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人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备
1
作者
顾正勤
许传亮
+2 位作者
孙颖浩
高旭
王林辉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期344-346,共3页
目的:克隆并在大肠杆菌中表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增包含蛋白融合点的PSCA基因片段,经DNA测序证实后克隆至带有Trx.6H is标签的原核表达载体pET32 a,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,...
目的:克隆并在大肠杆菌中表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增包含蛋白融合点的PSCA基因片段,经DNA测序证实后克隆至带有Trx.6H is标签的原核表达载体pET32 a,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经N i-NTA树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,ELISA检测抗血清的滴度,免疫组化鉴定其特异性。结果:PCR扩增得到241 bp的目的片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致;成功构建了PSCA基因片段的原核表达载体pET32 a-PSCA;在大肠杆菌中表达,于相对分子质量为20.4×103处有一蛋白新生带;PSCA融合蛋白免疫小鼠后,ELISA确认抗血清的滴度>1∶4 000。抗血清检测到前列腺癌组织中PSCA的表达。结论:成功克隆、表达了人PSCA融合基因片段,并制备了相应的抗血清。
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关键词
前列腺
干细胞
抗原
基因
表达
免疫血清
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职称材料
激光显微切割分选少量胃癌细胞中PSCA基因的SNP分析
被引量：
2
2
作者
杨祎
郭妍
+2 位作者
赵小东
刘炳亚
邵志峰
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期567-573,共7页
随着基因组关联分析方法的应用,越来越多与胃癌相关的易感基因被发现.易感基因的多态性检测已逐步进入胃癌临床诊断和研究.然而,利用少量胃粘膜细胞开展单核苷酸多态性(SNP)分析对胃癌进行早期诊断常遇下述困难,一是少量胃癌细胞混杂在...
随着基因组关联分析方法的应用,越来越多与胃癌相关的易感基因被发现.易感基因的多态性检测已逐步进入胃癌临床诊断和研究.然而,利用少量胃粘膜细胞开展单核苷酸多态性(SNP)分析对胃癌进行早期诊断常遇下述困难,一是少量胃癌细胞混杂在多种细胞中,异常信号常易被淹没,二是细胞量极少,因此获得的基因组DNA量微,进行多位点或全基因组分析存在困难.本文利用激光显微切割技术分选少量胃癌细胞,结合全基因组放大技术,进行胃癌相关的前列腺干细胞抗原基因(PSCA)的SNP分析.通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和克隆测序方法分析,在分选的胃癌细胞中检测到PSCA的rs2976392位点胃癌相关的"A"等位与rs2294008位点胃癌相关的"T"等位.研究结果表明,所采用的全基因组放大方法保真性高,经过分选的胃癌细胞中SNP位点的检测灵敏度和可靠性大为提高.所建立的少量细胞基因多位点检测方法将同样应用于其它肿瘤和组织的少量细胞研究中,全基因组放大产物也可进行高通量的基因芯片和第二代测序研究.
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关键词
胃癌
少量
细胞
全
基因
组放大
单核苷酸多态性(SNP)
前列腺
干细胞
抗原
基因
(
psca
)
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职称材料
题名
人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备
1
作者
顾正勤
许传亮
孙颖浩
高旭
王林辉
机构
第二军医大学长海医院泌尿外科
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期344-346,共3页
基金
国家自然科学基金(39900147)
上海市科技启明星计划资助项目(02QB14001)~~
文摘
目的:克隆并在大肠杆菌中表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增包含蛋白融合点的PSCA基因片段,经DNA测序证实后克隆至带有Trx.6H is标签的原核表达载体pET32 a,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经N i-NTA树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,ELISA检测抗血清的滴度,免疫组化鉴定其特异性。结果:PCR扩增得到241 bp的目的片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致;成功构建了PSCA基因片段的原核表达载体pET32 a-PSCA;在大肠杆菌中表达,于相对分子质量为20.4×103处有一蛋白新生带;PSCA融合蛋白免疫小鼠后,ELISA确认抗血清的滴度>1∶4 000。抗血清检测到前列腺癌组织中PSCA的表达。结论:成功克隆、表达了人PSCA融合基因片段,并制备了相应的抗血清。
关键词
前列腺
干细胞
抗原
基因
表达
免疫血清
分类号
R737.25 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
激光显微切割分选少量胃癌细胞中PSCA基因的SNP分析
被引量：
2
2
作者
杨祎
郭妍
赵小东
刘炳亚
邵志峰
机构
上海交通大学系统生物医学研究院
上海交通大学肿瘤研究所
上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期567-573,共7页
基金
国家自然科学基金委项目(No.30900271)
国家重点基础研究发展计划(973计划,No.2010CB529205)
上海市肿瘤所癌基因及相关基因国家重点实验室自主项目(No.91-10-09)~~
文摘
随着基因组关联分析方法的应用,越来越多与胃癌相关的易感基因被发现.易感基因的多态性检测已逐步进入胃癌临床诊断和研究.然而,利用少量胃粘膜细胞开展单核苷酸多态性(SNP)分析对胃癌进行早期诊断常遇下述困难,一是少量胃癌细胞混杂在多种细胞中,异常信号常易被淹没,二是细胞量极少,因此获得的基因组DNA量微,进行多位点或全基因组分析存在困难.本文利用激光显微切割技术分选少量胃癌细胞,结合全基因组放大技术,进行胃癌相关的前列腺干细胞抗原基因(PSCA)的SNP分析.通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和克隆测序方法分析,在分选的胃癌细胞中检测到PSCA的rs2976392位点胃癌相关的"A"等位与rs2294008位点胃癌相关的"T"等位.研究结果表明,所采用的全基因组放大方法保真性高,经过分选的胃癌细胞中SNP位点的检测灵敏度和可靠性大为提高.所建立的少量细胞基因多位点检测方法将同样应用于其它肿瘤和组织的少量细胞研究中,全基因组放大产物也可进行高通量的基因芯片和第二代测序研究.
关键词
胃癌
少量
细胞
全
基因
组放大
单核苷酸多态性(SNP)
前列腺
干细胞
抗原
基因
(
psca
)
Keywords
gastric cancer
limited sample
whole genome amplification
single nucleotidepolymorphism （SNP）
prostate stem cell antigen （
psca
）
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备
顾正勤
许传亮
孙颖浩
高旭
王林辉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
在线阅读
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职称材料
2
激光显微切割分选少量胃癌细胞中PSCA基因的SNP分析
杨祎
郭妍
赵小东
刘炳亚
邵志峰
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
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