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犬利什曼原虫病在中国北方地区的流行现状与防控
1
作者 杜讴宇 《中国工作犬业》 2025年第11期63-65,共3页
一、犬利什曼原虫病概述利什曼原虫泛指锥虫科利什曼属的原虫,是一类专性细胞内寄生的鞭毛虫。昆虫白蛉是利什曼原虫最主要的媒介宿主,啮齿类和犬科动物是主要的储存宿主,人类可以是偶然宿主。利什曼原虫有多种模式感染人及犬类动物,其... 一、犬利什曼原虫病概述利什曼原虫泛指锥虫科利什曼属的原虫,是一类专性细胞内寄生的鞭毛虫。昆虫白蛉是利什曼原虫最主要的媒介宿主,啮齿类和犬科动物是主要的储存宿主,人类可以是偶然宿主。利什曼原虫有多种模式感染人及犬类动物,其中以内脏型和皮肤型为主,并表现出不同的病理变化。内脏型利什曼原虫病以发热、贫血、肝脾肿大、鼻衄及齿龈出血、体重下降等为典型的临床症状,皮肤型利什曼原虫病则以皮肤病变为主,常见有非瘙痒性的剥脱性皮炎,可能脱毛(或无脱毛)、糜烂性溃疡性皮炎、结节性/丘疹性皮炎等。 展开更多
关键词 内脏型利什曼原虫病 流行现状 北方地区
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北京市西部山区犬利什曼原虫病的诊断和分析
2
作者 杜鹃 张玮 +7 位作者 吴迪 于海浪 杨璐 苗东影 李刚 陈会玲 李蕊 赵浩军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期54-58,共5页
本试验对在北京市西部山区调查发现的1例犬利什曼原虫病临床疑似病例开展了诊断和分析,采用血液检查、淋巴穿刺液显微镜检查、血清胶体金抗体检测、皮屑样品荧光定量PCR检测以及核糖体DNA转录间隔区I(ITS-1)基因扩增和测序分析对病例开... 本试验对在北京市西部山区调查发现的1例犬利什曼原虫病临床疑似病例开展了诊断和分析,采用血液检查、淋巴穿刺液显微镜检查、血清胶体金抗体检测、皮屑样品荧光定量PCR检测以及核糖体DNA转录间隔区I(ITS-1)基因扩增和测序分析对病例开展全面诊断。结果显示,该病例红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、淋巴细胞百分比、白蛋白、碱性磷酸酶低于参考范围,球蛋白、钙离子、肌酸激酶高于参考范围,呈现寄生虫感染的典型特征;显微镜下可以观察到明显利什曼原虫虫体;胶体金抗体检测和荧光定量PCR检测结果均为阳性;基因序列分析结果显示本病例ITS-1基因与以色列婴儿利什曼原虫KM677134.1聚为一支。结合地理来源,表明该地区流行株为山丘型婴儿利什曼原虫。 展开更多
关键词 利什曼原虫 诊断 分析
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甘肃文县婴儿利什曼原虫无症状感染犬的检测 被引量：29
3
作者 汪俊云 陈生邦 +7 位作者 高春花 金长发 冯宇 张丑吉 何慧娴 杨成明 杨涛 包意芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期734-737,共4页
目的评价PCR法、ELISA法和试条法检测我国婴儿利什曼原虫无症状感染犬的潜能。方法用两组PCR引物RV1-RV2和K13A-K13B检测动物源型黑热病疫区健康犬静脉血和骨髓中利什曼原虫特异DNA,以利什曼原虫可溶性抗原为包被抗原的ELISA法和rk39-di... 目的评价PCR法、ELISA法和试条法检测我国婴儿利什曼原虫无症状感染犬的潜能。方法用两组PCR引物RV1-RV2和K13A-K13B检测动物源型黑热病疫区健康犬静脉血和骨髓中利什曼原虫特异DNA,以利什曼原虫可溶性抗原为包被抗原的ELISA法和rk39-dipstick试条法分别检测利什曼原虫特异抗体,并比较各种检测方法的敏感性差异。结果PCR法检测抗凝静脉血和骨髓的阳性率分别为50.63%(40/79)和69.62%(55/79),两种样本总检出率为77.21%(61/79);ELISA法检测的阳性率为22.22%(16/72),而rk39-dipstick试条检测的阳性率为33.33%(19/57)。结论我国动物源性黑热病疫区利什曼原虫无症状感染犬的比例相当高,以骨髓为样本的PCR检测法为较精确的犬无症状感染检测方法。 展开更多
关键词 婴儿利什曼原虫 无症状感染 PCR ELISA rk39-dipstick
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用McAb-AST及骨髓涂片法对四川省汶川县犬感染利什曼原虫的调查研究 被引量：14
4
