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剪切HCV RNA的HDV核酶的设计及活性测定 被引量:1
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作者 于乐成 顾长海 +3 位作者 毛青 李奇芬 王宇明 郭焕珍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期312-314,共3页
目的 探讨丁型肝炎病毒 (HepatitisDvirus ,HDV)核酶用于抗丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV)基因治疗的可能性。方法 以HDV基因组核酶的假结样结构为基础 ,优化其茎Ⅳ区 ,改建其底物结合区 ,获得 3种针对HCVRNA的HDV核酶RzC1、Rz... 目的 探讨丁型肝炎病毒 (HepatitisDvirus ,HDV)核酶用于抗丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV)基因治疗的可能性。方法 以HDV基因组核酶的假结样结构为基础 ,优化其茎Ⅳ区 ,改建其底物结合区 ,获得 3种针对HCVRNA的HDV核酶RzC1、RzC2 和RzC3 。体外转录获取含HCVRNA 5’ 非编码区 ( 5’ noncodingregion ,5’ NCR)及部分C区在内的底物RNA(HCVRNA 5’ NCR C) ,并进行 5’端放射性标记。在pH 7.5、37℃、Mg2 + 2 0mmol/L和去离子甲酰胺 2 .5mol/L等条件下 ,将核酶和底物按摩尔比 1 0 0∶1混合 ,在不同的时间点观察剪切百分率。结果 RzC1、RzC2 对底物的剪切百分率随时间延长而递增 ,90min时分别达 2 4.9%、2 0 .3% ;未观察到RzC3 有剪切活性。 展开更多
关键词 丁型肝炎病毒 核酮 基因组 丙型肝炎病毒 基因治疗 剪切活性 HCV-RNA
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CRISPR/Cas13a重组蛋白表达纯化及其连带剪切酶活性的鉴定 被引量:4
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作者 王勋 张雨杭 +6 位作者 孙亚宁 李青梅 李鸽 王丽 郭军庆 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2021年第4期147-153,共7页
为建立LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法,在大肠杆菌中表达LwaCas13a重组蛋白,并对其连带剪切酶活性进行鉴定。将重组质粒pET His6-TwinStrep-SUMO-LwaCas13a转化至Rosetta(DE3)感受态细胞诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结... 为建立LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法,在大肠杆菌中表达LwaCas13a重组蛋白,并对其连带剪切酶活性进行鉴定。将重组质粒pET His6-TwinStrep-SUMO-LwaCas13a转化至Rosetta(DE3)感受态细胞诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性LwaCas13a重组蛋白。对诱导温度和时间进行优化,结果显示,在16℃条件下诱导培养15 h时,LwaCas13a重组蛋白的可溶性表达量最高。通过镍柱亲和层析法对表达的LwaCas13a重组蛋白进行纯化,得到单一的目的条带,纯化效果较为理想。此外,通过体外转录合成了1对CRISPR RNA及靶标RNA,建立LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法,可在37℃条件下30 min内完成检测,对靶标RNA的检出限为31.2 nmol/L。综上,成功利用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株可溶性表达了LwaCas13a重组蛋白,且纯化后的LwaCas13a重组蛋白具有良好的连带剪切酶活性,建立了LwaCas13a连带剪切酶活性的检测方法。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas13a蛋白 原核表达 镍柱亲和层析 连带剪切活性 核酸检测
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Effect of surfactants on hydrodynamics characteristics of bubble in shear thinning fluids at low Reynolds number 被引量:1
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作者 LI Shao-bai FAN Jun-geng +2 位作者 LI Run-dong WANG Lei LUAN Jing-de 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS CSCD 2018年第4期805-811,共7页
In this study,the effects of surfactants on the hydrodynamic characteristics of bubbles in shear-thinning fluids at low Reynolds number(Re<50)are investigated.The bubble terminal velocity and drag coefficient of bu... In this study,the effects of surfactants on the hydrodynamic characteristics of bubbles in shear-thinning fluids at low Reynolds number(Re<50)are investigated.The bubble terminal velocity and drag coefficient of bubble in clean and contaminated carboxymethylcellulose(CMC)solutions are obtained using a high-speed camera for examining differences.The results show that the existence of surfactant could reduce the terminal velocity of bubble at small volume(0.25wt%CMC:<100 mm3;0.50wt%CMC:<110 mm3),attributed to stiffening the bubble interface.However,this negative effect decreases and finally disappears with increasing bubble volume.The drag coefficient curves of the bubble in contaminated CMC solution exhibit behavior similar to that exhibited by a solid sphere at Re<10,indicating that internal circulation flow is absent at the bubble interface as compared to that in clean CMC solution.However,for 10<Re<40,a transition of drag curve from 24/Re to 16/Re in contaminated CMC solution is observed,which is easy at low SDS concentrations and high CMC concentrations. 展开更多
关键词 SURFACTANT single bubble shear thinning fluids VELOCITY drag coefficient
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