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家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)的表达纯化及活性分析
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作者 袁野 闫恕 +4 位作者 张丹丹 孔令聪 裴志花 刘树明 马红霞 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第1期8-13,共6页
为了研究家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)在家蝇防御体系中的相关活性,采用PCR技术,对从鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选到的家蝇幼虫几丁质结合蛋白Ⅰ基因(Musca domestica chitin binding proteinⅠ,Md-CBPⅠ... 为了研究家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)在家蝇防御体系中的相关活性,采用PCR技术,对从鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选到的家蝇幼虫几丁质结合蛋白Ⅰ基因(Musca domestica chitin binding proteinⅠ,Md-CBPⅠ)进行扩增,并成功构建了重组表达质粒p ET-32a-Md-CBPⅠ,于大肠杆菌BL21(DE3)中得以高效表达,纯化并获得了MdCBPⅠ融合蛋白。进一步对该蛋白的亲和活性进行了研究,发现Md-CBPⅠ融合蛋白对几丁质以及纤维素均有一定的结合作用,且其对几丁质的结合作用相对较好。试验为家蝇几丁质结合蛋白生物学活性和免疫学活性的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 家蝇 几丁质结合蛋白 克隆 原核表达
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离子对萝卜中具有溶菌酶活性的几丁质结合蛋白活性的影响 被引量:4
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作者 赖晓芳 沈善瑞 +1 位作者 王炜军 徐凤彩 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期171-172,共2页
萝卜中有具有溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),为了了解CBPs作用机制以及在萝卜中的生理功能,研究了各种离子对CBPs溶菌酶活性的影响。结果显示,一价阳离子对CBPs溶菌酶活性的影响随阴离子不同有差异,当阴离... 萝卜中有具有溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),为了了解CBPs作用机制以及在萝卜中的生理功能,研究了各种离子对CBPs溶菌酶活性的影响。结果显示,一价阳离子对CBPs溶菌酶活性的影响随阴离子不同有差异,当阴离子为Cl-时,阳离子Na+、K+和NH4+对CBPs溶菌酶活性均有抑制作用,当阴离子为NO3-时,K+和NH4+低浓度时具有激活CBPs溶菌酶活性作用,K+和NH4+高浓度时具有抑制CBPs溶菌酶活性作用;二价阳离子对CBPs溶菌酶活性均具有抑制作用,Mn2+和Ca2+低浓度时具有激活CBP2溶菌酶活力作用。 展开更多
关键词 萝卜 溶菌酶活性 离子 稳定性 几丁质结合蛋白(cbps)
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几丁质结合蛋白基因克隆、表达与纯化 被引量:6
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作者 李美玉 曹洪玉 +1 位作者 张庆芳 王晓辉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2015年第11期41-46,共6页
该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)DL-6菌株中成功克隆了几丁质结合蛋白基因。PCR测序结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,其理论分子质量为58.517 ku,等电点(p I)4.35,命名为CBP58(Ge... 该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)DL-6菌株中成功克隆了几丁质结合蛋白基因。PCR测序结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,其理论分子质量为58.517 ku,等电点(p I)4.35,命名为CBP58(GenBank登录号KF234016)。结构域分析结果表明,该蛋白包括1个33家族碳水化合物结合模块(CBM),2个类型3几丁质结合域(Cht BDs);用Insight II 2005软件以同源建模的方法构建CBP58蛋白CBM33结构域的三维结构模型,Ramachandram图谱检测和三维结构评估显示模型结构合理,整体相容性较为可信;将CBP58基因构建到p ET23b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达;利用镍柱亲和层析纯化获得重组蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达,为后期几丁质结合蛋白(CBP)的生化性质表征奠定理论基础。 展开更多
关键词 几丁质结合蛋白 假交替单胞菌DL-6 克隆 表达 纯化
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日本沼虾表皮几丁质结合蛋白基因的克隆以及KK-42对其表达的影响 被引量:2
4
