Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡的结合特性 被引量：1

1

作者 李婷 张淑臣 +2 位作者 申晓鸿 师光禄 刘京国 《北京农学院学报》 2019年第1期1-7,共7页

【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素。Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤。为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)... 【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素。Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤。为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的结合特性。【方法】在大肠杆菌中用IPTG诱导表达Vip3Aa10,用亲和层析和离子交换层析的方法纯化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10-T。然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10-T对甜菜夜蛾的杀虫活性,用免疫印迹法和配体印迹法分析Vip3Aa10-T与甜菜夜蛾BBMVs的结合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的结合蛋白。【结果】Vip3Aa10-T与Vip3Aa10前毒素对甜菜夜蛾的杀虫活性很高。Vip3Aa10-T在pH8.0时更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合,并且能够与非敏感性昆虫黄粉虫BBMVs结合。在相同pH条件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10-T更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合。Vip3Aa10-T在甜菜夜蛾BBMVs上有4条结合蛋白,其分子量分别为80、38、31和22kDa。【结论】活化的Vip3Aa10与甜菜夜蛾BBMVs的结合是pH依赖性的,并且能与BBMVs上的4个蛋白结合。 展开更多

关键词 Vip3Aa10 甜菜夜蛾 刷状缘膜囊泡 杀虫活性

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CrylA毒素与二化螟中肠刷状缘膜囊泡受体蛋白配基结合分析 被引量：2

2

作者 徐永桂 杨亦桦 吴益东 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期153-158,共6页

分离和鉴定二化螟Chilo suppresalis幼虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)中Cryl A毒素的受体蛋白,对于阐明Cryl A毒素作用机理和二化螟抗性机理具有十分重要的意义。为此,本文就Cryl A毒素对二化螟杀虫活性及Cryl Ac与二化螟中肠受体的配基结合... 分离和鉴定二化螟Chilo suppresalis幼虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)中Cryl A毒素的受体蛋白,对于阐明Cryl A毒素作用机理和二化螟抗性机理具有十分重要的意义。为此,本文就Cryl A毒素对二化螟杀虫活性及Cryl Ac与二化螟中肠受体的配基结合进行了研究。结果表明:Cryl Ab对二化螟室内品系(CN)的毒力高于Cryl Ac,而Cryl Ac高于Cryl Aa。配基结合分析表明二化螟CN品系幼虫中肠BBMV中有6个Cryl Ac结合蛋白(分子量分别为50,70,90, 120,160和180 kDa),其中180,160和90 kDa结合蛋白的条带颜色明显深于其他结合蛋白的条带,表明这3个受体蛋白具有较高的结合浓度。同源竞争结合研究表明,180和90 kDa结合蛋白为Cryl Ac的低亲合性结合蛋白,其他4个为高亲合性结合蛋白。为了研究Cryl Ac和Cryl Ab受体结合部位的相互作用,进行了异源竞争结合研究。Cryl Ab可以与Cryl Ac所有的6个结合蛋白进行竞争性结合,与180,120,70和50 kDa结合蛋白具有高亲合性,而与160和90 kDa结合蛋白具有低亲合性。结果显示,Cryl Ac与Cryl Ab在二化螟幼虫中肠BBMV上拥有多个共享的结合位点,但对每个结合位点的亲合性有差异。基于毒素结合部位的相似性,Cryl Ac和Cryl Ab不宜同时用于转基因Bt水稻来控制二化螟。 展开更多

关键词 二化螟 刷状缘膜囊泡 苏云金杆菌 CRY1A 配基印迹

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杠柳新苷类化合物对东方黏虫的杀虫活性及对中肠细胞刷状缘膜囊泡3种特征酶活性的影响 被引量：1