作者 胡孝素 林芳清 +7 位作者 阚兵 吴远祥 张安治 李国茹 陈明 张先钦 蒋能富 张显林 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1991年第4期5-7,共3页
作者等用单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法对汶川县125只犬进行感染利什曼原虫调查,骨髓涂片法查出原虫的阳性犬46只,感染率为36.8％,较之历年来陇南、川北报道的犬感染率为高,不但查明了当地犬感染利什曼原虫的严重... 作者等用单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法对汶川县125只犬进行感染利什曼原虫调查,骨髓涂片法查出原虫的阳性犬46只,感染率为36.8％,较之历年来陇南、川北报道的犬感染率为高,不但查明了当地犬感染利什曼原虫的严重性,且为本年在白蛉繁殖季节前消除这些传染源提供了确切依据。为了研究对犬利什曼病的简易、准确的调查方法,我们同时用McAb-AST对该125只犬的血清,检测其循环抗原,结果与骨髓涂片阳性符合率为97.8％,总符合率95.2％,可望取代骨髓涂片法。 展开更多
关键词 利什曼原虫 单克隆抗体 抗原斑点法
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利什曼原虫研究进展 被引量：7
5
作者 李琳 马丽敏 +2 位作者 靳朝 夏志平 刘全 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期97-100,共4页
利什曼原虫能够引发利什曼原虫病,其黏附于巨噬细胞,黏附后随巨噬细胞的吞噬活动进入细胞内并大量增殖,使感染者肝脾肿大,然而由于感染途径、剂量和种株的不同,利什曼原虫的致病性也存在差异。利什曼原虫的检测方法有许多,常见有ELISA、... 利什曼原虫能够引发利什曼原虫病,其黏附于巨噬细胞,黏附后随巨噬细胞的吞噬活动进入细胞内并大量增殖,使感染者肝脾肿大,然而由于感染途径、剂量和种株的不同,利什曼原虫的致病性也存在差异。利什曼原虫的检测方法有许多,常见有ELISA、PCRI、FAT等。PCR技术不光应用于诊断利什曼原虫病,还被广泛应用于利什曼原虫的种属鉴定及不同种利什曼原虫体内基因的表达和克隆等方面。另外,原位杂交方法也可检测利什曼原虫,但应用原位杂交方法对利什曼原虫进行的研究还较少。利什曼原虫体内存在一种高度保守性蛋白(LACK),国外学者认为LACK是研究利什曼原虫疫苗的一个很好的候选抗原。 展开更多
关键词 利什曼原虫 致病性 PCR 原位杂交 疫苗
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甘肃省2县犬感染利什曼原虫影响因素分析 被引量：5
6
作者 李凡 余大为 +5 位作者 杨成明 冯宇 杨俊克 刘林林 关真平 张永福 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期763-766,772,共5页
目的了解甘肃省犬感染利什曼原虫影响因素,为探索犬源型黑热病防控新方法提供依据。方法在甘肃省迭部县和文县犬源型黑热病流行区,通过入户问卷调查及犬血PCR检测,调查当地家犬位置、居住场所环境、犬离房屋距离、犬来源、犬主黑热病知... 目的了解甘肃省犬感染利什曼原虫影响因素,为探索犬源型黑热病防控新方法提供依据。方法在甘肃省迭部县和文县犬源型黑热病流行区,通过入户问卷调查及犬血PCR检测,调查当地家犬位置、居住场所环境、犬离房屋距离、犬来源、犬主黑热病知识知晓状况和犬感染利什曼原虫现状等信息。利用IBM SPSS23.0 Pearsonχ2检验和多元Logistic回归分析与犬感染利什曼原虫有关的影响因素。结果共调查当地居民445人,家犬537只。家犬血样利什曼原虫PCR检测阳性率为41.15%(221/537),其中文县PCR检测阳性率64.63%(95/147),迭部县PCR检测阳性率32.31%(126/390)。村中央和村边缘犬的阳性率分别为33.92%(96/283)和49.21%(125/254),两者之间有统计学差异(χ2=12.923,P=0.000)。居住场所附近房屋墙面为砖混/粉刷墙壁的犬和附近为土坯/石片墙壁的犬,阳性率分别为30.99%(110/355)、60.99%(111/182),两者之间有统计学差异(χ2=44.723,P=0.000)。家庭存在阳性犬的犬主是否知晓黑热病基础知识与犬感染无统计学差异。多因素分析犬的环境位置、犬居住场所附近房屋条件显示与犬感染具有显著相关性。结论甘肃省文县和迭部县分布在村边缘的犬、犬附近房屋墙壁土坯/石片结构是犬感染的影响因素。针对不同的影响因素应制定针对性的防治措施,减少黑热病和犬利什曼病的传播。 展开更多
关键词 犬 利什曼原虫 PCR 影响因素
