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分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答
被引量：
1
1
作者
余敏
赵欣荣
+3 位作者
李大金
王秀丽
袁敏敏
姚晓英
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期513-517,共5页
目的:提高hCGβ在真核细胞中的表达效率,观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法:构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4hCGβC3d3、pCMV4hCGβ和pCMV4C3d3。分别用pCMV4DP...
目的:提高hCGβ在真核细胞中的表达效率,观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法:构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4hCGβC3d3、pCMV4hCGβ和pCMV4C3d3。分别用pCMV4DPPISShCGβC3d3、pCMV4DPPISShCGβ和pCMV4DPPISShCGβ联合pCMV4DPPISSC3d3免疫BALBc小鼠,各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500pmol,间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果:含有DPPISS的pCMV4hCGβC3d3较无DPPISS的pCMV4hCGβC3d3在COS7细胞中的表达效率明显提高。50pmol是BALBc小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALBc小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβC3d3免疫组IgG1IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论:分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。
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关键词
分子佐剂c3d
3
h
c
Gβ基因疫苗
体液免疫
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职称材料
hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达
被引量：
11
2
作者
王明雁
李磊
+2 位作者
李大金
孟毅
朱影
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第7期445-450,共6页
目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3 cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的...
目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3 cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。
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关键词
真核细胞
h
c
Gβ疫苗
c
OS-7细胞株
免疫避孕
分子佐剂c3d
免疫原性
聚合酶链反应
pBS-h
c
Gβ-
c
3
d
3
质粒
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职称材料
融合表达猪源C3d与猪流感病毒HA DNA疫苗的构建
被引量：
1
3
作者
连艳鲜
郑宝亮
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第6期91-95,共5页
为了构建融合表达分子佐剂猪补体C3d与猪流感病毒血凝素（HA）的真核表达载体,论文克隆了猪C3d全长基因与H3N2亚型猪流感病毒的HA基因,并构建了包含3拷贝的C3d和经过改造的HA（替换信号肽并去除跨膜区）的质粒pHA-C3d3。序列分析表明,...
为了构建融合表达分子佐剂猪补体C3d与猪流感病毒血凝素（HA）的真核表达载体,论文克隆了猪C3d全长基因与H3N2亚型猪流感病毒的HA基因,并构建了包含3拷贝的C3d和经过改造的HA（替换信号肽并去除跨膜区）的质粒pHA-C3d3。序列分析表明,获得的猪C3d与参考序列相比核苷酸同源性达到99.7%,氨基酸同源性达99.3%。受体结合功能区p28氨基酸序列与参考序列完全一致。猪补体C3d的氨基酸序列与鼠、牛、羊、人的同源性都在80%以上,而与鸡的同源性仅为62.5%。受体结合功能区p28氨基酸序列与鼠、牛、羊、人有4~7个氨基酸的不同,而与鸡有17个氨基酸的不同,表明哺乳动物C3d与禽类有明显的差别。质粒DNA pHA-C3d3转染293T细胞后,Western blot分析显示,在细胞裂解产物中检测到了与预期大小一致的特异性条带,说明融合蛋白得到了表达。为进一步探讨C3d分子佐剂及猪流感DNA疫苗的研究奠定了基础。
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关键词
猪流感病毒
d
NA疫苗
分子佐剂c3d
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职称材料
题名
分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答
被引量：
1
1
作者
余敏
赵欣荣
李大金
王秀丽
袁敏敏
姚晓英
机构
复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期513-517,共5页
基金
国家自然科学基金(30271235)
上海市自然科学基金(00ZB14058)
+1 种基金
教育部博士学科点专项科研基金(9941)
卫生部优秀青年人才专项科研基金(97031)资助项目
文摘
目的:提高hCGβ在真核细胞中的表达效率,观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法:构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4hCGβC3d3、pCMV4hCGβ和pCMV4C3d3。分别用pCMV4DPPISShCGβC3d3、pCMV4DPPISShCGβ和pCMV4DPPISShCGβ联合pCMV4DPPISSC3d3免疫BALBc小鼠,各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500pmol,间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果:含有DPPISS的pCMV4hCGβC3d3较无DPPISS的pCMV4hCGβC3d3在COS7细胞中的表达效率明显提高。50pmol是BALBc小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALBc小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβC3d3免疫组IgG1IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论:分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。
关键词
分子佐剂c3d
3
h
c
Gβ基因疫苗
体液免疫
Keywords
Mole
c
ular a
d
juvant
c
3
d
3
h
c
Gβ
d
NA va
c
c
ine
Antibo
d
y response
分类号
R392.3 [医药卫生—免疫学]
在线阅读
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职称材料
题名
hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达
被引量：
11
2
作者
王明雁
李磊
李大金
孟毅
朱影
机构
复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第7期445-450,共6页
基金
上海市自然科学基金项目(00ZB14058)资助
教育部博士学科点专项科研基金(9941)资助
卫生部优秀青年人才专项科研基金(97031)资助
文摘
目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3 cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。
关键词
真核细胞
h
c
Gβ疫苗
c
OS-7细胞株
免疫避孕
分子佐剂c3d
免疫原性
聚合酶链反应
pBS-h
c
Gβ-
c
3
d
3
质粒
Keywords
h
c
Gβ
c
3
d
3
c
OS-7
分类号
R169.41 [医药卫生—公共卫生与预防医学]
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
融合表达猪源C3d与猪流感病毒HA DNA疫苗的构建
被引量：
1
3
作者
连艳鲜
郑宝亮
机构
郑州牧业工程高等专科学校生物工程系
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第6期91-95,共5页
文摘
为了构建融合表达分子佐剂猪补体C3d与猪流感病毒血凝素（HA）的真核表达载体,论文克隆了猪C3d全长基因与H3N2亚型猪流感病毒的HA基因,并构建了包含3拷贝的C3d和经过改造的HA（替换信号肽并去除跨膜区）的质粒pHA-C3d3。序列分析表明,获得的猪C3d与参考序列相比核苷酸同源性达到99.7%,氨基酸同源性达99.3%。受体结合功能区p28氨基酸序列与参考序列完全一致。猪补体C3d的氨基酸序列与鼠、牛、羊、人的同源性都在80%以上,而与鸡的同源性仅为62.5%。受体结合功能区p28氨基酸序列与鼠、牛、羊、人有4~7个氨基酸的不同,而与鸡有17个氨基酸的不同,表明哺乳动物C3d与禽类有明显的差别。质粒DNA pHA-C3d3转染293T细胞后,Western blot分析显示,在细胞裂解产物中检测到了与预期大小一致的特异性条带,说明融合蛋白得到了表达。为进一步探讨C3d分子佐剂及猪流感DNA疫苗的研究奠定了基础。
关键词
猪流感病毒
d
NA疫苗
分子佐剂c3d
Keywords
Swine influenza virus
d
NA va
c
c
ine
mole
c
ular a
d
juvant
c
3
d
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答
余敏
赵欣荣
李大金
王秀丽
袁敏敏
姚晓英
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达
王明雁
李磊
李大金
孟毅
朱影
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002
11
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
融合表达猪源C3d与猪流感病毒HA DNA疫苗的构建
连艳鲜
郑宝亮
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
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