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共表达IκBα-IRES2-CD40L胞外区双基因的腺病毒载体构建及鉴定 被引量:1
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作者 丁小明 牛晓丽 +1 位作者 薛武军 李杨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期416-419,共4页
目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩... 目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩增,测序正确后,再将连接成功地两个目的基因片段与分别与载体pshuttle-CMV连接获得穿梭质pshuttle-CMV-shCD40L和pshuttle-cmv-IκB-IRES2,将穿梭质粒在DH5α感受态细胞中扩增。再与AdEasy-1-BJ5183菌同源重组,得到含有两个目的基因的腺病毒骨架,脂质体法转染293细胞,包装成具有感染能力的共表达IκB-IRES2-shCD40L腺病毒颗粒。PCR法对腺病毒的上清液中的表达差异进行鉴定,检测病毒滴度,并用其感染细胞PK15和293细胞以检验其安全性。结果:所构建的IκB-IRES2-shCD40L基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确,原代腺病毒的滴度达到6.561×1012pfu/L,PCR法从提取的病毒上清液中分别扩增出了是shCD40L(600bp)和IKBa(700bp)的特异性片段,感染了腺病毒后的PK15细胞形态未见明显异常,但293细胞出现了明显的气球样变。结论:成功构建了共表达IκBα-IRES2-shCD40L双基因的腺病毒载体。 展开更多
关键词 分泌型人cd40l胞外区 IΚBΑ 重组腺病毒 免疫耐受
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阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究 被引量:4
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作者 陈纯 黄绍良 +3 位作者 段连宁 李浩威 温冠媚 魏菁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期534-537,共4页
目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受... 目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受鼠 (BALB CH 2d)脾细胞作为刺激细胞 ,设单抗组 (加抗CD4 0L单抗 )和对照组 (不加单抗 ) ,初次混合淋巴细胞培养(MLR) 7天 ,在不同时间点采用3H TdR掺入法检测细胞增殖率 ,以ELISA法测定培养上清液中IFN γ、IL 2、IL 4、IL 10等的水平 ,第 5天采用流式细胞仪检测CD4 + T和CD8+ T细胞上CD2 5、CD6 9、CD4 0L和CD4 5RA的表达。再次MLR 5天 ,第 1、3、5天采用3H TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平。结果 :初次和再次MLR结果均显示 ,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组。初次MLR单抗组中CD4 + T和CD8+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ;单抗组中CD4 + CD2 5 + T、CD4 + CD6 9+ T、CD8+ CD2 5 + T、CD4 + CD4 0L+ T和CD8+ CD6 9+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而CD8+ CD4 0L+ T和CD4 + CD4 5RA +T细胞的比例与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL 4和IL 10几乎无法测出 。 展开更多
关键词 cd40-cd40l T细胞表 细胞因子 分泌作用 免疫耐受
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CD40L在M2型巨噬细胞类型转换中的作用 被引量:2
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作者 郭强 李康 +3 位作者 徐薇 关庆东 储以微 熊思东 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期330-335,共6页
目的检测不同CD40L表达水平的脾细胞对巨噬细胞表型和功能的影响,探讨通过调控CD40L的表达改变巨噬细胞的类型。方法贴壁分离正常BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞。将腹腔巨噬细胞或经IL-4刺激的腹腔巨噬细胞,分别与体外培养2d后获得的CD40Llo... 目的检测不同CD40L表达水平的脾细胞对巨噬细胞表型和功能的影响,探讨通过调控CD40L的表达改变巨噬细胞的类型。方法贴壁分离正常BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞。将腹腔巨噬细胞或经IL-4刺激的腹腔巨噬细胞,分别与体外培养2d后获得的CD40Llow脾细胞和Ionomycin与PMA诱导的CD40Lhigh脾细胞共孵育,24h后检测M1和M2型巨噬细胞相关基因的表达,并以硝酸还原酶法检测NO分泌水平。结果与CD40Llow脾细胞共孵育的巨噬细胞CCL22、Fizz1和Ym1表达水平较高,但只分泌较低水平的NO,而与CD40Lhigh脾细胞共孵育的巨噬细胞表达较高水平的CCL3并分泌高水平的NO,而且CD40Lhigh脾细胞可使M2型巨噬细胞表型相关基因明显下调。结论CD40Lhigh脾细胞使巨噬细胞倾向于M1型极化,并且能使M2型巨噬细胞向M1型转换。 展开更多
关键词 巨噬细胞 M2巨噬细胞 cd40l 一氧化氮
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阿尔茨海默病与轻度认知障碍患者血浆sCD40及sCD40L浓度研究 被引量:5
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作者 李玲 钟笑梅 +9 位作者 施海姗 候乐 罗新妮 王艳华 胡国艳 陈辛茹 张蔚茹 陈贲 彭琪 宁玉萍 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期460-464,共5页