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利什曼原虫—DNA重复序列在虫种鉴定上的价值分析 被引量：9
7
作者 汪俊云 高春花 +1 位作者 杨玥涛 包意芳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期304-308,共5页
目的　通过分析和比较我国利什曼原虫分离株与相应的利什曼原虫世界卫生组织(WHO)参照株在一种DNA重复序列上的同源性以考察这一DNA重复序列应用于鉴别我国利什曼原虫的价值。方法　PCR扩增各利什曼原虫分离株的DNA重复序列片段并测序,... 目的　通过分析和比较我国利什曼原虫分离株与相应的利什曼原虫世界卫生组织(WHO)参照株在一种DNA重复序列上的同源性以考察这一DNA重复序列应用于鉴别我国利什曼原虫的价值。方法　PCR扩增各利什曼原虫分离株的DNA重复序列片段并测序,用GENEDOC软件比较扩增的各分离株DNA重复序列的同源性。结果　该DNA重复序列在种内各利什曼原虫分离株间完全同源或高度同源(99%～10 0 % ) ,且碱基变异具有高度稳定性,而在种间则显示相当的差异(一般同源性小于90 % )。结论　该DNA重复序列在我国利什曼原虫的鉴定上有较好的实用价值。 展开更多
关键词 利什曼原虫 DNA重复序列 虫株鉴定
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墨西哥利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因克隆化与序列分析 被引量：9
8
作者 成军 钟彦伟 +3 位作者 刘妍 董菁 杨继珍 陈菊梅 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期39-41,共3页
目的克隆墨西哥利什曼原虫（L．mex）WR972株的无鞭毛体蛋白（amastin）的编码基因，并对其同源核苷酸序列进行分析。方法根据已克隆的亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列，设计并合成无鞭毛体蛋白基因特异性引物，以墨西哥利... 目的克隆墨西哥利什曼原虫（L．mex）WR972株的无鞭毛体蛋白（amastin）的编码基因，并对其同源核苷酸序列进行分析。方法根据已克隆的亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列，设计并合成无鞭毛体蛋白基因特异性引物，以墨西哥利什曼原虫WR972株的基因组DNA作为模板，进行多聚酶链反应（PCR）扩增。将扩增的DNA片段克隆到pCR2．1T载体中，进行测序，并对同源的核苷酸序列分析、比较。结果从体外培养的墨西哥利什曼原虫WR972株提取基因组DNA，以无鞭毛体蛋白基因特异性引物进行PCR扩增获得550bp的DNA片段。克隆到pCE2．1T载体片段进行的序列测定结果表明，获得了墨西哥利什曼原虫的无鞭毛体蛋白编码基因片段，与亚马逊利什曼原虫的无鞭毛体蛋白基因之间具有高度的同源性。结论实现了墨西哥利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的克隆化，为进一步研究其表达及作为疫苗研究的候选基因奠定了基础。 展开更多
关键词 利什曼原虫 无鞭毛体蛋白 基因克隆化
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杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶-2C的基因克隆化与序列分析 被引量：6
9
作者 成军 夏小兵 +4 位作者 王刚 刘妍 钟彦伟 王琳 杨继珍 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期37-39,共3页
目的　克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。... 目的　克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。以夏科氏利什曼原虫 (Leishmaniachagasi,Lc)的PP2C基因序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫PP2C基因序列特异性的引物。结果　以杜氏利什曼原虫的基因组为模板 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫PP2C的全长编码基因。基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株PP2C基因序列长度为 1317bp ,开放读码框架由 12 2 1bp组成 ,编码产物为 40 6个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的PP2C基因与来源于夏科氏利什曼原虫的PP2C氨基酸残基序列的同源性为 95 % (387/ 40 6 )。结论　本研究克隆了杜氏利什曼原虫的PP2C基因 。 展开更多
