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分泌型PD-1抗体可提高c-Met CAR-T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用
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作者 闵静婷 彭上 +5 位作者 杜娜娜 安然 甄翔程 曹佳威 周陈航 李正红 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1976-1984,共9页
目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、... 目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、生存期及免疫浸润。免疫组化检测胰腺癌临床样本c-Met和PD-L1表达,流式细胞术验证胰腺癌细胞Aspc-1 c-Met和PD-L1表达通过基因编辑将PD-1分泌型抗体和HIS标签连接至2代c-Met CAR分子后,构建PD-1/c-Met CAR质粒并包被慢病毒,慢病毒感染至活化T细胞内,通过流式细胞技术检测CAR-T阳性率和细胞亚群;Western blotting检测分泌型PD-1抗体在细胞上清液中的存在;体外功能试验中,通过LDH释放实验检测CAR-T对靶细胞的杀伤效率,CCK-8检测靶细胞存在下PD-1抗体对CAR-T增殖的促进作用。ELISA检测PD-1/c-Met CAR-T和c-Met CAR-T活化后细胞因子的分泌量。结果生信分析结果显示,胰腺癌组织c-Met表达高于正常组织(P<0.01);c-Met表达水平与胰腺癌患者生存期呈负相关(P<0.01)。c-Met的表达可能与多种免疫细胞浸润成正相关。免疫组化结果显示,胰腺癌c-Met和PD-L1表达均高于癌旁组织(P<0.01);流式细胞术结果显示,Aspc-1细胞c-Met和PD-L1表达量为90.7%和57.7%,琼脂糖凝胶电泳显示成功制备四代PD-1/c-Met CAR分子;流式细胞术和Western blotting显示,成功构建PD-1/c-Met CAR-T且PD-1抗体可顺利分泌。体外功能验证中LDH结果显示,PD-1/c-Met CART对肿瘤细胞杀伤效率在效靶比为20:1时高于c-Met CAR-T(P<0.01);CCK-8实验结果显示,靶细胞刺激72 h后增殖效率高于c-Met CAR-T(P<0.01);ELISA结果显示,PD-1/c-Met CAR-T分泌的细胞因子IL-2和TNF-α高于c-Met CAR-T(P<0.01)。结论PD-1抗体分泌型c-Met CAR-T可成功构建,并在体外胰腺癌细胞上显示出优于c-Met CAR-T肿瘤杀伤效率和增殖效率。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体T细胞 C-MET PD-1分泌型抗体 胰腺癌
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应用毕赤酵母分泌表达筛选人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc 被引量:5
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作者 王丁丁 许天敏 +5 位作者 余丽江 苏曼曼 黄树林 宿晓云 陈磊 颜炜群 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期963-967,共5页
目的:利用毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体分泌表达文库获得具特异性狂犬病毒抗原结合活性的分泌型小分子抗体(scFv-Fc)。方法:RT-PCR方法扩增获得一组轻链和重链可变区基因。利用重叠延伸PCR方法组装scFv基因后克隆入毕赤酵母scFv-Fc抗体库... 目的:利用毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体分泌表达文库获得具特异性狂犬病毒抗原结合活性的分泌型小分子抗体(scFv-Fc)。方法:RT-PCR方法扩增获得一组轻链和重链可变区基因。利用重叠延伸PCR方法组装scFv基因后克隆入毕赤酵母scFv-Fc抗体库通用表达质粒pPICZα/Fc后,电转化X33酵母菌,甲醇诱导表达后进行ELISA筛选、基因序列分析及免疫印迹分析。结果:构建了抗狂犬病毒毕赤酵母分泌型scFv-Fc库,获得了12株阳性菌株。对其中2株阳性克隆进行了序列分析证实为新的抗体可变区基因。ELISA、Western blotting分析,证实该scFv-Fc具有特异性狂犬病毒抗原结合活性,相对分子质量为56 000。结论:通过毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc分泌表达文库筛选获得具较高亲和力的新scFv-Fc抗体。 展开更多
