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猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达 被引量:5
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作者 包新奇 黄绍华 +5 位作者 刘巧荣 孙明 杨璐 申屠芬琴 康立平 陈西钊 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第3期12-16,共5页
目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy... 目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序。再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化。Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品。结果构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中。Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别。以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9%、81.8%和81.8%。结论本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高。 展开更多
关键词 PRV GB 分段表达 ELISA
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汉滩病毒S基因在Vero-E6细胞中的分段表达 被引量:1
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作者 潘蕾 白雪帆 +2 位作者 黄长形 李光玉 王九平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期88-91,共4页
目的 体外研究汉滩病毒 (HTNV)S基因及其 5’端、3’端表达的意义 ,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。方法 设计 2套引物 ,用PCR方法从PBV2 2 0 -S2 2原核质粒中扩增出S基因全读码框 (37- 132 6bp)及S基因 5’端 (37-5 0 1bp) ,S基... 目的 体外研究汉滩病毒 (HTNV)S基因及其 5’端、3’端表达的意义 ,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。方法 设计 2套引物 ,用PCR方法从PBV2 2 0 -S2 2原核质粒中扩增出S基因全读码框 (37- 132 6bp)及S基因 5’端 (37-5 0 1bp) ,S基因 3’端 (5 0 2 - 132 6bp)用TA克隆将其克隆入 pcDNA3 1/V5 -His -TOPO载体中 ,成功构建 pcDNA3 1-S及pcDNA3 1-S -N、pcDNA3 1-S -C真核表达载体 ,并通过脂质体转染至Vero -E6细胞中 ,进行了瞬时表达。 结果 间接免疫荧光成功检测到 pcDNA3 1-S及pcDNA3 1-S -N、pcDNA3 1-S -C在Vero -E6细胞中的表达。 结论 pcDNA3 1-S及 pcDNA3 1-S -N、pcDNA3 1-S -C真核表达载体有较高的转染效率 ,目的基因能在宿主细胞中表达 ,有利于研究HTNV -S基因在T细胞表位研究中的意义。 展开更多
关键词 汉滩病毒 S基因 VERO-E6细胞 分段表达 核蛋白
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水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达
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作者 刘红娜 王文玉 +5 位作者 张云 杨宇航 郝俊伟 时坤 李健明 杜锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期32-36,共5页
利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L... 利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L3 N3基因,构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后,将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体,并转化入表达宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3,SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44ku的目的条带,与预期相符。Western blotting进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别,具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达,为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒NS1基因 大肠杆菌 分段表达
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解析法提取分段线性混沌系统周期轨道的研究 被引量:1
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作者 卢元元 胡庆彬 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 北大核心 2007年第1期90-94,共5页
采用解析法研究提取分段线性混沌系统周期轨道.分段线性混沌系统的状态空间被数个切换面分割成若干个线性子区间.联合求解周期轨道在各子区间的解方程,可得该周期轨道在各切换面的坐标及在各子区间的运行时间,从而得到所提取周期轨道... 采用解析法研究提取分段线性混沌系统周期轨道.分段线性混沌系统的状态空间被数个切换面分割成若干个线性子区间.联合求解周期轨道在各子区间的解方程,可得该周期轨道在各切换面的坐标及在各子区间的运行时间,从而得到所提取周期轨道的分段解析表达式.与传统的数值提取法相比,所提出的解析法具有提取的周期轨道精确度高、周期轨道信息的存储量小、便于实时应用、易于进行稳定性分析和控制等优点.应用该解析方法分别求得三阶蔡氏电路和四阶蔡氏电路混沌吸引子中许多周期轨道,验证了该方法的可行性和实用性. 展开更多
关键词 分段线性混沌系统 周期轨道 解析法 分段解析表达 蔡氏电路
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2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析 被引量:4
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作者 胡巧云 袁小宁 +8 位作者 熊毅 何奇松 黄胜斌 孙翔翔 吴军 颜健华 冯淑萍 李军 郭建刚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1310-1314,共5页
【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离... 【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以Ssp A基因的重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】Ssp A基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大。在IPTG诱导下,含有重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C的菌株表达出3段融合蛋白,其中,Ssp N和Ssp C重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而Ssp M重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:Ssp N重组蛋白66 k D,Ssp M重组蛋白65 k D,Ssp C重组蛋白32 k D。Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以Ssp N重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球菌Ssp A基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的Ssp N蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 SspA基因 分段表达 免疫原性
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复合型风浪谱 被引量:1
6
作者 付昱华 《中国海上油气(工程)》 1992年第3期43-47,共5页
本文提出根据P—M谱和改进的理论风浪频谱复合而成的风浪谱。复合型风浪谱是分两段给出的,且满足下述条件:谱峰通过给定点;谱面积m_o与有效波高H满足关系式H=4(m_o)^(1/2);在分段处谱值及斜率均连续。
关键词 风浪谱 复合 分段表达
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三次曲线曲面的一种构造法
7
作者 陈大正 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS 1981年第1期-,共10页
本文给出构造三次曲线面的二种类型的方法.对于已给型值的情况,提出了一种含有“逼近因子”的B 样条型三次曲线,它把样条插值法和拟合法统一起来.对于已给型值及型值点导数的情况,提出一种含有“导数因子”的贝齐尔(Bezier)型三次曲线... 本文给出构造三次曲线面的二种类型的方法.对于已给型值的情况,提出了一种含有“逼近因子”的B 样条型三次曲线,它把样条插值法和拟合法统一起来.对于已给型值及型值点导数的情况,提出一种含有“导数因子”的贝齐尔(Bezier)型三次曲线及曲面,常用的一般三次插值曲线及曲面和齐尔三次曲线及曲面,就是这类曲线及曲面的特殊情形. 展开更多
关键词 三次曲线 乘积 三次曲面 样条插值 型值点 分段表达 贝齐尔 导数值 方程 构造法
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抗鸡源EphA2蛋白小鼠多克隆抗体的制备及其特性研究 被引量:1
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作者 姚晓慧 李拓凡 +4 位作者 谢泉 万志敏 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2020年第3期29-34,共6页
为深入探究鸡源EphA2生物学功能,试验首先对鸡源EphA2基因进行了原核分段克隆以及真核表达载体构建。重组原核表达载体分别命名为pGEX-6p-1-EphA2-A(1-534aa)和pGEX-6p-1-EphA2-B(585-972aa),真核表达载体命名为pcDNA3.1-EphA2。重组原... 为深入探究鸡源EphA2生物学功能,试验首先对鸡源EphA2基因进行了原核分段克隆以及真核表达载体构建。重组原核表达载体分别命名为pGEX-6p-1-EphA2-A(1-534aa)和pGEX-6p-1-EphA2-B(585-972aa),真核表达载体命名为pcDNA3.1-EphA2。重组原核表达载体转化BL21后经IPTG诱导以及SDS-PAGE分析发现,融合蛋白GST-EphA2-A和GST-EphA2-B均获得有效表达。以纯化的GST-EphA2-A和GST-EphA2-B蛋白免疫小鼠制备了抗鸡EphA2多克隆抗体。间接免疫荧光试验以及Western blot试验表明,所制备的抗鸡EphA2多克隆抗体不仅能识别转染pcDNA3.1-EphA2的DF-1及LMH细胞中表达的外源性EphA2,而且还能有效识别内源性鸡源EphA2蛋白。本研究中鸡EphA2的成功表达及其多克隆抗体研制为后续研究鸡EphA2的功能提供了分子生物学工具。 展开更多
关键词 鸡源EphA2 原核分段克隆表达 真核表达 多克隆抗体 反应性
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