速度、生长曲线、细胞周期及增殖能力。结果 HFF在含10%... 目的探讨人脐带血血浆(HUP)能否维持人包皮成纤维细胞(HFF)的生长。方法将脐血浆经盐析、透析等处理后,按10%体积成分培养HFF,并与同样浓度的胎牛血清(FBS)进行比较,观察细胞的贴壁速度、生长曲线、细胞周期及增殖能力。结果 HFF在含10%HUP的培养液中能长期生长,其生长生长形态、细胞增殖能力及特征都与在含同体积FBS的培养液中无显著差异。结论人HUP能维持HFF的长期生长。 展开更多
关键词 脐血 包皮成纤维细胞 胎牛血清
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草莓叶水提物对成纤维细胞合成Ⅰ型胶原及分泌骨形态发生蛋白-1的影响
4
作者 丁文玉 何聪芬 +2 位作者 刘蕾 杨笑笑 董坤 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期114-119,共6页
草莓叶水提物(water extractions from strawberry leaves,SLWE)富含多种生物活性成分,能促进成纤维细胞(fibroblasts,FB)合成胶原蛋白,而胶原蛋白只有经过骨形态发生蛋白1(bone morphogenetic protein 1,BMP-1)的剪切才能变成有活性的... 草莓叶水提物(water extractions from strawberry leaves,SLWE)富含多种生物活性成分,能促进成纤维细胞(fibroblasts,FB)合成胶原蛋白,而胶原蛋白只有经过骨形态发生蛋白1(bone morphogenetic protein 1,BMP-1)的剪切才能变成有活性的蛋白。该文通过对SLWE主成分分析及主要酶活力测定,同时探究SLWE对人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF-1)合成胶原蛋白I(collagen I,COL I)及分泌BMP-1的影响。结果表明:SLWE中维生素C、原花青素、多糖、总黄酮、总酚、蛋白质的含量分别为(0.88±0.025)、(0.28±0.027)、(10.00±0.278)、(1.47±0.052)、(2.05±0.031)、(0.10±0.003)mg/mL;超氧化物歧化酶、过氧化物酶的酶活力分别为125.59、0.06 U/mL;SLWE对HFF-1细胞增殖作用不明显,但具有促进其COL I表达和增加BMP-1分泌量的作用。实验结果表明SLWE含有丰富的活性成分,具有促进HFF-1中COL I分泌和成熟的作用,且此功效并非通过增加细胞数量而实现的。综上所述,SLWE具备作为延缓衰老化妆品的功效成分的潜能,为草莓叶等废弃物资源再利用提供了理论依据。 展开更多
关键词 草莓叶水提物 人包皮成纤维细胞 胶原蛋白I 骨形态发生蛋白1 延缓衰老
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人工培植冬虫夏草水提物抗人巨细胞病毒的研究 被引量：2
5
作者 蔡豪斌 张旋 +4 位作者 王茂水 郑仲声 秦雪 阳艳华 沈星灿 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期47-51,共5页
研究人工培植冬虫夏草水提物对人类巨细胞病毒(HCMV)的抑制作用,并对其抑制机制进行初步研究。通过细胞病变法(CPE)检测虫草水提物的细胞毒性及抗病毒活性,同时采用免疫印迹实验(Western Blot-ting)初步探究虫草水提物抗HCMV的作用靶点... 研究人工培植冬虫夏草水提物对人类巨细胞病毒(HCMV)的抑制作用,并对其抑制机制进行初步研究。通过细胞病变法(CPE)检测虫草水提物的细胞毒性及抗病毒活性,同时采用免疫印迹实验(Western Blot-ting)初步探究虫草水提物抗HCMV的作用靶点。结果表明虫草水提物浓度在0.3 g.L-1以上时能有效抑制HCMV在宿主细胞中的复制,用虫草水提物处理感染的宿主细胞,HCMV的早期立即蛋白IE1、IE2及早期蛋白UL84的表达均明显受到抑制。虫草水提物可作为潜在的抗HCMV药物。 展开更多
关键词 冬虫夏草水提物 人类巨细胞病毒 人包皮成纤维细胞 细胞病变 抗病毒药物 免疫印迹实验
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不同滋养层对维持人胚胎干细胞的生长作用 被引量：1
6
作者 朱宛宛 李宁 +4 位作者 王芳 付琳琳 徐艳玲 关云谦 张愚 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期468-472,I0004,I0005,共7页