3

作者 冯明星 胡兆农 吴文君 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期308-315,共8页

为了研究和阐明杠柳新苷类杀虫活性化合物对东方黏虫的杀虫活性及作用靶标,采用载毒叶片饲喂法测定比较了6个杠柳新苷类化合物(PSA、PSD、PSE、PSF、PSP和PST)对3龄东方黏虫Mythimna separata Walker幼虫的毒力;应用MgCl_(2)沉淀差速离... 为了研究和阐明杠柳新苷类杀虫活性化合物对东方黏虫的杀虫活性及作用靶标,采用载毒叶片饲喂法测定比较了6个杠柳新苷类化合物(PSA、PSD、PSE、PSF、PSP和PST)对3龄东方黏虫Mythimna separata Walker幼虫的毒力;应用MgCl_(2)沉淀差速离心法制备东方黏虫中肠细胞刷状缘膜囊泡(BBMV)基础上,测定了6个化合物对东方黏虫幼虫中肠细胞BBMV中3种特征酶——氨肽酶、碱性磷酸酶及V-ATP酶活性的影响。结果表明:杠柳新苷P(PSP)和T(PST)对3龄东方黏虫幼虫表现出较高的杀虫活性,其24 h的致死中浓度(LC_(50)值)分别为1.60和1.23 mg/mL,杠柳新苷A(PSA)、D(PSD)和F(PSF)仅表现出微弱的杀虫活性(LC_(50)>20 mg/mL),而杠柳新苷E(PSE)则无明显杀虫活性。酶活性测定结果表明,6个杠柳新苷类化合物对氨肽酶和碱性磷酸酶活性均没有明显的抑制作用,而高杀虫活性化合物PSP和PST则可浓度依赖地抑制V-ATP酶活性。推测杠柳新苷类杀虫活性化合物的作用靶标与VATP酶有密切关系。 展开更多

关键词 杠柳新苷 东方黏虫 刷状缘膜囊泡(bbmv) 氨肽酶 碱性磷酸酶 V-ATP酶

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二肽在断奶仔猪小肠刷状缘膜囊中水解状况的研究 被引量：2

4

作者 代建国 李德发 +2 位作者 朴香淑 潘宝海 龚利敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期133-136,共4页

通过孵育试验研究了甘- L- 亮(Gly -Leu)和- L- 组 L- 亮(His- Leu) 2 种二肽在断奶仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush Border Memlorane Vesides,BBMV)中的水解状况。结果表明,孵育液 pH值(分别为 3.5、4.0、4.5、5.0、5 5、6.0、6.5、7.0、7.5... 通过孵育试验研究了甘- L- 亮(Gly -Leu)和- L- 组 L- 亮(His- Leu) 2 种二肽在断奶仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush Border Memlorane Vesides,BBMV)中的水解状况。结果表明,孵育液 pH值(分别为 3.5、4.0、4.5、5.0、5 5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0)、孵育温度(25 ℃和 37 ℃)、孵育时间(0 5、1、2、5、10、20、30 和 40 min)以及 BBMV(二肽酶)的添加量均不影响此 2 种二肽在断奶仔猪小肠 BBMV孵育体系中的水解。结果提示,Gly- Leu和 His- Leu 2种二肽在断奶仔猪小肠BBMV体系中均不水解。 展开更多

关键词 断奶仔猪 刷状缘膜囊 孵育液 小肠 添加量 温度 PH值 二肽 状况 影响

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厚颌鲂幼鱼肠上皮细胞刷状缘膜囊的提取 被引量：2

5

作者 李芹 唐洪玉 +1 位作者 郑永华 张建 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2013年第6期78-81,共4页

根据沉淀方法和离心速度的不同分为4个试验组提取厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)70日龄幼鱼的肠上皮细胞刷状缘膜囊(BBMV)。四个试验组如下:A组-钙离子沉淀法,28 000 g离心;B组-钙离子沉淀法,43000 g离心;C组-PEG沉淀法,28 000 g离心;D... 根据沉淀方法和离心速度的不同分为4个试验组提取厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)70日龄幼鱼的肠上皮细胞刷状缘膜囊(BBMV)。四个试验组如下:A组-钙离子沉淀法,28 000 g离心;B组-钙离子沉淀法,43000 g离心;C组-PEG沉淀法,28 000 g离心;D组-PEG沉淀法,43 000 g离心。采用细胞器和细胞膜指示酶的富集系数、核糖核酸和脱氧核糖核酸含量来评价各试验组提取BBMV的纯度。结果表明:肠上皮细胞刷状缘膜囊提取后,DNA的富集系数各组排列为D<B<C<A,D组的富集系数为0;RNA的富集系数排列为D<B<C<A,D组的富集系数为0.007;各组的蔗糖酶、γ谷氨酰转移酶(γ-GT)及碱性磷酸酶(AKP)富集系数排列为A<C<B<D,D组各酶的富集系数分别为:6.172、12.700、20.185。麦芽糖酶的富集系数排列为A<C<D<B,B组的富集系数为5.789;而Na+-K+-ATP酶和琥珀酸脱氢酶(SDH)在采用43 000 g离心后均为0。上述结果说明采用PEG沉淀法、43 000 g离心试验组提取的BBMV的纯度优于其余各试验组。 展开更多

