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猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备 被引量：1
1
作者 付明智 李新新 +1 位作者 刘雪威 李焕荣 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2556-2565,共10页
【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重... 【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,采用SDS-PAGE分析重组蛋白的诱导表达情况;重组菌经超声破碎以镍柱对重组蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合制备杂交瘤细胞,采用间接ELISA筛选和鉴定所制备单克隆抗体和亚类,利用Western blotting及间接免疫荧光(IFA)方法鉴定单克隆抗体的特异性。【结果】试验成功构建了pGEX-6P-1-SLPI、pET-28a-SLPI重组质粒,获得纯度较高的His-SLPI、GST-SLPI重组蛋白,分子质量分别为27和50 ku,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达;获得3株可稳定分泌抗猪SLPI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,9D10为IgG3亚类,9G11、10E2为IgG2b亚类;3株单克隆抗体均可与猪肠上皮细胞内的SLPI结合,9D10在细胞核中显示较强的荧光信号,而9G11、10E2在细胞浆和细胞核中均有荧光信号。【结论】本研究成功制备了重组His-SLPI和GST-SLPI蛋白,获得3株稳定分泌抗猪源SLPI单克隆抗体,特异性良好,为进一步研究猪源SLPI特性及其在黏膜免疫中的作用搭建技术平台。 展开更多
关键词 猪 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI) 原核表达 单克隆抗体
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分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在结肠癌中的表达及其临床意义 被引量：2
2
作者 郭久冰 李国新 +4 位作者 庄建民 纪程宏 刘峰 陶国全 董汉章 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期898-901,共4页
目的探讨结肠癌组织中白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）的表达及其临床意义。方法选择150例结肠癌及癌旁正常组织制成微阵列芯片作为研究对象，用免疫组织化学方法检测组织芯片中SLPI蛋白表达并评分，采用f检验比较不同SLPI表达水平和结肠... 目的探讨结肠癌组织中白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）的表达及其临床意义。方法选择150例结肠癌及癌旁正常组织制成微阵列芯片作为研究对象，用免疫组织化学方法检测组织芯片中SLPI蛋白表达并评分，采用f检验比较不同SLPI表达水平和结肠癌临床病理f生特征，包括年龄、性别、组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移之间的关系。结果SLPI在结肠癌组织中相对于正常结肠组织高表达，SLPI蛋白高表达与肿瘤分化[低分化：8（42．1％）”s11（57．9％）；中腐分化：3（2．3％）w128（97．7％）、TNM分期：[Ⅲ～Ⅳ：25（29．4％）口s60（70．6％）]、Ⅰ～Ⅱ：2（3．1％）郴63（96．9％）、淋巴结转移[18（28．6％）w45（71．4％）]及远处转移[11（84．6％）傩2（15．4％）]相关（P〈O．05），而与患者的性别和年龄差异无统计学意义（P〉0．05）。结论SLPI表：g_Jk平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关，有可能作为判断结肠癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子 组织芯片 结肠肿瘤 免疫组织化学
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抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2
3
作者 陈玉珍 何韶衡 +3 位作者 周艳春 黄阗 刘岳宁 陈霖霏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期54-57,共4页
目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激... 目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得4株可稳定分泌抗hSLPI mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。Western blot分析表明,此株mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为12000。免疫组化染色表明,mAb与肺和结肠组织的上皮细胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,4株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞中的SLPI均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质内。结论成功地制备抗hSLPI mAb,为变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。 展开更多