关键词 分泌小分子抗体 毕赤酵母 狂犬病病毒 分泌表达 筛选
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体液免疫在鸡球虫感染中的作用 被引量:4
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作者 刘晶 胡京友 郑世民 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期21-23,共3页
球虫感染后可诱发宿主产生保护性免疫反应 ,其中体液免疫在抗球虫免疫中发挥着不可忽视的作用。球虫感染鸡后可很快检测到循环抗体。初次感染IgM出现最快 ,2次感染可产生高水平的IgG ,且持续时间也较长 ,提示IgG在球虫 2次感染中起着主... 球虫感染后可诱发宿主产生保护性免疫反应 ,其中体液免疫在抗球虫免疫中发挥着不可忽视的作用。球虫感染鸡后可很快检测到循环抗体。初次感染IgM出现最快 ,2次感染可产生高水平的IgG ,且持续时间也较长 ,提示IgG在球虫 2次感染中起着主导作用。黏膜免疫是体液免疫的重要组成部分 ,即产生分泌型IgA。研究发现高浓度IgA与小肠中子孢子复活率降低相关。母源抗体可抑制球虫感染雏鸡 ,雏鸡体内母源抗体水平与其抗球虫感染的变化具有高度一致性。作者对体液循环抗体、分泌型抗体以及母源抗体在球虫保护性免疫中的作用进行全面系统的综述 。 展开更多
关键词 体液免疫 球虫感染 循环抗体 分泌型抗体
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多聚免疫球蛋白受体功能及其表达调节机制 被引量:5
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作者 绳秀珍 汤茜 +2 位作者 唐小千 邢婧 战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第A02期1-8,共8页
黏膜免疫是机体免疫系统的重要组成部分,鱼类的皮肤、鳃、肠等黏膜免疫相关组织及黏液是机体免疫保护的第一道防线。分泌型抗体(SIgs)是黏膜免疫的主要组成成分,经多聚免疫球蛋白受体(pIgR)介导的转胞吞作用穿过上皮细胞转运至黏膜表面... 黏膜免疫是机体免疫系统的重要组成部分,鱼类的皮肤、鳃、肠等黏膜免疫相关组织及黏液是机体免疫保护的第一道防线。分泌型抗体(SIgs)是黏膜免疫的主要组成成分,经多聚免疫球蛋白受体(pIgR)介导的转胞吞作用穿过上皮细胞转运至黏膜表面发挥免疫防御功能。目前,对哺乳动物pIgR介导SIgs的转运过程,pIgR功能及调节因子,以及细胞因子、微生物、激素等调节pIgR表达的信号通路已研究得较透彻,而鱼类pIgR研究多集中于基因克隆、组织差异表达等,对pIgR表达调节方面的研究较少。本文综述了哺乳动物pIgR的功能、调节机制以及硬骨鱼类pIgR的相关研究进展,为探究鱼类pIgR表达的调节机制提供参考资料。 展开更多
关键词 哺乳动物 鱼类 多聚免疫球蛋白受体(PIgR) 功能 调节作用 分泌型抗体 黏膜免疫
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禽类共同黏膜免疫系统的研究进展 被引量:2
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作者 马金萍 杨树宝 +3 位作者 董红艳 李磊 马跃 栾维民 《中国家禽》 北大核心 2013年第9期47-49,共3页
随着黏膜免疫的发展,禽类共同黏膜免疫系统越来越受人们的关注。共同黏膜免疫反应的研究不仅为传统的免疫学补充新内容,也为预防疾病新型疫苗构建提供新思路,具有很大的理论和现实意义。本文就共同黏膜免疫的特征、淋巴细胞归巢、分泌型... 随着黏膜免疫的发展,禽类共同黏膜免疫系统越来越受人们的关注。共同黏膜免疫反应的研究不仅为传统的免疫学补充新内容,也为预防疾病新型疫苗构建提供新思路,具有很大的理论和现实意义。本文就共同黏膜免疫的特征、淋巴细胞归巢、分泌型IgA功能等方面的内容作一简述。 展开更多
关键词 共同黏膜免疫系统 淋巴细胞归巢 分泌IgA抗体
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