关键词 厚颌鲂(Megalobroma pellegrini) 早期幼鱼 刷状缘膜囊 提取

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二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊中跨膜转运的动力学特点研究 被引量：1

6

作者 代建国 李德发 +2 位作者 朴香淑 陈洪亮 潘宝海 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期471-475,共5页

为研究二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush border membrane vesicles,BBMV)中跨膜转运的动力学特点,采用同位素示踪及体外孵育技术,观察了几种不同条件下Gly-Pro的跨膜转运量。结果表明:(1)在有Na+和无Na+的条件下,Gly-Pro的转运均受到Leu... 为研究二肽在仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush border membrane vesicles,BBMV)中跨膜转运的动力学特点,采用同位素示踪及体外孵育技术,观察了几种不同条件下Gly-Pro的跨膜转运量。结果表明:(1)在有Na+和无Na+的条件下,Gly-Pro的转运均受到Leu-Gly、Ala-His、Gly-Leu和His-Leu等二肽的极显著抑制(P<0.01),但不受甘氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-精氨酸、L-谷氨酰胺和L-蛋氨酸的影响;(2)仔猪小肠BBMV对Gly-Pro的转运呈现非线性关系,但是遵从Michaelis-Menten动力学方程,其Kt(亲合常数)值为0.64 mmol/L,而Vmax为7.42 nmol/(min.mg)膜蛋白;(3)仔猪小肠BBMV对Gly-Pro的摄取是由于Gly-Pro直接进入BBMV内部的结果,而不是仅仅结合在BBMV上所引起的。结果提示,Gly-Pro在仔猪小肠BBMV中的跨膜转运具有载体介导的转运特点。 展开更多

关键词 二肽 仔猪 刷状缘膜囊 转运动力学

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牛血清白蛋白、柠檬酸根和二价金属离子对人红细胞和兔小肠刷状缘囊泡摄取稀土离子的影响 被引量：1

7

作者 杨惠雯 王伟 +1 位作者 李荣昌 王夔 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期256-260,共5页

目的 :研究人红细胞 (humanerythrocytes,HRC)和兔小肠刷状缘囊泡 (rabbitintestinalbrush bordermem branevesicles,BBMV)对稀土离子Ln3 + 的摄入 ,以及牛血清白蛋白 (bovineserumalbumin ,BSA)、柠檬酸根 (Cit3 -)和二价金属离子 (M2 ... 目的 :研究人红细胞 (humanerythrocytes,HRC)和兔小肠刷状缘囊泡 (rabbitintestinalbrush bordermem branevesicles,BBMV)对稀土离子Ln3 + 的摄入 ,以及牛血清白蛋白 (bovineserumalbumin ,BSA)、柠檬酸根 (Cit3 -)和二价金属离子 (M2 + )的影响。方法 :在溶液中有或无BSA (或Cit3 -、Cu2 + 、Co2 + 、Zn2 + 、Cd2 + 、Pb2 + )的条件下 ,在HRC或提取的BBMV与Ln3 + 温育后 ,用ICP或ICP MS测定HRC胞浆及膜或BBMV中Ln3 + 及M2 + 的含量。结果 :被研究的Ce3 + 、Gd3 + 、Yb3 + 离子都能跨膜进入人红细胞 ,BSA对Ce3 + 和Yb3 + 的跨膜输运有促进作用 ,但对Gd3 + 无影响。Pb2 + 、Cu2 + 、Co2 + 、Zn2 + 对HRC膜结合Ce3 + 量无影响 ,但Cu2 + 促进Ce3 + 跨膜进入细胞内。Ce3 + 促进细胞对Co2 + 摄入 ,但Co2 + 和Zn2 + 几乎完全抑制了Ce3 + 的跨膜输运。BBMV可以结合Ce3 + 、Gd3 + 、Lu3 + 和Cu2 + 、Pb2 + 、Cd2 + ;Cit3 -抑制Ln3 + 的结合 ,抑制率随 [Ln(Cit) 2 ]3 -稳定性增加而增加 ;Ce3 + 和Pb2 + 或Cd2 + 之间相互抑制其与BBMV的结合 ,但Cu2 + 促进Gd3 + 与BBMV的结合。结论 :在HRC和BBMV对Ln3 + 和M2 + 的摄取中 ,Ln3 + 和M2 + 间存在着某些拮抗或协同作用 ,这些作用与Ln3 + 和M2 + 展开更多

