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猪链球菌2型分泌核酸酶(SsnA)的表达、ELISA方法建立及其在鉴别诊断中的应用被引量：2: 1; 作者朱剑康超 +1 位作者张安定金梅林《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期228-235,共8页; 猪链球菌2型（Streptococcussuis type 2,SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌,严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组... 展开更多; 关键词猪链球菌2型分泌核酸酶(ssna) 鉴别诊断 ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

貂源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析被引量：1: 2; 作者贾艳艳李琦 +5 位作者王晓利牛俊辉毛静廖成水张昊恺张明亮《河南农业科学》北大核心 2021年第3期142-147,共6页; 为确定引起水貂肺炎的病原菌,对从临床死亡病例中分离到的1株疑似肺炎克雷伯菌进行鉴定,采用琼脂糖凝胶电泳法检测肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,并探究了温度、pH值、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,通过病料涂片镜检及... 展开更多; 关键词水貂肺炎克雷伯菌分离鉴定胞外分泌蛋白核酸酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶培养条件优化: 3; 作者朱瑜郭森林 +5 位作者高婷王辂李端华李进军葛燕赵晨《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期52-58,共7页; 为实现小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶(non-specific nuclease from Yersinia enterocolitica subsp.palearctica,Nucyep)的高水平分泌表达,研究从pET24a-nucyep中得到nucyep基因片段,插入穿梭质粒pBE-S得到重组载体pBE-S-nucyep,将... 展开更多; 关键词小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶分泌表达枯草芽孢杆菌培养优化活性测定; 在线阅读下载PDF 职称材料

灵杆菌胞外核酸酶在短短芽孢杆菌中的高效表达: 4; 作者龚雪梅胡艳红 +2 位作者陈银霜程睿婕张坤晓《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期34-42,共9页; 利用短短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)原核表达系统对灵杆菌胞外核酸酶(Serratia marcescens non-specific nuclease,SMNE)进行重组表达,以期获得高产量重组SMNE。利用大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体构建SMNE重组质粒,实现其在B. c... 展开更多; 关键词分泌表达短短芽孢杆菌灵杆菌胞外核酸酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽多杀性巴氏杆菌C48-1株胞外分泌蛋白的DNase活性分析被引量：3: 5; 作者陈耀华董何凡 +8 位作者李琦牛俊辉钱满王晓利全映颖刘桂坤雷显前程相朝廖成水《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期984-989,共6页; 为探究多杀性巴氏杆菌(Pm)胞外分泌蛋白的DNase活性及对该蛋白DNase活性影响的因素,本研究经琼脂培养法以λDNA为底物鉴定禽Pm C48-1株胞外蛋白的DNase活性,将Pm培养5 h后采用低温透析法收集禽Pm C48-1株的胞外分泌蛋白,并采用BCA试剂... 展开更多; 关键词多杀性巴氏杆菌 C48-1株分泌蛋白 DNASE 胞外核酸酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪链球菌2型分泌核酸酶(SsnA)的表达、ELISA方法建立及其在鉴别诊断中的应用被引量：2: 1; 作者朱剑康超张安定金梅林; 机构华中农业大学农业微生物学国家重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期228-235,共8页; 基金国家973计划(2010CB534000) 国家科技重大专项课题(2008ZX10004-013 +3 种基金 2009ZX10602-14) 湖北省自然科学基金(2009CDB171); 文摘猪链球菌2型（Streptococcussuis type 2,SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌,严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增SsnA基因片段,将该片段克隆到表达载体pET-28a（＋）中,在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达,获得大小为46 ku的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白质具有抗原反应活性。以纯化的融合蛋白作为包被抗原,建立了SsnA-ELISA鉴别诊断方法。对已知背景的人工感染及疫苗免疫血清和临床血清进行检测,比较感染血清和免疫血清的检测结果,结果发现两者差异显著（P〈0.05）,表明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的检测效果。