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shRNA介导GSTP1基因沉默对激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145的影响 被引量：3
1
作者 金鹏 谢晋良 +3 位作者 朱向荣 周成 丁翔 杨罗艳 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期807-816,共10页
目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计... 目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计3条表达载体(shRNA255,shRNA554,shRNA593),并克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo。经酶切和测序鉴定,筛选转染率最高基因沉默效果最好的shRNA作RNA干扰。DU145细胞株分为空白质粒转染组和shRNA转染组。转染前后按化学治疗药物分为氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)组及紫杉醇(paclitaxel,PA)组,并按作用浓度(FU:30,60,120,240μg/mL;PA:0.2,2,10,20μg/mL)分别分成4个亚组,并分别设有一个空白对照组。四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测转染后细胞增殖活性的变化,MTT及末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测转染前后不同浓度FU和PA对DU145细胞抑制增殖及诱导凋亡的效果。结果:3条表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shRNA255,pGPU6/GFP/Neo-shRNA554,pGPU6/GFP/Neo-shRNA593)的转染率分别为(63.3±1.04)%,(76.2±0.68)%,(72.7±0.33)%,shRNA554转染率最高,三者之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染后mRNA含量分别为128.31±2.50,43.24±4.30和85.62±6.30,GSTP1蛋白含量分别为163.92±12.40,65.38±9.30和114.25±16.70,shRNA554转染后GSTP1基因mRNA和蛋白含量均最低,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率分别为(95.60±2.11)%,(90.20±0.86)%,(83.10±3.12)%和(74.60±1.32)%;转染后存活率为(91.30±1.43)%,(84.6±2.13)%,(73.2±1.52)%和(65.5±0.94)%。TUNEL检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(5.50±0.88)%,(10.20±1.64)%,(15.20±2.39)%和(25.10±2.59)%;转染后凋亡率(10.80±0.62)%,(15.70±1.32)%,(20.40±1.89)%和(34.90±2.54)%。转染后相同FU浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率为(98.50±2.34)%,(95.20±1.32)%,(89.40±0.68)%和(82.70±1.73)%;转染后存活率为(94.2±0.78)%,(86.5±2.13)%,(78.7±1.34)%和(70.1±0.76)%。TUNEL检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(2.4±1.07)%,(5.2±1.33)%,(10.5±2.41)%和(20.7±1.92)%;转染后凋亡率(5.46±2.13)%,(13.8±1.24)%,(21.2±2.39)%和(29.2±2.21)%。转染后相同PA浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:shRNA介导的GSTP1基因沉默可抑制雄激素非依赖型前列腺癌DUl45细胞增殖活性,诱导凋亡,并且其作用呈现时间依赖性,可提高其对于化学治疗的药物敏感性。 展开更多
关键词 前列腺癌细胞株du145 短发卡状RNA 谷胱甘肽S-转移酶P1 化学治疗敏感性
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胡椒碱与棉酚联用对前列腺癌DU145细胞生长抑制的协同作用 被引量：5
2
作者 曾龙辉 徐丽慧 +3 位作者 何贤辉 欧阳东云 张延亭 任帅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1101-1105,共5页
目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉... 目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉酚联用时,表现出协同作用。棉酚对细胞的半数抑制浓度IC50由单用时的21.00μmol·L-1下降到联合用药时的8.07μmol·L-1;两药相互作用指数CDI<1。胡椒碱与棉酚联合用药,可引起细胞G0/G1期阻滞和亚二倍体峰(凋亡峰)增加;同时上调细胞周期抑制蛋白p21Cip1的表达,并下调Cyclin D1、Cyclin A、CyclinB1以及药物代谢酶CYP3A4的表达。结论胡椒碱与棉酚联用,可能是通过诱导细胞周期阻滞,增强凋亡以及抑制CYP3A4药物代谢酶活性,发挥其协同抗前列腺癌作用。 展开更多
关键词 胡椒碱 棉酚 前列腺癌细胞du145 协同作用 细胞周期 CYP3A4
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异黄酮增加前列腺癌细胞放射敏感性 被引量：2
3
作者 严森祥 郑树森 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2004年第3期239-244,共6页
目的 :研究异黄酮 ( genistein)与辐射联合应用对 DU14 5前列腺癌细胞放射敏感性的影响。方法 :雄激素非依赖型 DU14 5前列腺癌细胞在克隆形成试验中 ,接受不同浓度的 genistein和 /或合用辐射 ,比较 DU14 5细胞的存活率 ;用 DNA Ladde... 目的 :研究异黄酮 ( genistein)与辐射联合应用对 DU14 5前列腺癌细胞放射敏感性的影响。方法 :雄激素非依赖型 DU14 5前列腺癌细胞在克隆形成试验中 ,接受不同浓度的 genistein和 /或合用辐射 ,比较 DU14 5细胞的存活率 ;用 DNA Ladder检测细胞凋亡 ,并辅以 TUNEL法观察凋亡形态 ;流式细胞仪和免疫印迹法分别观察细胞周期改变和相关蛋白表达。结果 :克隆形成试验显示 ,genistein在较低或中等浓度 ( 5～ 15μmol/ L )时 ,即可提高DU14 5细胞的放射敏感性 ;单独辐射和 /或合用 genistein 2 4 h后 ,细胞凋亡主要见于高浓度 genistein( >30μmol/L )处理组 ,72 h后凋亡亦见于较低浓度 genistein组 ;当 genistein与辐射合用时 ,可产生 G2 / M细胞周期阻滞 ,72 h后得到大部维持并伴有凋亡和超二倍体细胞群的出现 ;细胞周期相关蛋白分析提示 ,随着 genistein浓度的提高 ,周期素 B1呈明显双相改变 ,cdc- 2亦呈类似改变 ,但较轻微 ,而 p2 1cip1则稳步上升。结论 :genistein可提高 DU14 5前列腺癌细胞的放射敏感性 ,其机理可能与凋亡细胞的增加 。 展开更多
关键词 du145 前列腺癌细胞 异黄酮 辐射效应 凋亡 细胞周期
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