关键词 牛 血清白蛋白 柠檬酸根 二价金属离子 红细胞 兔小肠刷状缘囊泡 摄取 稀土离子

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膜电位对仔猪小肠刷状缘膜囊中二肽跨膜转运的影响

8

作者 代建国 李德发 +2 位作者 朴香淑 陈洪亮 潘宝海 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期311-315,共5页

为研究膜电位与仔猪小肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)中二肽跨膜转运之间的关系,采用膜电位诱导、体外孵育及同位素示踪技术,分别观察由缬氨霉素和羰基氰化物三氟甲氧基苯腙(carbonylcyanide p-(Tri-fluoromethoxy)... 为研究膜电位与仔猪小肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)中二肽跨膜转运之间的关系,采用膜电位诱导、体外孵育及同位素示踪技术,分别观察由缬氨霉素和羰基氰化物三氟甲氧基苯腙(carbonylcyanide p-(Tri-fluoromethoxy)phenylhydrazone,FCCP)诱导仔猪小肠BBMV产生的K+扩散电位(膜囊内负)和H+扩散电位(膜囊内正)对Gly-Pro二肽跨膜转运的影响。结果表明:在有Na+和无Na+的状况下,K+扩散电位均促进Gly-Pro二肽由膜囊外进入膜囊内部;H+扩散电位抑制Gly-Pro二肽由膜囊外进入膜囊内部。结果提示:在仔猪小肠BBMV转运体系中,Gly-Pro二肽的跨膜转运具有与非Na+的阳离子协同转运的特点。 展开更多

关键词 膜电位 仔猪 刷状缘膜囊 二肽 转运

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钠离子对仔猪小肠刷状缘膜囊二肽跨膜转运的影响(英文)

9

作者 代建国 李德发 +2 位作者 朴香淑 陈洪亮 王春林 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期193-198,共6页

为研究Na+在仔猪小肠Gly-Pro跨膜转运中的作用,采用同位素示踪及体外孵育技术,观察在不同Na+浓度梯度条件下Gly-Pro在仔猪小肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)的跨膜转运量。结果表明:(1)用K+替代Na+,并没有降低Gly-Pr... 为研究Na+在仔猪小肠Gly-Pro跨膜转运中的作用,采用同位素示踪及体外孵育技术,观察在不同Na+浓度梯度条件下Gly-Pro在仔猪小肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)的跨膜转运量。结果表明:(1)用K+替代Na+,并没有降低Gly-Pro在BBMV中的转运量,在孵育前20min时间内,Gly-Pro的转运量稍稍提高;(2)Na+可使BBMV对L-丙氨酸的转运量提高到4.6倍,但不影响Gly-Pro的转运;二氢骆驼蓬碱显著地降低L-丙氨酸的转运,但对Gly-Pro的转运无影响。研究提示,Gly-Pro在仔猪小肠BBMV体系中的转运与Na+不存在依赖性的关系。 展开更多

关键词 钠离子浓度梯度 仔猪 刷状缘膜囊 二肽 转运

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重度烧伤鼠肠上皮细胞及其刷状缘谷氨酰胺转运的变化 被引量：4

