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CD133基因启动子调控增强型绿色荧光蛋白基因在喉癌Hep-2细胞中的表达 被引量:2
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作者 王晓峰 周翔宇 +3 位作者 张桂珍 王伟 杜珍武 张天夫 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期498-502,I0001,共6页
目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人... 目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人外周血基因组中克隆人CD133基因启动子,通过基因重组技术将人CD133基因启动子克隆入慢病毒基因转移载体pWPXLd-eGFP中,构建人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体,PCR以及酶切鉴定构建载体的正确性。应用脂质体介导该载体转染入Hep-2细胞中,细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pWPXLd)和实验组(转染pWPXLd-eGFP-CD133)。应用荧光显微镜观察各组eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。结果:PCR法获得了约1 810bp大小的CD133基因启动子片段;酶切与PCR鉴定,成功构建了人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体。荧光显微镜下,阳性对照组和实验组转染的Hep-2细胞株有eGFP的表达,而空白组对照组的Hep-2细胞内无eGFP的表达。结论:构建的人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体可以调控eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。 展开更多
关键词 CD133启动子 加强型绿色荧光蛋白 肿瘤干细胞 HEP-2细胞系
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外源报告基因EGFP在盐藻中实现瞬时表达 被引量:21
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作者 李杰 任宏伟 +2 位作者 黄洁虹 俞梅敏 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期338-342,共5页
探索杜氏盐藻 (Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法 .利用烟草花叶病毒启动子 (CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP ,转化盐藻 .EGFP在CaMV 35S启动下... 探索杜氏盐藻 (Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法 .利用烟草花叶病毒启动子 (CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP ,转化盐藻 .EGFP在CaMV 35S启动下表达出绿色荧光蛋白 ,在荧光显微镜下看到发绿色荧光的转基因盐藻 .根据荧光数目进行统计 ,转化效率高于 5 % .衣藻来源的启动子atpA在盐藻中未能启动EGFP的表达 .用直径 1μm的金粉颗粒和 0 6 μm的金粉进行基因枪法转化 ,1μm的金粉颗粒成功将外源基因导入盐藻 ,用 0 6 μm的金粉配合多种技术参数也没有将外源基因导入盐藻 .EGFP可以用作盐藻遗传转化的报告基因使单细胞真核生物盐藻可以利用流式细胞术 (FACS)等技术进行筛选 ,从而避开平板筛选转基因盐藻的限制 。 展开更多
关键词 外源报告基因EGFP 盐藻 表达 遗传转化 加强型绿色荧光蛋白报告基因
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乙肝病毒X基因真核表达载体pEGFP-X的构建及其表达
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作者 王文龙 贺兴鄂 +3 位作者 杨旭 蒋永芳 雷建华 孙会卿 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第5期652-654,680,共4页
目的:构建pEGFP-X真核表达载体,观察其在肝癌细胞株中的表达。方法:从质粒pcDNA3.1(+)-X酶切获HBV X基因片段,克隆至pEGFP-N1;用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP-X载体;用脂质体法,将重组载体(pEGFP-X)和空载体(pEGFP-N1)瞬时转染肝癌细胞细胞... 目的:构建pEGFP-X真核表达载体,观察其在肝癌细胞株中的表达。方法:从质粒pcDNA3.1(+)-X酶切获HBV X基因片段,克隆至pEGFP-N1;用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP-X载体;用脂质体法,将重组载体(pEGFP-X)和空载体(pEGFP-N1)瞬时转染肝癌细胞细胞株BEL-7402;分别用RT-PCR、荧光显微镜鉴定HBV X和EGFP基因表达。结果:鉴定证实pEGFP-X载体构建成功;该质粒瞬时转染的BEL-7402有HBV X基因表达,并发绿色荧光。结论:构建的pEGFP-X真核载体能在BEL-7402中表达,绿色荧光蛋白示踪利于表达HBV X基因稳定细胞株的筛选,并为探讨HBV X基因在HCC中的致瘤机理提供实验模型奠定基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X基因 加强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 RT—PCR BEL-7402
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