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SOE PCR重构SLA-Ⅰ复合体研究被引量：6: 1; 作者陈燕宇何丹 +3 位作者陈兆华周巧妮马文军高凤山《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期58-62,共5页; 利用剪接重叠延伸PCR(SOE PCR)技术,中间加一富含甘氨酸/丝氨酸的linker(G4S)3,将SLA-Ⅰ重链基因SLA-2和轻链基因β2m连接,形成复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m,然后将复合体基因链克隆入p2X表达质粒,导入受体菌TB1并进行表达。结果显示... 展开更多; 关键词剪接重叠延伸 PCR SLA-Ⅰ 复合体; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定: 2; 作者石琳蔺帅 +2 位作者周东庆孙艳君王志强《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期43-46,共4页; 本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中... 展开更多; 关键词生长激素促分泌素受体真核表达剪接重叠延伸聚合酶链式反应人源胚胎肾细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛IL-2cDNA缺失突变的矫正及表达产物生物学活性测定被引量：2: 3; 作者李春华李祥瑞 +3 位作者魏晓锋徐立新李震陈芳《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期86-89,共4页; 根据GenBank中的牛IL 2基因序列 ,设计一对引物Pa和Pd ,以牛外周血淋巴细胞为材料 ,用RT PCR方法扩增得到牛IL 2cDNA ,测序发现在扩增产物的第 2 4 0位缺失了一个A碱基。采用重叠延伸剪接术 (SOE法 )向突变体定点插入该碱基 ,然后与表... 展开更多; 关键词牛 IL-2 cDNA缺失突变体矫正基因表达定点突变生物学活性重叠延伸剪接术白细胞介素2; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化被引量：2: 4; 作者杨金国王聃 +10 位作者刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期59-62,共4页; 为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融... 展开更多; 关键词禽分枝杆菌副结核亚种 22KD基因 ag85B基因重叠延伸剪接技术重组表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名SOE PCR重构SLA-Ⅰ复合体研究被引量：6: 1; 作者陈燕宇何丹陈兆华周巧妮马文军高凤山; 机构大连大学生物工程学院河北省秦皇岛市海港区畜牧局; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期58-62,共5页; 基金大连大学本科生创新教育基金项目(2009244); 文摘利用剪接重叠延伸PCR(SOE PCR)技术,中间加一富含甘氨酸/丝氨酸的linker(G4S)3,将SLA-Ⅰ重链基因SLA-2和轻链基因β2m连接,形成复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m,然后将复合体基因链克隆入p2X表达质粒,导入受体菌TB1并进行表达。结果显示,利用SOE PCR技术成功得到了复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m,并且克隆入p2X载体。SDS-PAGE检测表明,复合体基因导入宿主菌后获得了融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m,大小为84.1 ku。试验结果为今后在体外进行相关基因重组表达提供参考。; 关键词剪接重叠延伸 PCR SLA-Ⅰ 复合体; Keywords SOE PCR SLA-Ⅰ complex; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定: 2; 作者石琳蔺帅周东庆孙艳君王志强; 机构扬州大学兽医学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期43-46,共4页; 基金江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) 扬州大学科技创新培育基金(2011CXJ065 2012CXJ080); 文摘本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/pGHS-R,酶切鉴定并测序,加myc标签,瞬时转染HEK293T细胞,用Western blotting鉴定该重组质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的蛋白。结果显示,本试验成功扩增出pGHS-R编码序列,酶切和测序结果表明pcDNA3.1(+)-myc/pGHS-R构建正确,Western blotting方法证实转染的该质粒能在HEK293T细胞中正确表达目的蛋白。结果表明,本试验成功构建了pGHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础。; 关键词生长激素促分泌素受体真核表达剪接重叠延伸聚合酶链式反应人源胚胎肾细胞; Keywords growth hormone seeretagogue receptor eukaryotic expression splicing overlapping extension PCR humanemborynic kidney; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛IL-2cDNA缺失突变的矫正及表达产物生物学活性测定被引量：2: 3; 作者李春华李祥瑞魏晓锋徐立新李震陈芳; 机构南京农业大学动物医学院上海市农业科学院畜牧兽医研究所南京师范大学生命科学院; 出处《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期86-89,共4页; 基金上海市科技兴农重点攻关项目 (X2 0 0 10 8); 文摘根据GenBank中的牛IL 2基因序列 ,设计一对引物Pa和Pd ,以牛外周血淋巴细胞为材料 ,用RT PCR方法扩增得到牛IL 2cDNA ,测序发现在扩增产物的第 2 4 0位缺失了一个A碱基。采用重叠延伸剪接术 (SOE法 )向突变体定点插入该碱基 ,然后与表达载体连接 ,获得了正确的表达产物。经RT PCR检测证明 ,重组的牛IL 2蛋白具有较好的生物学活性 ,能诱导肿瘤坏死因子TNF α和干扰素IFN γ的产生。; 关键词牛 IL-2 cDNA缺失突变体矫正基因表达定点突变生物学活性重叠延伸剪接术白细胞介素2; Keywords bovine IL-2 gene splicing by overlap extension site-directed mutagenesis expression; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化被引量：2: 4; 作者杨金国王聃刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室吉林农业大学生命科学学院延边大学; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期59-62,共4页; 文摘为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。; 关键词禽分枝杆菌副结核亚种 22KD基因 ag85B基因重叠延伸剪接技术重组表达; Keywords Mycobacterium avium subsp, paratuberculosis 22KD gene ag85B gene splicing by overlapping extension （SOE） recombinant expression; 分类号 S852.618 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	SOE PCR重构SLA-Ⅰ复合体研究	陈燕宇何丹陈兆华周巧妮马文军高凤山	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2010	6	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定	石琳蔺帅周东庆孙艳君王志强	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	牛IL-2cDNA缺失突变的矫正及表达产物生物学活性测定	李春华李祥瑞魏晓锋徐立新李震陈芳	《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2003	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化	杨金国王聃刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国	《中国动物传染病学报》 CAS	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料