10

作者 胡建红 王超 +1 位作者 吴丹 彭曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期800-804,共5页

目的探讨烧伤后肠上皮细胞及其刷状缘谷氨酰胺（glutamine,Gln）转运变化规律。方法将40只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组（8只）、烧伤组（烧伤后1、3、5、7 d,每个时相点8只）。正常对照组只麻醉和剃毛,不予烧伤;烧伤组给予90... 目的探讨烧伤后肠上皮细胞及其刷状缘谷氨酰胺（glutamine,Gln）转运变化规律。方法将40只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组（8只）、烧伤组（烧伤后1、3、5、7 d,每个时相点8只）。正常对照组只麻醉和剃毛,不予烧伤;烧伤组给予90℃水烫伤18 s,造成30%体表面积Ⅲ度烧伤。2组给予正常饮食及饮水。联合应用胶原酶Ⅸ和中性蛋白酶Ⅰ消化法提取大鼠小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）,采用Mg^2＋差速离心法制备大鼠小肠刷状缘膜囊泡（brush border membrane vesicles,BBMV）,检测进入BBMV及IEC中的[^3H]-Gln的放射性强度,观察伤前及烧伤后1、3、5、7 d大鼠肠道BBMV及IEC中Gln转运速率的变化。结果采用Mg^2＋差速离心法成功提取大鼠肠上皮BBMV。发现肠上皮细胞中Na＋依赖性Gln转运主要依靠BBMV,大约占总量的60%;烧伤第1天BBMV中Gln转运效率明显下降（P〈0.05,P〈0.01）,伤后3-7 d有所增高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。IEC中Na^＋依赖性Gln转运变化不明显,而非Na＋依赖性Gln转运则有逐步增高的趋势,在伤后7 d明显高于对照组（P〈0.05）。结论肠上皮细胞对Gln的转运主要依靠BBMV中Na^＋依赖性转运,烧伤后BBMV转运Gln的能力先降低后增高,而IEC对非Na＋依赖性Gln转运则呈逐步增高的趋势。 展开更多

关键词 烧伤 谷氨酰胺 肠上皮刷状缘膜囊泡 小肠上皮细胞 大鼠

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外翻肠囊法的应用研究 被引量：5

11

作者 徐运杰 方热军 《饲料研究》 CAS 北大核心 2009年第2期9-12,共4页

关键词 小肠 应用 体外培养 刷状缘膜囊 生理盐水 试验目的 混合气体 二氧化碳

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仔鸡外翻肠囊适宜培养时间的研究 被引量：1

12

作者 徐运杰 方热军 +1 位作者 霍振华 蒋小丰 《饲料工业》 北大核心 2009年第2期26-28,共3页

外翻肠囊法是在体外培养小肠肠环技术和刷状缘膜囊技术的基础上发展而来的，是指在动物麻醉无痛或屠宰状态下立即分离小肠，去掉肠系膜，用生理盐水或缓冲液冲洗干净，然后根据试验目的将所需肠段外翻使肠粘膜向外，结扎一端形成肠囊状... 外翻肠囊法是在体外培养小肠肠环技术和刷状缘膜囊技术的基础上发展而来的，是指在动物麻醉无痛或屠宰状态下立即分离小肠，去掉肠系膜，用生理盐水或缓冲液冲洗干净，然后根据试验目的将所需肠段外翻使肠粘膜向外，结扎一端形成肠囊状，灌注人工培养液后结扎另一端，置于添加有被测物质的培养液中，通入O2或95％O2和5％CO2的混合气体，培养一定时间后， 展开更多

关键词 培养时间 小肠 仔鸡 刷状缘膜囊 CO2 体外培养 生理盐水 试验目的

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内流质子梯度对Gly-Pro在仔猪小肠跨膜转运中的驱动作用

13

作者 代建国 李德发 +2 位作者 朴香淑 丁玉华 王春林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期558-562,共5页