关键词 杜氏利什曼原虫 蛋白磷酸酶2C 基因疫苗 T细胞抗原 基因克隆化 序列分析
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不同种株利什曼原虫的比较蛋白质组学分析 被引量：4
10
作者 沈成义 邓世山 +2 位作者 张仁刚 张洁 敬保迁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期410-413,共4页
目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质表达状况。方法制备杜氏利什曼原虫四川SC6株、杜氏利什曼原虫四川SC10株和硕大利什曼原虫5ASKH株前鞭毛体总蛋白,以pH范围3-10的预制胶条进行双向电泳(2-D),考马斯亮蓝染色,PDQust软件分析凝... 目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质表达状况。方法制备杜氏利什曼原虫四川SC6株、杜氏利什曼原虫四川SC10株和硕大利什曼原虫5ASKH株前鞭毛体总蛋白,以pH范围3-10的预制胶条进行双向电泳(2-D),考马斯亮蓝染色,PDQust软件分析凝胶,主要差异蛋白点用电喷雾质谱法进行鉴定。结果等量的杜氏利什曼原虫四川SC6株、杜氏利什曼原虫四川SC10株和硕大利什曼原虫5ASKH株前鞭毛体总蛋白均获近700个蛋白点,不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质2-D图谱中,14蛋白点呈恒定差异表达,从中鉴定出10个功能明确的蛋白质,分别具有下列生物功能:糖代谢与磷脂合成(烯醇酶、变旋酶、NADP依耐乙醇脱氢酶、乙醇胺磷酸胞苷酸转移酶),压力反应(细胞内过氧化物酶、锥虫还原蛋白过氧化物酶),细胞膜/细胞骨架(α-微管蛋白、β-微管蛋白),核酸代谢(琥珀酰辅酶A连接酶(GDP形成)、内源性RNA酶L-PSP(pb5)),细胞周期与增殖(延伸因子2)。结论不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质的表达存在不同,为理解不同种株利什曼原虫的毒力、免疫原性和代谢特征提供了新的视角。 展开更多
关键词 利什曼原虫 比较蛋白质组学 表达
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热休克蛋白70(hsp70)基因对利什曼原虫中国分离株的系统发育分析 被引量：4
11
作者 张春莹 黄玉霞 +2 位作者 袁余 胡孝素 马莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期163-168,190,共7页
目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并... 目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并构建系统发育树,同时与国外利什曼原虫分离株的hsp70序列共同分析,观察利什曼原虫中国分离株在世界范围利什曼原虫的系统发育和分子进化中的地位。结果中国各流行疫区利什曼原虫均获得约1 300bp长度的hsp70基因片段,存在丰富的多态位点。中国23株利什曼原虫经hsp70基因分型聚集为四群,其中人来源的原虫分离株均在A群,为杜氏利什曼原虫(L.donovani),并分为杜氏利什曼原虫指名亚种(L.donovani)和杜氏利什曼原虫婴儿亚种(L.infantum)两个亚支;分离自新疆沙鼠或白蛉的6株利什曼原虫聚在B群,为都兰利什曼原虫(L.turanica);分离自新疆白蛉和内蒙古沙鼠的两株利什曼原虫为C群沙鼠利什曼原虫(L.gerbilli);分离自内蒙古蜥蜴和新疆白蛉的两株原虫为D群蜥蜴利什曼原虫(Sauroleishmania)。结论利什曼原虫中国分离株属于利什曼原虫亚属的不同种和蜥蜴利什曼原虫亚属,我国利什曼原虫分离株的种系发育复杂多样。 展开更多
关键词 利什曼原虫 种系发育 热休克蛋白70(hsp70)基因
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陕西省韩城市利什曼原虫SSU rRNA基因系统发育研究 被引量：4
12
