文摘目的:探讨癫痫大鼠海马氧化应激反应和分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)活性的变化,以及抗氧化剂抗坏血酸(ascorbic acid,AA)神经保护作用的可能机制。方法:实验大鼠分为空白对照组、癫痫24 h组、AA预处理癫痫组和AA对照组。应用RT-PCR和免疫印迹法检测海马组织2a型溶酶体相关膜蛋白(lysosome-associated membrane protein type 2a,LAMP2a)mRNA和蛋白的变化,采用化学法检测海马组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平。结果:癫痫组大鼠海马组织LAMP2a转录和合成明显高于空白对照组,MDA含量明显升高,而SOD的水平显著下降。AA预处理可显著减低癫痫大鼠海马LAMP2a的转录和合成,并明显降低MDA的含量,却显著提高SOD的水平。结论:癫痫发作导致的海马损伤时存在CMA激活现象和显著的氧化应激反应;抗氧化剂AA通过抑制CMA活性和降低氧化应激反应来减轻癫痫发作中的海马损伤,具有神经保护作用。
文摘目的·探讨在泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)受损的帕金森病(Parkinson's disease,PD)细胞模型中分子伴侣介导自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)对α-突触核蛋白低聚体水平的影响。方法·培养稳转野生型α-突触核蛋白的人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系,加入蛋白酶体抑制剂lactacystin构建PD细胞模型。通过Western blotting检测α-突触核蛋白低聚体、溶酶体相关膜蛋白2A型(lysosome-associated membrane protein type 2A,LAMP2A)和相对分子质量为70 000的热休克同源蛋白(heat-shock cognate protein of 70 kDa,HSC70)水平;使用LAMP2A siRNA抑制CMA功能,检测对α-突触核蛋白低聚体水平及细胞存活率的影响;通过免疫共沉淀观察LAMP2A与α-突触核蛋白低聚体的相互作用。结果·PD细胞模型中α-突触核蛋白低聚体表达水平升高,与CMA功能密切相关的蛋白LAMP2A和HSC70水平应激性增加;抑制LAMP2A表达,α-突触核蛋白低聚体水平进一步升高,细胞存活率降低,且通过免疫共沉淀检测到LAMP2A与α-突触核蛋白低聚体存在相互作用。结论·PD细胞模型中,CMA是调节α-突触核蛋白低聚体水平的途径之一,抑制其功能可进一步增加α-突触核蛋白低聚体水平及细胞毒性作用。