为研究内流质子梯度对仔猪小肠中Gly-Pro跨膜转运的影响,采用放射性同位素示踪及体外孵育技术,观察在不同H+浓度条件下,Gly-Pro在仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush border membrane vesicles,BBMV)的跨膜转运量。结果表明:膜囊内液pH为7.5时,Gl... 为研究内流质子梯度对仔猪小肠中Gly-Pro跨膜转运的影响,采用放射性同位素示踪及体外孵育技术,观察在不同H+浓度条件下,Gly-Pro在仔猪小肠刷状缘膜囊(Brush border membrane vesicles,BBMV)的跨膜转运量。结果表明:膜囊内液pH为7.5时,Gly-Pro的转运显著地受到膜囊外液pH值的影响,pH为4.5～5.5时,转运最快;其中pH为5.0时的Gly-Pro跨膜转运速度在1-20 min一直高于pH为7.5时的转运速度;内流质子梯度的存在可以显著促进Gly-Pro的转运,无内流质子梯度时,Gly-Pro的转运不受膜囊外液pH变化的影响。研究结果提示,跨膜内流质子梯度是仔猪小肠中Gly-Pro的跨膜转运的一种驱动力。 展开更多

关键词 内流质子梯度 二肽 仔猪 刷状缘膜囊 转运

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生长猪小肠钠依赖型磷摄入特性的研究 被引量：2

14

作者 孙杰 张铁鹰 +2 位作者 陈志伟 韩进诚 刘志伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期108-112,共5页

选取6头体重接近的3月龄生长期大白猪,屠宰后刮下肠黏膜,提取3段小肠上皮细胞刷状缘膜囊泡(Brush-border membrane vesicles,BBMV)。在室温条件下,研究各段小肠BBMV磷的摄入量,pH和钠离子依赖性,并测定BBMV磷吸收动力学参数。结果表明,... 选取6头体重接近的3月龄生长期大白猪,屠宰后刮下肠黏膜,提取3段小肠上皮细胞刷状缘膜囊泡(Brush-border membrane vesicles,BBMV)。在室温条件下,研究各段小肠BBMV磷的摄入量,pH和钠离子依赖性,并测定BBMV磷吸收动力学参数。结果表明,生长猪BBMV对磷的主动吸收和被动扩散在酸性pH下均受到抑制。钠离子水平影响BBMV磷的主动吸收。pH7.4条件下,测得钠依赖型磷转运系统Hill系数(napp)为2.07,即转运1个磷酸根,至少有2个钠离子与其协同转运。不同肠段BBMV磷的主动吸收并没有显著差异。pH7.4条件下,生长猪钠依赖型磷转运系统对磷的亲和力常数(Km)为(0.43±0.09)mmol/L。最大转运速度(Vmax)为(2.25±0.19)nmol/(mg蛋白.15 s)。 展开更多

关键词 生长猪 刷状缘膜囊泡 磷摄入

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亚洲玉米螟对Cry9Ee与Cry1Ab蛋白的交互抗性分析 被引量：1

15

作者 王泽宇 周子珊 +3 位作者 何康来 束长龙 宋福平 张杰 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期882-888,共7页

Cry9Ee是近年来发现的对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)等害虫具有高毒力的蛋白,具有良好的应用前景。为了明确亚洲玉米螟对Cry9Ee和Cry1Ab蛋白是否存在交互抗性,本文首先分别表达、活化、纯化了Cry9Ee和Cry1Ab蛋白,进而... Cry9Ee是近年来发现的对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)等害虫具有高毒力的蛋白,具有良好的应用前景。为了明确亚洲玉米螟对Cry9Ee和Cry1Ab蛋白是否存在交互抗性,本文首先分别表达、活化、纯化了Cry9Ee和Cry1Ab蛋白,进而对敏感和Cry1Ab抗性亚洲玉米螟进行生物活性测定;随后对2种蛋白在敏感亚洲玉米螟中肠刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,简称BBMVs)上的结合进行分析比较。生物活性测定结果表明,Cry9Ee和Cry1Ab蛋白的活性片段对敏感亚洲玉米螟的LC50分别为3.04和0.89μg/g;而Cry9Ee活性片段在5.00μg/g的浓度下,对Cry1Ab蛋白抗性亚洲玉米螟致死率高达96%,与对敏感种群活性相当。竞争结合试验表明,Cry9Ee和Cry1Ab两种蛋白间不存在竞争结合,推测它们在亚洲玉米螟中肠上存在不同的受体。综合生物活性测定及体外结合试验两方面结果得出结论:亚洲玉米螟对Cry9Ee与Cry1Ab蛋白不存在交互抗性。cry9Ee基因可以作为理想的候选基因,用于我国新一代转基因抗虫玉米的研制,为延缓和克服亚洲玉米螟对转基因抗虫玉米抗性的产生提供重要保证。 展开更多