利用该方法对采集自8个省份的1 446份血清进行检测,显示SS2的阳性率为0%~14.77%,平均阳性率为5.39%。本研究结果表明：猪链球菌2型SsnA可以作为一个良好的鉴别感染的分子诊断标识;对临床血清的检测结果表明感染及流行与气候环境存在明显的关系。; 关键词猪链球菌2型分泌核酸酶(ssna) 鉴别诊断 ELISA; Keywords Streptococcus suis serotype 2 secreted nuclease A（ssna） differential diagnosis ELISA; 分类号 S852.611 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名貂源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析被引量：1: 2; 作者贾艳艳李琦王晓利牛俊辉毛静廖成水张昊恺张明亮; 机构河南科技大学动物科技学院/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南科技大学医学院安阳工学院生物与食品工程学院; 出处《河南农业科学》北大核心 2021年第3期142-147,共6页; 基金 “十三五”国家重点研发计划项目(2018YFD0502201)。; 文摘为确定引起水貂肺炎的病原菌,对从临床死亡病例中分离到的1株疑似肺炎克雷伯菌进行鉴定,采用琼脂糖凝胶电泳法检测肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,并探究了温度、pH值、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,通过病料涂片镜检及PCR鉴定,分离株为1株肺炎克雷伯菌,该肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白表现出降解λDNA的核酸酶活性,最适温度为30~37℃,最适pH值为7.0,在高温和碱性条件的反应环境时核酸酶的活性较弱。一价金属离子(Na^(+)、K^(+))和部分二价金属离子(Ca^(2+)、Ba^(2+)、Ni^(2+)、Zn^(2+)和Cu^(2+))对肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性无明显影响,而5.00~10.00 mmol/L的Co^(2+)和Fe^(3+)以及10.00 mmol/L的Mg^(2+)和Mn^(2+)可以促进胞外核酸酶切割λDNA的活性。综上,从临床水貂肺炎病例中分离到1株肺炎克雷伯菌,并证实该菌胞外分泌蛋白具有核酸酶活性。; 关键词水貂肺炎克雷伯菌分离鉴定胞外分泌蛋白核酸酶; Keywords Mink Klebsiella pneumoniae Isolation and identification Extracellular secretory protein Nuclease; 分类号 S858.92 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶培养条件优化: 3; 作者朱瑜郭森林高婷王辂李端华李进军葛燕赵晨; 机构成都大学药学院; 出处《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期52-58,共7页; 基金四川省科技厅国际合作项目(编号:2020YFH0013 2021YFH0016)。; 文摘为实现小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶(non-specific nuclease from Yersinia enterocolitica subsp.palearctica,Nucyep)的高水平分泌表达,研究从pET24a-nucyep中得到nucyep基因片段,插入穿梭质粒pBE-S得到重组载体pBE-S-nucyep,将其线性化后与枯草芽孢杆菌信号肽混合物连接并转化大肠杆菌感受态细胞,经测序验证共获得43个含正确信号肽序列的克隆。将以上重组载体分别转化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)RIK1285,通过比光密度法筛选得到Nucyep分泌水平最高的工程菌株B.subtilis RIK1285/pBE-S-nucyep-YoaW。对其进行培养条件优化,结果表明,采用工程菌B.subtilis RIK1285/pBE-S-nucyep-YoaW在培养基3×LB中以体积分数5%接种量接种,培养温度30℃,摇床220 r/min振荡培养48 h时,发酵上清液中重组Nucyep酶活达到(8.27±0.41) U/μL,较优化前提高了约20倍。结果表明,通过对信号肽的筛选及培养条件的优化,重组Nucyep在B.subtilis中可获得高效分泌表达,为其进一步研究及应用奠定基础。; 关键词小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶分泌表达枯草芽孢杆菌培养优化活性测定; Keywords Nucyep extracellular expression Bacillus subtilis optimization of cultivation conditions activity assay; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] R378 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名灵杆菌胞外核酸酶在短短芽孢杆菌中的高效表达: 4; 作者龚雪梅胡艳红陈银霜程睿婕张坤晓; 机构江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏海洋大学江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室江苏海洋大学江苏省海洋生物产业技术协同创新中心; 出处《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期34-42,共9页; 基金国家自然科学基金青年基金项目(31601191) 江苏省高校自然科学研究面上项目(16KJB180002) 江苏省优势学科建设工程项目; 文摘利用短短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)原核表达系统对灵杆菌胞外核酸酶(Serratia marcescens non-specific nuclease,SMNE)进行重组表达,以期获得高产量重组SMNE。