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人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定
被引量：
4
1
作者
耿梅
陈清
+2 位作者
徐丽慧
张延亭
何贤辉
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期331-335,共5页
目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条...
目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7。rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4h。结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体。
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关键词
白细胞介素7
原核表
达
载体
包涵体表达
免疫印迹
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职称材料
题名
人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定
被引量：
4
1
作者
耿梅
陈清
徐丽慧
张延亭
何贤辉
机构
暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心
暨南大学再生医学教育部重点实验室
暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所
出处
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期331-335,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30572199
30371651)
文摘
目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7。rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4h。结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体。
关键词
白细胞介素7
原核表
达
载体
包涵体表达
免疫印迹
Keywords
interleukin 7
prokaryotic expression
inclusion body
Western blotting
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定
耿梅
陈清
徐丽慧
张延亭
何贤辉
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
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