关键词 Cry9Ee蛋白 亚洲玉米螟 刷状缘膜囊泡 交互抗性

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棉铃虫幼虫中肠细胞脂筏的制备及鉴定

16

作者 苏建亚 余杰 +1 位作者 韦宏伟 畅宏 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期33-38,共6页

脂筏是细胞膜上富含胆固醇、鞘脂类和糖基磷脂酰肌醇锚着蛋白的去垢剂不溶性微结构域,被认为是多种细胞膜孔毒素在细胞表面形成寡聚体的平台。为研究脂筏与Bt毒素在细胞膜上形成寡聚体膜孔的关系,本文对棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫... 脂筏是细胞膜上富含胆固醇、鞘脂类和糖基磷脂酰肌醇锚着蛋白的去垢剂不溶性微结构域,被认为是多种细胞膜孔毒素在细胞表面形成寡聚体的平台。为研究脂筏与Bt毒素在细胞膜上形成寡聚体膜孔的关系,本文对棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫中肠脂筏的制备与鉴定方法进行了研究。根据脂筏在低温(4℃)下不溶于去垢剂的特性,采用Triton X-100处理棉铃虫幼虫中肠刷状缘膜囊泡,溶解非脂质筏成分,以OptiPrep为介质进行密度梯度离心,分离去垢剂不溶组分,成功地得到了棉铃虫幼虫中肠上皮细胞的脂筏。再以脂筏的特有化学成分神经节苷脂GM1作为脂筏的标志分子,利用霍乱毒素β亚基能与GM1特异性结合的特性,以辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素β亚基用点印迹法化学发光检测神经节苷脂的分布,从而对脂筏进行定性鉴定。结果表明我们建立的脂筏制备方法简便、易行,比传统的蔗糖梯度离心法大大缩短了制备所需时间。 展开更多

关键词 棉铃虫 脂筏 中肠 刷状缘膜囊泡 OptiPrep

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高效液相色谱法评定二肽水解的研究

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作者 代建国 卿中全 +3 位作者 刘忠宝 马立农 李德发 朴香淑 《饲料研究》 CAS 2003年第7期28-29,36,共3页

用高效液相色谱法测定了仔猪小肠刷状缘膜囊 (BrushBorderMembraneVesicles ,BBMV)孵育体系中甘 -L -亮 (Gly -Leu)和L -组 -L -亮 (His -Leu)等两种二肽的含量。分别以水 (pH值为 5 .5 5 )和乙腈 -三氟乙酸 (三氟乙酸浓度为 0 .1% )为... 用高效液相色谱法测定了仔猪小肠刷状缘膜囊 (BrushBorderMembraneVesicles ,BBMV)孵育体系中甘 -L -亮 (Gly -Leu)和L -组 -L -亮 (His -Leu)等两种二肽的含量。分别以水 (pH值为 5 .5 5 )和乙腈 -三氟乙酸 (三氟乙酸浓度为 0 .1% )为流动相 ,经PhenomennexODS分析柱(2 5 0mm× 4 .6 0mm ,5 μm ,C18)分离 ,检测波长为 190～ 4 0 0nm。结果表明 ,两种二肽在 0～30 0 μgmL- 1的之间 ,其峰面积 (X)对质量浓度 (Y ,μgmL- 1)回归得方程分别Y =0 .0 0 0 1X +0 .8719,R2 =0 .9999和Y =0 .0 0 0 0 6X +6 .6 312 8,R2 =0 .9982 ;回收率依次为 99.91%和10 0 .0 5 % ,保留时间依次为 2 .0 7和 1.0 1min ;最大吸收波长依次为 197和 199nm。该方法快速、简便和准确 ,结果稳定 ,重现性好 ,可以用来评定该两种二肽在动物小肠BBMV体系中的水解状况。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 仔猪 甘—L—亮二肽 L—组—L—亮二肽 小肠刷状缘膜囊孵育体系 水解 含量 测定