关键词 人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 单克隆抗体 特性鉴定
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分泌性白细胞蛋白酶抑制因子在肿瘤中的作用 被引量：4
4
作者 袁芳 孔庆宏 王冠林 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期278-284,共7页
分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)是一个可抑制多种丝氨酸蛋白酶活性的阳离子蛋白质。SLPI羧基端具有抑制糜蛋白酶、胰弹性蛋白酶等抗蛋白酶活性,氨基端的功能尚不清楚,可能具有抗菌、抗真菌... 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)是一个可抑制多种丝氨酸蛋白酶活性的阳离子蛋白质。SLPI羧基端具有抑制糜蛋白酶、胰弹性蛋白酶等抗蛋白酶活性,氨基端的功能尚不清楚,可能具有抗菌、抗真菌、抗病毒、抗炎和免疫调节等活性。近年来研究发现,SLPI在有些癌症,如卵巢癌、肺癌、胃癌、结肠癌中表达升高,但在有些癌症如乳腺癌、前列腺癌、口腔癌中表达降低。目前,尚未完全了解SLPI在调控致癌效应中的作用。本文就SLPI在肿瘤及抗肿瘤中的可能作用及其机制进行综述,为SLPI在抗肿瘤中的应用提供新思路。 展开更多
关键词 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI) 肿瘤 增殖 迁移 启动子
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慢性阻塞性肺疾病患者气道内分泌性白细胞蛋白酶抑制物表达水平及与肺功能的相关性 被引量：10
5
作者 黄金华 邓国升 +1 位作者 张婷婷 秦茵茵 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第15期1953-1957,共5页
目的探索慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者稳定期与急性加重期气道内SLPI表达水平差异,明确COPD患者肺功能与气道内SLPI表达水平相关性。方法纳入40例COPD患者及40例健康成人为研究对象,检测健康成人痰液中的SLPI浓度及COPD患者稳定期和急性... 目的探索慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者稳定期与急性加重期气道内SLPI表达水平差异,明确COPD患者肺功能与气道内SLPI表达水平相关性。方法纳入40例COPD患者及40例健康成人为研究对象,检测健康成人痰液中的SLPI浓度及COPD患者稳定期和急性加重期痰液中的SLPI浓度和肺功能(FEV1%pred,FEV1/FVC),比较COPD患者气道内SLPI水平与健康成人差异及稳定期与急性加重期差异,并分析SLPI表达水平与肺功能相关性。结果稳定期COPD患者与健康志愿者气道内SLPI表达水平差异无统计学意义[(46.74±2.30)μg/L vs.(47.60±2.50)μg/L,t=1.321,P=0.190]。COPD患者急性加重期较稳定期气道内SLPI水平明显降低[(38.148±3.59)μg/L vs.(46.74±2.30)μg/L,t=35.707,P=0.01]。COPD患者稳定期气道内SLPI表达水平与FEV1/FVC没有明显相关性(r=0.215,P=0.183),但与FEV1呈正相关(r=0.466,P=0.002);COPD患者急性加重期气道内SLPI表达水平与FEV1/FVC没有明显相关性(r=0.088,P=0.589),但与FEV1%Pred呈正相关(r=0.369,P=0.019)。结论COPD患者急性加重期较稳定期气道内SLPI水平明显降低,气道内SLPI表水平与FEV1%Pred呈正相关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 气道 分泌性白细胞蛋白酶抑制物 肺功能 相关性
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川芎嗪联合ICS／LABA对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织炎症的影响 被引量：5
6
作者 金明哲 熊瑛 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第16期2621-2623,共3页
目的:探讨川芎嗪联合ICS/LABA对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织炎症的干预作用。方法:50只Wistar大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、川芎嗪组(C组)、舒利迭组(D组)、川芎嗪联合舒利迭组(E组)。采用烟熏加气管内注射脂多糖(LPS)... 目的:探讨川芎嗪联合ICS/LABA对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织炎症的干预作用。方法:50只Wistar大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、川芎嗪组(C组)、舒利迭组(D组)、川芎嗪联合舒利迭组(E组)。采用烟熏加气管内注射脂多糖(LPS)法复制COPD模型,川芎嗪腹腔注射及舒利迭滴鼻干预。观察大鼠肺功能及肺组织病理改变;流式细胞术测定血中CD4、CD8值;ELISA法测定BALF中TGF-βl的表达;免疫组化法检测肺组织中MMP-9、SLPI的表达。结果:B组大鼠肺泡壁破坏、肺大疱形成,间质内大量炎性细胞浸润,干预组均有减轻;B组大鼠MMP-9、TGF-β1的表达比A组大鼠显著升高(均P<0.05),而CD4/CD8、SLPI的表达和FEV0.3/FVC与A组大鼠相比,明显降低(均P<0.05);与B组相比,经川芎嗪和舒利迭干预后,各干预组大鼠MMP-9、TGF-β1的表达明显降低(均P<0.05),CD4/CD8、SLPI的表达和FEV0.3/FVC则显著升高(均P<0.05);C、D、E组比较,E组差异明显(P<0.05)。结论:川芎嗪、LCS/LABA均可抑制COPD大鼠肺组织炎症;联合应用可能具有协同作用,该作用可能与降低TGF-β1及MMP-9的表达、提高SLPI水平及增强免疫有关。 展开更多