利用大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体构建SMNE重组质粒,实现其在B. choshinensis HD31-SP3菌株中的表达。通过粗酶活检测验证其活性后,首先对温度、甘油和发酵时长等发酵条件进行优化,随后将获得的重组SMNE经亲和层析、凝胶阻滞层析分离纯化后进行酶活性质表征检测。经B. choshinensis HD31-SP3菌株重组表达的SMNE,初测胞外酶活为4.07×106U/L。经发酵条件的优化测试,最终在培养基中加入终体积分数5%甘油,于30℃下摇瓶培养56 h,获得的发酵上清胞外酶活可达2.6×107U/L,是未优化条件的6倍;经蛋白质纯化条件筛选,最终经一步亲和纯化后SMNE回收产量即达30~40 mg/dL,比活力为1.3×107U/mg,为商业化对照的2~3倍。通过对该酶的酶学性质鉴定后发现:该酶最适反应条件为37~45℃,pH 8~9;在不存在Mg2+/Mn2+的情况下仍保持47%的活性,且在300 mmol/L Na+/K+条件下可保持35%~45%的活性。; 关键词分泌表达短短芽孢杆菌灵杆菌胞外核酸酶; Keywords secretory expression Brevibacillus choshinensis SMNE; 分类号 Q814.4 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽多杀性巴氏杆菌C48-1株胞外分泌蛋白的DNase活性分析被引量：3: 5; 作者陈耀华董何凡李琦牛俊辉钱满王晓利全映颖刘桂坤雷显前程相朝廖成水; 机构河南科技大学动物科技学院洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期984-989,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31802159) 河南科技大学大学生研究训练计划(2020359) 河南科技大学青年骨干教师培养计划(13450009)。; 文摘为探究多杀性巴氏杆菌(Pm)胞外分泌蛋白的DNase活性及对该蛋白DNase活性影响的因素,本研究经琼脂培养法以λDNA为底物鉴定禽Pm C48-1株胞外蛋白的DNase活性,将Pm培养5 h后采用低温透析法收集禽Pm C48-1株的胞外分泌蛋白,并采用BCA试剂盒测定其浓度,进一步利用Kunitz法检测Pm胞外分泌蛋白的DNase活性。结果显示,禽Pm分泌的胞外蛋白能够降解λDNA,即其有DNase活性,且获得的胞外分泌蛋白的浓度为1.32μg/mL,其降解λDNA的活性水平为6.07×10^(6) Kunitz Unit/mg。利用琼脂糖凝胶电泳法检测胞外分泌蛋白降解不同底物DNA的能力以及酸碱、温度和不同浓度金属阳离子对胞外分泌蛋白降解λDNA活性的影响。结果显示,Pm胞外分泌蛋白的DNase活性具有广谱性,可降解λDNA、细菌基因组DNA、质粒DNA和PCR扩增的DNA片段。DNase活性影响因素的检测结果显示,Pm胞外分泌蛋白降解λDNA的最适温度为30℃,在pH7.0~pH9.0时该蛋白的DNase活性较好,而在酸性和强碱性时该蛋白则无DNase活性。不同浓度的Na^(+)、K^(+)和Ba^(2+)对胞外分泌蛋白的DNase活性均无明显影响;不同浓度的Ca^(2+)、Mg^(2+)和Mn^(2+)可提高胞外分泌蛋白的DNase活性;1 mmol/L和5 mmol/L的Co^(2+)以及0.01 mmol/L和0.1 mmol/L的Cu^(2+)则可抑制该蛋白的DNase活性,而1 mmol/L和5 mmol/L的Cu^(2+)则对该蛋白的DNase活性无明显影响。本研究首次证实了禽Pm C48-1株胞外分泌蛋白的DNase活性,且该活性具有广谱性,并明确了影响该活性的因素,为进一步探究胞外DNase在Pm感染及与宿主互作中的作用提供参考。; 关键词多杀性巴氏杆菌 C48-1株分泌蛋白 DNASE 胞外核酸酶; Keywords Pasteurella multocida C48-1 strain secreted proteins DNase extracellular nuclease; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猪链球菌2型分泌核酸酶(SsnA)的表达、ELISA方法建立及其在鉴别诊断中的应用	朱剑康超张安定金梅林	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	貂源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析	贾艳艳李琦王晓利牛俊辉毛静廖成水张昊恺张明亮	《河南农业科学》北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶培养条件优化	朱瑜郭森林高婷王辂李端华李进军葛燕赵晨	《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	灵杆菌胞外核酸酶在短短芽孢杆菌中的高效表达	龚雪梅胡艳红陈银霜程睿婕张坤晓	《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	禽多杀性巴氏杆菌C48-1株胞外分泌蛋白的DNase活性分析	陈耀华董何凡李琦牛俊辉钱满王晓利全映颖刘桂坤雷显前程相朝廖成水	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料