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杀虫活性化合物杠柳新苷P对东方粘虫中肠细胞上结合蛋白的影响 被引量：2

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作者 齐猛 何振宇 +1 位作者 李任丰 胡兆农 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1250-1256,共7页

杠柳新苷P是从杠柳根皮提取物中分离得到的一种甾体糖苷类化合物,对东方粘虫表现出较好的杀虫活性。为了进一步研究其杀虫机理,探究杠柳新苷P作用于东方粘虫中肠疑似作用位点,通过对杠柳新苷P进行结构修饰,与东方粘虫幼虫中肠刷状缘膜囊... 杠柳新苷P是从杠柳根皮提取物中分离得到的一种甾体糖苷类化合物,对东方粘虫表现出较好的杀虫活性。为了进一步研究其杀虫机理,探究杠柳新苷P作用于东方粘虫中肠疑似作用位点,通过对杠柳新苷P进行结构修饰,与东方粘虫幼虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)组织体外孵育,利用其结构修饰后增强的紫外吸收特性,经蛋白分离、纯化,进而得到杠柳新苷P作用于粘虫中肠BBMV上的结合蛋白。结果表明:在粘虫中肠BBMV上存在杠柳新苷P的疑似结合蛋白,且经分离鉴定得到5种疑似结合蛋白,分别为类异翅盘蛋白、氨肽酶、二硫键异构酶、苯基贮存蛋白以及精氨酸激酶;通过进一步的分析推测,氨肽酶可能是杠柳新苷P作用于东方粘虫幼虫中肠BBMV上的结合蛋白。初步明确杠柳新苷P作用于东方粘虫中肠的疑似作用位点,但仍需进一步的验证工作进行确认,为今后研究杠柳新苷类化合物的作用机理及靶标提供依据。 展开更多

关键词 杠柳新苷P 东方粘虫 刷状缘膜囊泡 结合蛋白

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Cry2Aa毒素对小菜蛾的杀虫机理

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作者 刘媛 林洁茹 +5 位作者 林曼曼 张霄 徐重新 陈蔚 罗楚平 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期762-768,共7页

为研究苏云金杆菌Cry2Aa毒素的生物活性及杀虫机理,先利用浸叶法测定了商品化的Cry2Aa毒素对小菜蛾的杀虫活性,并用石蜡包埋切片后进行免疫组化分析,再用ELISA法测定了Cry2Aa毒素与小菜蛾刷状缘膜囊泡(BBMV)的结合曲线,最后通过Ligand b... 为研究苏云金杆菌Cry2Aa毒素的生物活性及杀虫机理,先利用浸叶法测定了商品化的Cry2Aa毒素对小菜蛾的杀虫活性,并用石蜡包埋切片后进行免疫组化分析,再用ELISA法测定了Cry2Aa毒素与小菜蛾刷状缘膜囊泡(BBMV)的结合曲线,最后通过Ligand blot法和肽指纹质谱对小菜蛾BBMV与Cry2Aa毒素的结合蛋白进行了分离与鉴定。结果表明,Cry2Aa毒素对小菜蛾的半数致死浓度(LC_(50))为27.90μg/ml。Cry2Aa毒素与小菜蛾中肠上皮细胞存在结合,与小菜蛾BBMV的表观结合亲和力为266.6 nmol/L。小菜蛾BBMV与Cry2Aa毒素存在5条主要结合条带,其中分子量2.45×10~5上方的主结合条带酶解后得到ATYSEGPNGSVR片段,通过数据库比对分析,匹配到一个分子量为3.32×10~5的小菜蛾未鉴定蛋白,其功能注释为脂质运载蛋白。 展开更多

关键词 Cry2Aa 小菜蛾 杀虫活性 刷状缘膜囊泡(bbmv) 免疫组化分析

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