作者 张铮 李欣妍 +3 位作者 刘东立 王凤萍 王安礼 王天海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期550-554,共5页
目的了解陕西省韩城市黑热病区利什曼原虫种类及分子遗传特征。方法对来自韩城市的利什曼原虫阳性标本,进行SSU rRNA基因序列扩增,扩增产物进行测序,与其它不同种类、不同地区利什曼原虫的SSU rRNA基因序列进行比对,分析突变位点规律,... 目的了解陕西省韩城市黑热病区利什曼原虫种类及分子遗传特征。方法对来自韩城市的利什曼原虫阳性标本,进行SSU rRNA基因序列扩增,扩增产物进行测序,与其它不同种类、不同地区利什曼原虫的SSU rRNA基因序列进行比对,分析突变位点规律,建立系统发育树。结果有3份标本SSU rRNA基因序列扩增测序成功,其基因序列与杜氏利什曼原虫、夏科氏利什曼原虫、婴儿利什曼原虫的SSU rRNA序列同源性较高,与婴儿利什曼原虫在UQ-II突变区有一个位点的变异,并与新疆荒漠虫株、甘肃省利什曼虫株聚为一类。结论结合流行病学与SSU rRNA序列分析结果,陕西省韩城市黑热病病原体应为婴儿利什曼原虫。 展开更多
关键词 利什曼原虫 SSU RRNA 系统发育 分子鉴定 陕西
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我国山丘疫区杜氏利什曼原虫LACK保护性抗原基因克隆和序列分析 被引量：4
13
作者 卜玲毅 胡孝素 易桃林 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期20-23,共4页
利什曼原虫的LACK抗原是利什曼原虫的蛋白激酶C受体的同源物 ,是新发现的一种抗原蛋白。本实验用分子克隆的方法获得我国山丘疫区杜氏利什曼原虫编码LACK保护性抗原的基因片段 ,测序并对其序列分析比较。我国山丘疫区杜氏利什曼原虫 (L ... 利什曼原虫的LACK抗原是利什曼原虫的蛋白激酶C受体的同源物 ,是新发现的一种抗原蛋白。本实验用分子克隆的方法获得我国山丘疫区杜氏利什曼原虫编码LACK保护性抗原的基因片段 ,测序并对其序列分析比较。我国山丘疫区杜氏利什曼原虫 (L dSC10 )LACK抗原基因片段的大小为 94 2bp ,与GenBank中LACK的核苷酸序列一致性在 94 %以上 ,呈高度同源性 ;推导的氨基酸序列与GenBank中LACK的氨基酸序列一致性达 95 %以上 ,具有高度保守性 ;该蛋白质属于WD蛋白家族 ,有重要的生物学意义。 展开更多
关键词 利什曼原虫 LACK抗原 聚合酶链反应 克隆 序列分析 氨基酸 中国 山丘疫区
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不同种株利什曼原虫对Balb/c小鼠和金黄地鼠的致病性研究 被引量：4
14
作者 张仁刚 张洁 敬保迁 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第2期202-206,F0003,共6页
为了比较不同种株利什曼原虫对实验动物的致病性,分别将5×107的杜氏利什曼原虫SC6株、热带利什曼原虫K27株、婴儿利什曼原虫LEM235株和婴儿利什曼原虫KXG-Liu株前鞭毛体与无鞭毛体感染Balb/c小鼠和金黄地鼠,观察各感染动物皮肤损... 为了比较不同种株利什曼原虫对实验动物的致病性,分别将5×107的杜氏利什曼原虫SC6株、热带利什曼原虫K27株、婴儿利什曼原虫LEM235株和婴儿利什曼原虫KXG-Liu株前鞭毛体与无鞭毛体感染Balb/c小鼠和金黄地鼠,观察各感染动物皮肤损害状况,3月后,有限稀释培养法分别检测肝和脾脏内的虫荷数。发现不同种株利什曼原虫引起的疾病存在极大的异质性,杜氏利什曼原虫四川SC6株致Balb/c小鼠轻微皮肤损害,肝和脾脏内重度虫荷数,金黄地鼠肝和脾脏内重度虫荷数;热带利什曼原虫K27株致Balb/c小鼠严重的皮肤损害,但肝和脾脏的虫荷数较低,金黄地鼠肝和脾脏中未查见原虫;婴儿利什曼原虫LEM235株致Balb/c小鼠严重的皮肤损害,肝和脾脏内重度虫荷数,金黄地鼠肝和脾脏内重度虫荷数;婴儿利什曼原虫KXG-Liu株可致Balb/c小鼠严重的皮肤损害,肝和脾脏中度虫荷数,金黄地鼠肝和脾脏内少量虫荷数。另外,还发现原虫的生活史状态和进入机体的途径及实验动物的类型对不同种株利什曼原虫感染致病产生影响。 展开更多
关键词 利什曼原虫 感染 BALB/C 金地鼠
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利什曼原虫动物宿主研究进展 被引量：3
15
作者 陈凯 伍卫平 官亚宜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期462-466,共5页
