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RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响
被引量：
5
1
作者
曹开源
张甜
+4 位作者
徐霖
袁广卿
田小东
黄小荣
丘少鹏
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1877-1881,共5页
目的:构建LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体,探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因表达的干扰作用。方法:针对PSMA mRNA序列设计合成3对编码shRNA的寡核苷酸链,退火形成双链,连接入含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的pSilencer2.1-U6-neo真核表...
目的:构建LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体,探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因表达的干扰作用。方法:针对PSMA mRNA序列设计合成3对编码shRNA的寡核苷酸链,退火形成双链,连接入含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的pSilencer2.1-U6-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定。使用脂质体转染的方法将重组质粒导入LNCaP细胞,G418筛选后RT-PCR、Western blotting检测其对PSMA基因干扰作用,并观察对LNCaP细胞生物学行为的影响。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建shRNA真核表达载体p-shRNA1,2,3转染LNCaP后,对细胞PSMA mRNA表达抑制率分别为33.15%、9.26%、41.97%,Western blotting结果显示对PSMA蛋白表达的抑制率分别为26.26%、6.47%、40.69%。选择抑制效率较高的p-shRNA3进行体外生长及侵袭力实验,发现干扰后对LNCaP细胞侵袭力增强,但是对细胞生长影响不大。结论:成功构建了人PSMA基因的RNAi的真核表达载体,并在LNCaP细胞中有效地发挥了对PSMA基因表达的干扰作用,初步发现PSMA在前列腺癌的侵袭中起负向调节作用,为进一步研究PSMA的生物学功能,探索前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础。
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关键词
前列腺
肿瘤
前列腺
癌
特异
膜
抗原
RNA干扰
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职称材料
题名
RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响
被引量：
5
1
作者
曹开源
张甜
徐霖
袁广卿
田小东
黄小荣
丘少鹏
机构
中山大学中山医学院临床检验标准化研究中心
中山大学中山医学院免疫教研室
中山大学中山医学院实验教学中心
中山大学附属第一医院泌尿外科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1877-1881,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30772503)
广东省自然科学基金重点资助项目(No.021907)
文摘
目的:构建LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体,探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因表达的干扰作用。方法:针对PSMA mRNA序列设计合成3对编码shRNA的寡核苷酸链,退火形成双链,连接入含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的pSilencer2.1-U6-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定。使用脂质体转染的方法将重组质粒导入LNCaP细胞,G418筛选后RT-PCR、Western blotting检测其对PSMA基因干扰作用,并观察对LNCaP细胞生物学行为的影响。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建shRNA真核表达载体p-shRNA1,2,3转染LNCaP后,对细胞PSMA mRNA表达抑制率分别为33.15%、9.26%、41.97%,Western blotting结果显示对PSMA蛋白表达的抑制率分别为26.26%、6.47%、40.69%。选择抑制效率较高的p-shRNA3进行体外生长及侵袭力实验,发现干扰后对LNCaP细胞侵袭力增强,但是对细胞生长影响不大。结论:成功构建了人PSMA基因的RNAi的真核表达载体,并在LNCaP细胞中有效地发挥了对PSMA基因表达的干扰作用,初步发现PSMA在前列腺癌的侵袭中起负向调节作用,为进一步研究PSMA的生物学功能,探索前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础。
关键词
前列腺
肿瘤
前列腺
癌
特异
膜
抗原
RNA干扰
Keywords
Prostatic neoplasms
Prostate- specific membrane antigen
RNA interference
分类号
R737.25 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
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1
RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响
曹开源
张甜
徐霖
袁广卿
田小东
黄小荣
丘少鹏
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
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