目的比较不同滋养层对保持连续传代培养的人胚胎干细胞(hESC)不分化和高增殖能力作用的差异。方法分别用小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、人包皮成纤维细胞(hFF)、人骨髓间充质细胞(hMSC)作为滋养层培养hESC系H9细胞,采用碱性磷酸酶染色和台... 目的比较不同滋养层对保持连续传代培养的人胚胎干细胞(hESC)不分化和高增殖能力作用的差异。方法分别用小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、人包皮成纤维细胞(hFF)、人骨髓间充质细胞(hMSC)作为滋养层培养hESC系H9细胞,采用碱性磷酸酶染色和台盼蓝染色观察不同滋养层支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率,并采用免疫荧光染色对传代5代以后的hESC进行生物学鉴定。结果3种滋养层细胞均可维持hESC呈克隆样生长,但是不同滋养层支持的克隆的形态差异大。3种滋养层细胞支持的hESC的大鼠抗阶段特异性胚胎抗原-3及碱性磷酸酶染色均呈阳性。MEF支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率均显著高于人来源滋养层(均P<0.01)。hMSC支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量均显著高于hFF的hESC(均P<0.01)。结论3种滋养层细胞均可支持hESC的正常生长。MEF最有利于hESC的增殖,但是两种人来源滋养层细胞为去除动物源性的hESC培养体系奠定了基础。在维持hESC增殖方面,hMSC优于hFF。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 滋养层 包皮成纤维细胞 骨髓间充质干细胞
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人胚胎生殖细胞饲养层的制备
7
作者 姜蓉 黎晓莉 +1 位作者 吴宏 王璐 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1440-1444,共5页
目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察... 目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞生长状况,免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术检测细胞纯度、生长曲线及细胞周期,筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。分离5～11周人胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)并培养于经丝裂霉素C处理的HFF饲养层上,观察人EGCs生长情况。结果:机械法和组织消化法结合分离HFF方法可靠,纯度高,细胞生长活性好,能快速进入对数生长期,细胞周期与细胞生长曲线保持一致,细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;丝裂霉素C抑制细胞增殖的适宜浓度及时间为12.5 mg/L作用2.5 h;分离的人PGCs在该饲养层上培养可形成典型的EGCs集落,体外连续培养超过3代。结论:HFF饲养层能有效地支持人EGCs的生长。 展开更多
关键词 人胚胎生殖细胞 包皮成纤维细胞 饲养层
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银杏酸、阿奇霉素和大蒜素抗弓形虫增殖效果研究 被引量：12
8
作者 吴亮 陈盛霞 +5 位作者 姜旭淦 周天戟 徐会娟 帅连云 傅行礼 曹建平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期736-740,共5页
目的评价银杏酸、阿奇霉素和大蒜素体外和体内抗弓形虫增殖的效果。方法体外试验,培养HFF细胞做为弓形虫宿主细胞,采用MTT法检测3种药物的安全浓度和体外抗弓形虫增殖的效果。体内试验,以腹腔注射的方式给药,观察感染弓形虫小鼠的存活时... 目的评价银杏酸、阿奇霉素和大蒜素体外和体内抗弓形虫增殖的效果。方法体外试验,培养HFF细胞做为弓形虫宿主细胞,采用MTT法检测3种药物的安全浓度和体外抗弓形虫增殖的效果。体内试验,以腹腔注射的方式给药,观察感染弓形虫小鼠的存活时间,比较3种药物的体内抗弓形虫增殖效果。结果银杏酸和阿奇霉素可显著抑制细胞内弓形虫的增殖,两者效果相近。银杏酸和阿奇霉素均可延长小鼠存活时间。大蒜素抗弓形虫效果微弱。结论银杏酸具有抗弓形虫作用。 展开更多
