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副结核分支杆菌MAP0862-2191c串联蛋白的原核表达及反应原性检测
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作者 郝彦儒 郭号 +3 位作者 谢梦圆 陈坚 杨文洁 徐晓静 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期28-34,共7页
副结核分支杆菌(MAP)由于其胞内寄生的特性,难以在早期发现,待发现后往往已经不再具备治疗价值,因此寻找并制备出能同时在早晚期都有显著标识作用的抗原蛋白,有利于更好地诊断牛副结核病。通过生物信息学软件对MAP的MAP0862和MAP2191c... 副结核分支杆菌(MAP)由于其胞内寄生的特性,难以在早期发现,待发现后往往已经不再具备治疗价值,因此寻找并制备出能同时在早晚期都有显著标识作用的抗原蛋白,有利于更好地诊断牛副结核病。通过生物信息学软件对MAP的MAP0862和MAP2191c两种蛋白进行一级、二级及三级结构上的理化性质、抗原性分析及相对位置建模预测,判断串联蛋白重组表达的可行性;使用柔性肽短链序列(G4S)2连接两段序列构建了重组表达载体pET30a-MAP6291c,将其导入至BL21(DE3)原核表达载体中进行诱导表达,并进行Western blot分析。结果显示,预测MAP0862-2191c串联蛋白为一个有多个抗原表位的亲水性的蛋白,两种蛋白在三级结构上无相互影响,因此可以进行原核表达;构建合成的融合基因双酶切结果与预期结果相符;经SDS-PCGE凝胶电泳检测成功表达串联蛋白,大小约68.5 ku,与预期蛋白大小相符;分别选择鼠源抗His抗体及MAP阳性牛血清作为一抗进行Western blot验证,均显示MAP0862-2191c重组蛋白有单一的特异性条带,位置及大小与预期结果一致,证明了该串联蛋白制备的正确性,并且具有良好的反应原性,能够作为牛副结核病的诊断蛋白,为后续建立牛副结核病的诊断方法奠定了良好基础。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 MAP0862 MAP2191c 蛋白预测 串联表达
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副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 平宇明 张宏莉 +8 位作者 班亚星 刘建奇 任希恩 邬彩丽 刘东霞 徐丽媛 杨雪娇 常华 李劼 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期1-6,共6页
为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏... 为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP。应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704)。结果表明,成功建立了MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 实时荧光定量PCR 检测方法 感染调查
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副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用 被引量:3
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作者 刘倩 唐泰山 +3 位作者 廉慧锋 王凯民 张常印 雷治海 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期113-117,共5页
从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接EL... 从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(100倍)和抗原包被浓度(4.4μg.mL-1),该方法具有较好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 Hed蛋白 抗原性分析 间接ELISA
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副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达与抗原性分析 被引量:3
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作者 刘银冰 陈利苹 +2 位作者 鄢秋龙 曹俊 刘思国 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第6期36-39,共4页
从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的... 从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的Western blot验证了纯化蛋白产物;另外,副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明,表达的重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21 kDa,具有良好抗原性,有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 MAP1588C蛋白 重组表达 免疫性
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马鹿源副结核分枝杆菌的分离鉴定 被引量:2
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作者 高建鹏 赵鑫 +3 位作者 高静雯 李慧 张莉 齐亚银 《动物医学进展》 北大核心 2019年第9期128-132,共5页
为查明导致新疆南疆某规模化鹿场马鹿消瘦、腹泻并致其死亡的病因,通过临床检查与实验室检测分离病原菌,并从形态学与分子生物学进行鉴定。结果表明,分离得到1株副结核分支杆菌,该分离菌抗酸染色阳性,16 S rRNA基因与GenBank中多个副结... 为查明导致新疆南疆某规模化鹿场马鹿消瘦、腹泻并致其死亡的病因,通过临床检查与实验室检测分离病原菌,并从形态学与分子生物学进行鉴定。结果表明,分离得到1株副结核分支杆菌,该分离菌抗酸染色阳性,16 S rRNA基因与GenBank中多个副结核分支杆菌序列同源性为100%,检测IS900基因与多个副结核分支杆菌序列同源性在99%以上,扩增亚型分型基因得到310 bp的片段,说明该菌株为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌。最终确定引起该鹿场马鹿发病的病因为副结核分支杆菌感染,并首次成功分离培养出马鹿源副结核分枝杆菌。 展开更多
关键词 马鹿 副结核分支杆菌 分离鉴定 亚型
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绵羊副结核病的病原学检测与分析 被引量:10
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作者 吴建勇 吴星星 +5 位作者 杨学云 李建军 王登峰 金映红 王光雷 王治才 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1562-1568,共7页
【目的】确诊一例疑似绵羊副结核分枝杆菌感染的病原学特征。【方法】将送检病料(肠系膜淋巴结)涂片、抗酸染色后进行显微镜观察;同时,提取肠系膜淋巴结组织DNA,采用PCR扩增副结核分支杆菌的IS900基因及亚型分型基因,并进行序列测定与... 【目的】确诊一例疑似绵羊副结核分枝杆菌感染的病原学特征。【方法】将送检病料(肠系膜淋巴结)涂片、抗酸染色后进行显微镜观察;同时,提取肠系膜淋巴结组织DNA,采用PCR扩增副结核分支杆菌的IS900基因及亚型分型基因,并进行序列测定与分析。【结果】组织涂片染色镜检后可见抗酸染色阳性菌株;IS900基因及亚型分型基因的检测和序列分析结果表明,目标菌株为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌。【结论】采用镜检及分子检测等手段确定从所送检绵羊肠系膜淋巴结组织为Ⅱ型(牛型)副结核分支杆菌感染样本。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 绵羊 病原检测 序列分析
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