利什曼病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。诸多国内外研究显示,除了犬以外,其他动物也能感染利什曼原虫并可在利什曼病传播中起一定的作用。本文对犬之外的动物感染利什曼原虫的研究进展作一综述。
关键词 利什曼原虫 动物 宿主 综述
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杜氏利什曼原虫amastin基因重组真核表达质粒的构建与表达 被引量：2
16
作者 李金福 陈建平 +3 位作者 杨志伟 田玉 马莹 胡孝素 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期217-219,222,共4页
目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amas-tin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin,并研究其在NIH3T3细胞中的表达。方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增。将扩增的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒pcDNA3.1(+)中,构... 目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amas-tin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin,并研究其在NIH3T3细胞中的表达。方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增。将扩增的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。以pcDNA3.1-amastin转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光染色法和RT-PCR分别鉴定pcDNA3.1-amastin的瞬时表达和稳定表达。结果:在细胞膜和细胞内均观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA3.1-amastin成功地转入NIH3T3细胞,并在细胞膜和细胞内获得短暂表达。稳定转染的NIH3T3细胞的总RNA经反转录后,用PCR扩增出无鞭毛体蛋白基因,表明获得了稳定表达。结论:成功地构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的真核表达重组质粒,并且该基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达。 展开更多
关键词 杜氏利什曼原虫 无鞭毛体蛋白基因 体外表达
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杜氏利什曼原虫LACK抗原基因的克隆和表达 被引量：1
17
作者 卜玲毅 胡孝素 +2 位作者 敬保迁 王雅静 马莹 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期42-44,共3页
目的　在大肠杆菌中高效表达纯化杜氏利什曼原虫的LACK抗原。方法　以本实验室的重组质粒T -LACK为模板 ,PCR扩增得到LACK抗原基因 ,与表达载体pQE31定向重组 ,转化到宿主菌M 15中进行表达和纯化 ,并以SDS -PAGE和Western -blotting进... 目的　在大肠杆菌中高效表达纯化杜氏利什曼原虫的LACK抗原。方法　以本实验室的重组质粒T -LACK为模板 ,PCR扩增得到LACK抗原基因 ,与表达载体pQE31定向重组 ,转化到宿主菌M 15中进行表达和纯化 ,并以SDS -PAGE和Western -blotting进行鉴定。结果　 1 SDS -PAGE电泳检测 ,重组质粒 pQE31-LACK的全菌蛋白没有出现明显的特异表达带 ,而纯化蛋白和包涵体溶解物在 36kDa处均出现了特异的表达带。 2 36kDa的纯化蛋白被抗利什曼原虫鼠血清清晰地识别。结论　得到了高效表达的LACK纯化蛋白 。 展开更多
关键词 利什曼原虫 LACK 聚合酶链反应 克隆 表达 免疫印迹
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不同种株利什曼原虫前鞭毛体体外向无鞭毛体转化的研究 被引量：2
