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低温处理凡纳滨对虾仔虾全长cDNA文库及troponin I基因三种拷贝的比较分析 被引量:3
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作者 彭金霞 房振峰 +6 位作者 韦嫔媛 李咏梅 蒋伟明 陈秀荔 赵永贞 李文红 陈晓汉 《水产科学》 CAS 北大核心 2013年第2期73-79,共7页
运用SMART技术成功构建了低温处理凡纳滨对虾仔虾的全长cDNA文库,文库的滴度为1.05×106pfu/mL,重组率94%,插入片段平均长度为1.0kb。随机选取116个克隆进行测序鉴定,获得111条有效序列,其unigene比例79.2%,涵盖了蛋白质合成、细胞... 运用SMART技术成功构建了低温处理凡纳滨对虾仔虾的全长cDNA文库,文库的滴度为1.05×106pfu/mL,重组率94%,插入片段平均长度为1.0kb。随机选取116个克隆进行测序鉴定,获得111条有效序列,其unigene比例79.2%,涵盖了蛋白质合成、细胞骨架、核糖体结构、信号传导、代谢、细胞周期、能量产生与转换、转录、抗逆及防御、生物发育等10多种功能类别,其中与发育(10.34%)及抗逆及防御(10.34%)相关基因占20.68%。对测序获得的肌肉发育相关trioponinⅠ基因的3个不同拷贝进行了序列和进化比较分析。研究为发育和耐寒相关分子调控机制的探索创造了基础条件。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾cdna文库 耐寒 发育
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凡纳滨对虾肌肉组织cDNA全长文库的构建 被引量:2
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作者 熊建华 高永华 +2 位作者 马宁 盛小伟 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 2011年第1期86-89,共4页
【目的】为了在短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息,为深入了解功能基因在凡纳滨对虾肌肉组织中的表达提供分子生物学依据。【方法】通过构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,并进行EST测序分析。【结果】文库质量... 【目的】为了在短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息,为深入了解功能基因在凡纳滨对虾肌肉组织中的表达提供分子生物学依据。【方法】通过构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,并进行EST测序分析。【结果】文库质量分析表明,初始文库库容约8.50×106CFU,重组率在95%左右,插入片断大小为0.5~4.0kb,多数在1.0kb以上。随机测序72条cDNA,可得到有功能注释的37条全长cDNA和18条编码未知蛋白的基因序列。通过Gene Ontology功能分类可将有功能注释的37个基因分为蛋白质合成、细胞骨架、细胞信号传导、代谢、转运、能量、转录、抗病及防御、生殖发育和未知功能基因等10类,其中蛋白质合成类基因最多(27.03%),与细胞骨架(13.51%)、细胞信号传导(13.51%)及代谢类基因(13.51%)共占67.56%。【结论】构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,可实现短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息。 展开更多
关键词 凡纳对虾 肌肉组织 cdna全长文库 生长性状
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低温处理与常温凡纳滨对虾基因差异表达文库的构建及分析 被引量:1
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作者 蒋小珍 彭金霞 +1 位作者 韦嫔媛 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1662-1668,共7页
【目的】筛选出对虾耐寒相关基因,为今后进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据。【方法】利用SSH技术构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库,并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT-PCR扩增等对差减获得的耐寒相关功... 【目的】筛选出对虾耐寒相关基因,为今后进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据。【方法】利用SSH技术构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库,并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT-PCR扩增等对差减获得的耐寒相关功能基因进行验证。【结果】在构建的正、负文库768个克隆中有152个为低温高表达克隆、331个为常温高表达克隆;将正文库100个克隆拼接可获得ESTs同源群39个,其中已知基因29个,主要涉及能量代谢、表达调控、信号传导、细胞免疫、抗细胞凋零、蛋白质加工及其他基因等;将负文库50个克隆拼接可获得ESTs同源群18个,其中已知基因17个,主要涉及细胞免疫、维持细胞代谢、物质转运、信号传导及其他基因等。经RT-PCR验证,从正文库中筛选出的HSPB1、NGT4和NGT7基因在低温条件下的表达量显著高于常温。【结论】综合运用SSH、斑点杂交、克隆测序和RT-PCR可有效筛选并验证凡纳滨对虾耐寒相关基因,为揭示对虾耐寒分子调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 凡纳对虾 抑制性消减杂交技术(SSH) 文库 耐寒相关基因 斑点杂交
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凡纳滨对虾类泛素折叠修饰蛋白Ufm1基因克隆、序列分析及结构预测
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作者 盛小伟 高永华 +3 位作者 彭金霞 李咏梅 陈晓汉 熊建华 《南方农业学报》 CAS CSCD 2011年第2期192-196,共5页
【目的】了解类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)的结构特征和蛋白功能,为进一步探究Ufm1基因功能提供参考。【方法】以同一生长性状分离凡纳滨对虾家系的肌肉组织为材料,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选获得Ufm1基因,经全... 【目的】了解类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)的结构特征和蛋白功能,为进一步探究Ufm1基因功能提供参考。【方法】以同一生长性状分离凡纳滨对虾家系的肌肉组织为材料,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选获得Ufm1基因,经全长cDNA文库筛选获得Ufm1基因全长序列。【结果】Ufm1基因全长cDNA序列长714bp,包含261bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为86个氨基酸,预测的分子量为9.3ku,等电点pI为6.55;其编码蛋白无信号肽,无跨膜区域,可能定位于细胞质中,属于亲水性蛋白,含有1个酪蛋白激酶II磷酸化位点、1个N-糖基化位点、2个蛋白激酶C磷酸化位点;序列同源性分析表明,不同进化地位物种的Ufm1基因存在较高的同源性。【结论】Ufm1基因在系统进化上高度保守,这为进一步探究Ufm1基因功能及原核表达等奠定了基础。 展开更多
关键词 凡纳对虾 差减cdna文库 Ufm1基因 生物信息学
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中科院海洋所完成凡纳滨对虾基因组的探查分析
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《生物学教学》 北大核心 2016年第8期79-79,共1页
据科学网2016年3月17日报道,中科院海洋所海洋动物生殖与遗传工程课题组进行高通量测序文库构建和简化基因组测序,成功定位了凡纳滨对虾11个体长相关和7个体重相关的QTL,为推动凡纳滨对虾的分子标记辅助选育研究和全基因组选择育种... 据科学网2016年3月17日报道,中科院海洋所海洋动物生殖与遗传工程课题组进行高通量测序文库构建和简化基因组测序,成功定位了凡纳滨对虾11个体长相关和7个体重相关的QTL,为推动凡纳滨对虾的分子标记辅助选育研究和全基因组选择育种研究提供了重要的资源。相关研究成果发表在《科学报告》上。 展开更多
关键词 中科院海洋所 凡纳对虾 基因组测序 分子标记辅助选育 探查 文库构建 遗传工程 动物生殖
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