关键词 银杏酸 阿奇霉素 大蒜素 弓形虫 包皮成纤维细胞
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草莓叶水提物对UVB致皮肤损伤的保护作用 被引量：5
9
作者 董坤 翟文丽 +1 位作者 王兰青 何聪芬 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期806-814,共9页
为了评价草莓叶水提物(SLWE)延缓皮肤衰老功效,对SLWE成分、抗氧化活性、抑制非酶糖基化(NEG)能力进行了测定;探讨了SLWE对人包皮成纤维细胞(HFF-1)细胞活率、HFF-1中透明质酸(HA)、人Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、羟脯氨酸(HYP)、人基质金属... 为了评价草莓叶水提物(SLWE)延缓皮肤衰老功效,对SLWE成分、抗氧化活性、抑制非酶糖基化(NEG)能力进行了测定;探讨了SLWE对人包皮成纤维细胞(HFF-1)细胞活率、HFF-1中透明质酸(HA)、人Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、羟脯氨酸(HYP)、人基质金属蛋白酶1(MMP-1)、人基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量的影响。在中波紫外线(UVB)致HFF-1损伤模型基础上,考察了SLWE对保护组活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、MMP-1和超氧化物歧化酶(SOD)的影响,探讨SLWE对UVB致HFF-1损伤保护机制。结果表明,SLWE富含VC、槲皮素、绿原酸、没食子酸及儿茶素类物质,其中,槲皮素含量12.86 mg/L,表儿茶素含量10.13 mg/L。SLWE自由基清除能力良好,清除不同自由基能力依次为O2–·>DPPH·>ABTS·>亚铁离子螯合>·OH;体积分数为1%的SLWE水溶液对NEG的抑制率为87.17%;体积分数大于3%的SLWE水溶液可提高HFF-1中HA、COLⅠ和HYP含量(p<0.05),体积分数为6%的SLWE水溶液可降低MMP-1含量(p<0.01),表明SLWE具有提升皮肤含水量,增加胶原含量,抑制胶原降解,实现延缓衰老的功效;SLWE可有效降低因UVB刺激而产生的ROS,体积分数6%的SLWE水溶液可显著降低MDA含量,抑制MMP-1表达,提高SOD活力,说明SLWE有助于缓解氧化应激造成的细胞损伤。 展开更多
关键词 草莓叶水提物 UVB 人包皮成纤维细胞 损伤保护 延缓衰老 医药与日化原料
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抗人白介素-17RA单克隆抗体的制备及活性检测
10
作者 徐真真 孙春昀 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期428-433,共6页
目的制备具有中和人白介素-17RA(h IL-17RA)免疫活性的单克隆抗体,并探讨其生物学活性。方法通过基因工程技术制备抗h IL-17RA的单克隆抗体。采用OctetRED系统检测其亲和力,ELISA、Western blot和流式细胞术分析抗体的结合作用和种属交... 目的制备具有中和人白介素-17RA(h IL-17RA)免疫活性的单克隆抗体,并探讨其生物学活性。方法通过基因工程技术制备抗h IL-17RA的单克隆抗体。采用OctetRED系统检测其亲和力,ELISA、Western blot和流式细胞术分析抗体的结合作用和种属交叉反应,人包皮成纤维细胞-1上细胞因子分泌实验检测抗体的中和活性。结果抗h IL-17RA单克隆抗体亲和力常数KD<1.0×10^(-12)mol/L,并与其他物种有一定的交叉结合反应,它能结合白介素(IL)-17RA并有效阻断其与配体的结合,抑制下游相关细胞因子IL-6、IL-8和人CXC趋化因子配体1的分泌。结论成功制备1株抗h IL-17RA的中和抗体,为IL-17RA相关疾病通路的研究提供了工具,也为IL-17RA靶点药物的开发奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 白介素-17RA 白介素-17A 白介素-17F 抗体 人包皮成纤维细胞-1
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