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作者 张仁刚 敬保迁 +1 位作者 张洁 杨健 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第4期488-492,共5页
目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在不同体外培养条件下向无鞭毛体的转化。方法将6个对数生长期的不同种株利什曼原虫前鞭毛体接种于含M199和RPMI1640复合培养液的24孔板内,在不同温度、pH值、血清、CO2下培养,第3天和第6天分类计数... 目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在不同体外培养条件下向无鞭毛体的转化。方法将6个对数生长期的不同种株利什曼原虫前鞭毛体接种于含M199和RPMI1640复合培养液的24孔板内,在不同温度、pH值、血清、CO2下培养,第3天和第6天分类计数不同形态的原虫。结果当培养温度为26℃,而其他培养条件发生变化时,利什曼原虫的增殖速度发生变化,大多数原虫保持前鞭毛体典型性形态,运动活跃。当培养温度上升至37℃,不论其他培养条件如何变化,原虫均沉积于培养孔底,停止增殖,运动减缓,显著地向中间体和无鞭毛体转化,酸性pH值和5%CO2可促进前鞭毛体转化为无鞭毛体,新生小牛血清可延长无鞭毛体的成活。但相同的培养条件下,杜氏利什曼原虫转化效率低于其他种株利什曼原虫。结论温度是影响利什曼原虫前鞭毛体转化为无鞭毛体的基本因素,酸性pH值与CO2可协同温度促进转化,不同种株利什曼原虫的遗传异质性可影响转化效率。 展开更多
关键词 利什曼原虫 无鞭毛体 体外培养
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蜥蜴利什曼原虫表达柔嫩艾美耳球虫SAG2基因的保护效果检测 被引量：1
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作者 郭衍冰 曹利利 +3 位作者 姚新华 董航 姜旭 苑淑贤 《吉林畜牧兽医》 2017年第8期7-10,共4页
本试验将已构建的PLEXSY-neo2-SAG2在蜥蜴利什曼原虫中表达,以皮下注射的方式免疫雏鸡,经检测各组体液和细胞免疫水平、OPG、相对增重率及ACI等指标,对重组蛋白的抗球虫保护效果做出评价,为制备相关疫苗的研究奠定基础。
关键词 蜥蜴利什曼原虫 柔嫩艾美耳球虫 SAG2基因 保护效果
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我国利什曼原虫伽师株有毒力和无毒力前鞭毛体定量蛋白质组学比较分析
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作者 危芙蓉 高春花 +2 位作者 汪俊云 杨玥涛 石锋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期97-102,共6页
目的应用定量蛋白质组学方法比较我国利什曼原虫伽师株有毒力和无毒力前鞭毛体蛋白表达的差异。方法将分离于我国新疆伽师县黑热病患者婴儿利什曼原虫JS5有毒力株前鞭毛体和无毒力株前鞭毛体经酶解后进行液相色谱串联质谱(Liquid chroma... 目的应用定量蛋白质组学方法比较我国利什曼原虫伽师株有毒力和无毒力前鞭毛体蛋白表达的差异。方法将分离于我国新疆伽师县黑热病患者婴儿利什曼原虫JS5有毒力株前鞭毛体和无毒力株前鞭毛体经酶解后进行液相色谱串联质谱(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)的非标记(Label-free)定量分析,利用MaxQuant软件查库,进行Label-free非标定量(LFQ)分析;每个样品重复3次质谱分析,只有1次有LFQ值的蛋白舍弃。结果本研究共鉴定蛋白3 994个,有毒力和无毒力株间差异蛋白为298个(差异倍数>1.2或差异倍数<0.83,P<0.05),其中利什曼原虫有毒力株前鞭毛体特有表达蛋白15个,无毒力株前鞭毛体特有表达蛋白23个,二者间表达丰度有显著差异蛋白260个,其中有毒力前鞭毛体表达上调蛋白(高表达)78个,表达下调蛋白(低表达)182个。这些差异表达蛋白中已鉴定功能的蛋白分别涉及糖与脂质代谢、核酸代谢、压力反应、细胞骨架形成、细胞周期与增殖等生物功能。结论利什曼原虫伽师株有毒力株和无毒力株前鞭毛体蛋白质组的表达存在差异,为筛选和鉴定与利什曼原虫感染相关关键分子奠定了基础。 展开更多
关键词 利什曼原虫 有毒力株 无毒力株 比较蛋白质组学 差异蛋白 表达
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