关键词 肺疾病 慢性阻塞性 转化生长因子β1 金属基质蛋白酶-9 分泌性白细胞蛋白酶抑 制物
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沙美特罗替卡松粉吸入剂对大鼠慢性阻塞性肺疾病气道重塑的影响 被引量：15
7
作者 金明哲 熊瑛 《医药导报》 CAS 北大核心 2014年第3期318-322,共5页
目的探讨不同剂量沙美特罗替卡松粉吸入剂(ICS/LABA)对大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑的干预作用。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、低剂量ICS/LABA组(C组)、高剂量ICS/LABA组(D组)。采用烟熏加气管内注射... 目的探讨不同剂量沙美特罗替卡松粉吸入剂(ICS/LABA)对大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑的干预作用。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、低剂量ICS/LABA组(C组)、高剂量ICS/LABA组(D组)。采用烟熏加气管内注射脂多糖(LPS)法复制COPD模型,C、D组吸入中、高剂量ICS/LABA。观察肺功能和病理变化,肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数和百分比,图像分析测量小气道平滑肌和管壁厚度,酶联免疫吸附(ELISA)法测定BALF中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达,免疫组化法测定肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肺组织中MMP-9mRNA的表达。结果 B组肺间质大量炎性细胞浸润,肺泡壁破坏,肺大疱形成,气管管壁和平滑肌增厚,C、D组有所减轻;B组TGF-β1、MMP-9水平与A组大鼠相比明显升高,SLPI则显著降低(P<0.05);干预后C、D组TGF-β1、MMP-9水平与B组相比明显降低,而SLPI则明显升高(P<0.05);D组TGF-β1、MMP-9阳性系数和mRNA相对含量[(82.06±4.43)(2.41±0.22)(6.156±8.86)]显著低于C组[(118.59±5.28)(3.09±0.28)(9.616±10.56)](P<0.05),而SLPI(2.95±0.28)明显高于C组(2.11±0.26)(P<0.05)。结论 ICS/LABA对COPD大鼠肺泡破坏及气道重塑有抑制作用,且高剂量优于低剂量,其机制可能与降低TGF-β1和MMP-9的表达及提高SLPI的水平有关。 展开更多
关键词 沙美特罗替卡松粉吸入剂 肺疾病 阻塞性 慢性 转化生长因子Β1 金属基质蛋白酶9 分泌性白细胞蛋白酶抑制物
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猪源SLPI对小鼠皮肤损伤愈合的效果
8
作者 肖瑞龙 郭津彤 +2 位作者 李新新 刘雪威 李焕荣 《北京农学院学报》 2024年第1期47-51,共5页
【目的】探究猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(Secretory Leukocyte Protease Inhibitor, SLPI)对皮肤创伤愈合过程中的治疗效果,以开发其潜在的使用价值。【方法】使用重组表达的猪源SLPI处理小鼠创伤,筛选蛋白的最佳作用浓度,再以此... 【目的】探究猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(Secretory Leukocyte Protease Inhibitor, SLPI)对皮肤创伤愈合过程中的治疗效果,以开发其潜在的使用价值。【方法】使用重组表达的猪源SLPI处理小鼠创伤,筛选蛋白的最佳作用浓度,再以此浓度探索其抗损伤愈合情况。设置创伤组、SLPI处理组及阳性药对照组(阳性药物为百灵金方抑菌液),观察不同时间大体病理变化与显微病理变化,对创伤愈合进行临床评分,来评判SLPI对伤口恢复的影响作用。【结果】结果显示,SLPI最佳作用浓度为0.25 mg/mL。三组小鼠创伤溃疡面随时间延长均逐渐减小;与创伤组相比,从第3天开始,SLPI处理组病理打分均低于创伤组(P<0.05或P<0.01),而与阳性药组表现接近(P<0.05);在第7天,阳性药组和SLPI组均可观察到毛囊生长,但创伤组变化不明显。显微病理变化显示,SLPI组和阳性药组在第5天可观察到表皮层和皮脂腺,在第7天成纤维细胞数量明显较多,炎性细胞浸润减少。【结论】重组表达的猪源SLPI对小鼠皮肤创伤愈合有一定效果,为开发针对猪体皮肤损伤有效药物提供了试验数据。 展开更多
关键词 猪源 分泌性白细胞蛋白酶 抑制因子 皮肤创面愈合 小鼠
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