目的探索阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)及遗忘型轻度认知障碍(amenstic mild cognitive impairment,a MCI)患者血浆可溶性CD40(soluble CD40,s CD40)和可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,s CD40L)浓度变化特点及其临床意义... 目的探索阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)及遗忘型轻度认知障碍(amenstic mild cognitive impairment,a MCI)患者血浆可溶性CD40(soluble CD40,s CD40)和可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,s CD40L)浓度变化特点及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法检测20例AD患者、35例a MCI患者和32名正常对照者血浆s CD40和s CD40L浓度水平,简易精神状态检查表(mini-mental state examination,MMSE)评估患者认知功能。结果 AD组、a MCI组和对照组血浆s CD40浓度中位数(上下四分位数)分别为[123.3(97.4,149.5)pg/m L]、[102.9(63.6,124.0)pg/m L]和[70.66(51.0,90.8)pg/m L],3组间s CD40浓度差异均有统计学意义(P<0.05)。AD组、a MCI组和对照组血浆s CD40L浓度中位数(上下四分位数)分别为[537.0(316.0,1134.0)pg/m L]、[316.0(190.0,546.0)pg/m L]和[167.0(107.5,478.0)pg/m L],3组间s CD40L浓度差异均有统计学意义(P<0.05)。a MCI组血浆s CD40L浓度与MMSE得分呈负相关(r=-0.74,P<0.01)。结论 s CD40和s CD40L浓度水平在AD和a MCI患者血浆中异常增高,因此s CD40和s CD40L可作为AD的早期检测指标,并提示CD40-CD40L信号可能参与AD的发生发展。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 遗忘轻度认知障碍 可溶性cd40 可溶性cd40l
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人sCD40L基因的克隆及表达 被引量:1
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作者 程琳玲 聂红 +5 位作者 王利 尤强 路丽明 沈佰华 张冬青 李宁丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期125-127,共3页
目的  克隆人sCD40L基因片段,并在原核细胞中表达。方法用RT-PCR技术,从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中,扩增CD40L胞外区cDNA,并克隆至载体pGEM-T。测序验证后,转至载体PQE31中,并在大肠杆... 目的  克隆人sCD40L基因片段,并在原核细胞中表达。方法用RT-PCR技术,从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中,扩增CD40L胞外区cDNA,并克隆至载体pGEM-T。测序验证后,转至载体PQE31中,并在大肠杆菌M15中进行表达,最后通过亲和层析柱得到纯化蛋白。结果纯化所得的产物经Western blot证实,确为人sCD40L蛋白。结论 应用基因重组法构建了人sCD40L基因片段,并在原核细胞内成功地进行了表达,为今后进一步研究CD40L与凋亡、疾病的发病机制及临床治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 cd40l 胞外区 RT-PCR WESTERNBlOT 基因克隆 基因表达
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mB7AP-exCD40L融合蛋白的分子设计及其在Pichia pastoris中的表达和生物活性
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作者 陈晋 储以微 +5 位作者 邵先安 任学芳 张洪勇 高海峰 何球藻 熊思东 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期401-406,F003,共7页
目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。W... 目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。Westernblot鉴定融合蛋白的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)研究mB7AP-exCD40L对淋巴细胞增殖的影响。结果构建的重组Pichiapastoris实现了mB7AP-exCD40L的分泌表达,表达蛋白质的相对分子质量约2.6×103,对MLR具有抑制作用。结论分子模拟设计的mB7AP-exCD40L在Pichiapastoris表达体系成功表达,为进一步研究mB7AP-exCD40L在抗移植排斥反应中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 PASTORIS 融合蛋白 生物活性 分子设计 混合淋巴细胞反应 重组Pichia Western 抗移植排斥反应 酵母表达体系 分子模拟 淋巴细胞增殖 相对分子质量 cd40l B7反义肽 GS115 表达产物 blot 分泌表达 抑制作用 胞外区 电击法
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西洛他唑改善2型糖尿病小鼠肠黏膜屏障损伤的机制
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作者 宋平义 蒋世秋 +3 位作者 胡娟 檀佳璐 杨岚 王强 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期403-408,共6页
目的探究西洛他唑对糖尿病小鼠肠黏膜屏障的影响。方法从GEO数据库中下载GSE142153数据集,分析其差异基因变化。将8周龄的雄性db/db小鼠以及对照m/m小鼠随机分为m/m+溶剂组、m/m+西洛他唑组、db/db+溶剂组、db/db+西洛他唑组。各组小鼠... 目的探究西洛他唑对糖尿病小鼠肠黏膜屏障的影响。方法从GEO数据库中下载GSE142153数据集,分析其差异基因变化。将8周龄的雄性db/db小鼠以及对照m/m小鼠随机分为m/m+溶剂组、m/m+西洛他唑组、db/db+溶剂组、db/db+西洛他唑组。各组小鼠分别用西洛他唑和相应溶剂灌胃4周。干预结束后,检测血清sCD40L水平及肠道CD40表达,以小鼠肠道通透性、含水量、菌落数、紧密连接蛋白含量等指标评估小鼠肠黏膜屏障功能。结果糖尿病患者差异基因富集在血小板活化、内皮细胞屏障功能等通路中。db/db小鼠血清sCD40L水平明显升高,肠道组织CD40表达、通透性、含水量、菌落数明显上升,紧密连接蛋白表达下降。西洛他唑干预db/db小鼠后,血清sCD40L、肠道CD40水平明显下降,肠黏膜屏障功能明显改善。结论西洛他唑可以改善糖尿病小鼠肠黏膜屏障损伤,其保护作用可能与抑制血小板活化相关。 展开更多
关键词 西洛他唑 血小板 cd40/cd40l 2糖尿病 肠黏膜屏障
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