作者 张宇 王佩 +1 位作者 吕艳杰 宁黔冀 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2016年第5期106-111,共6页
为探讨KK-42缩短日本沼虾蜕皮周期的可能机制,首次从日本沼虾步足表皮组织克隆了编码几丁质结合蛋白的一个新基因——MnCBP-1部分cDNA序列,对其序列进行生物信息学分析,qRT-PCR技术检测MnCBP-1基因的表达水平以及KK-42的影响.结果表明,M... 为探讨KK-42缩短日本沼虾蜕皮周期的可能机制,首次从日本沼虾步足表皮组织克隆了编码几丁质结合蛋白的一个新基因——MnCBP-1部分cDNA序列,对其序列进行生物信息学分析,qRT-PCR技术检测MnCBP-1基因的表达水平以及KK-42的影响.结果表明,MnCBP-1基因部分cDNA序列为1396bp,含有特征性的几丁质结合结构域(chitin-bind-4),经BLAST比对,MnCBP-1与蚤状溞相似性为44%.qRT-PCR结果显示,步足表皮组织内MnCBP-1基因表达量随着蜕皮前期(D0-2)的开始逐渐增多.KK-42处理后,蜕皮间期(C)幼虾内MnCBP-1基因表达水平分别在6、12、24和48h比对照组显著升高,而在D0-2期和D3-4期MnCBP-1基因转录物仅在个别时间点有所增多.研究表明,MnCBP-1基因表达与蜕皮周期有关,KK-42处理可显著诱导MnCBP-1基因表达,且表达的高峰提前至C期,这可能是KK-42缩短蜕皮周期的机制之一. 展开更多
关键词 日本沼虾 几丁质结合蛋白 KK-42 克隆 基因表达
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甲壳动物表皮几丁质结合蛋白结构与功能研究进展 被引量:4
5
作者 郑征帆 吕艳杰 宁黔冀 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期538-542,共5页
由于坚硬表皮的限制,甲壳动物必须经过蜕皮才能生长。蜕皮是一个周期性的动态过程,包括旧表皮降解和新表皮的形成。作为表皮组成成分的几丁质是和蛋白质以结合的形式存在,此蛋白即为几丁质结合蛋白(CBPs),是甲壳动物表皮中重要的结构... 由于坚硬表皮的限制,甲壳动物必须经过蜕皮才能生长。蜕皮是一个周期性的动态过程,包括旧表皮降解和新表皮的形成。作为表皮组成成分的几丁质是和蛋白质以结合的形式存在,此蛋白即为几丁质结合蛋白(CBPs),是甲壳动物表皮中重要的结构性蛋白,该类蛋白一般含有特征性的结构域,由蜕皮激素的靶组织——表皮上皮细胞按照一定的周期和步骤表达合成。 展开更多
关键词 甲壳动物 几丁质结合蛋白 结构 功能
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亚洲玉米螟CPT1蛋白的表达、纯化和与几丁质的结合能力 被引量:1
6
作者 蒋望 包涵 +2 位作者 陈金利 刘田 杨青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期462-470,共9页
亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis是为害我国主要农作物玉米的一种重要害虫。昆虫表皮在运动、抵御机械损伤及对抗外界环境压力等方面发挥关键性作用。Tweedle(CPT)家族表皮蛋白在形成昆虫表皮中发挥重要作用,研究CPT有助于开发新一代害... 亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis是为害我国主要农作物玉米的一种重要害虫。昆虫表皮在运动、抵御机械损伤及对抗外界环境压力等方面发挥关键性作用。Tweedle(CPT)家族表皮蛋白在形成昆虫表皮中发挥重要作用,研究CPT有助于开发新一代害虫防治方法。本研究在大肠杆菌系统中以包涵体的形式重组表达了Of CPT1蛋白,使用金属螯合层析进行纯化,复性得到了Of CPT1蛋白,收率为50 mg/L。几丁质结合试验发现,Of CPT1对α-几丁质、β-几丁质、壳聚糖、胶体几丁质和几丁质纳米微晶均有一定的结合能力,其中与几丁质纳米微丝结合能力最强。圆二色光谱结果表明,Of CPT1蛋白与壳聚糖结合后二级结构从以α-螺旋占主导变为以β-折叠占主导。本研究利用原核表达系统获得了亚洲玉米螟重组CPT蛋白并表征了它的部分生物化学性质。 展开更多
关键词 表皮蛋白 Tweedle 几丁质结合 杀虫剂靶标
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羊传染性脓疱病毒口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白基因差异分析及原核表达
7
作者 李蓉 富国文 +5 位作者 曾琴 吴姣 袁嘉芮 刘亚波 四朗玉珍 樊月圆 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3506-3518,共13页
[目的]克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达,为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。[方法]以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性... [目的]克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达,为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。[方法]以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性引物,进行PCR扩增并克隆测序,对表达的CBP基因遗传进化关系及蛋白理化性质、结构特点进行分析;利用原核表达系统pGEX-4T-1构建重组质粒pGEX-4T-1-CBP-K、pGEX-4T-1-CBP-N并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。[结果]经测序,ORFV口唇感染株CBP基因全长873 bp,内脏感染株CBP基因全长846 bp,且后者在第217 bp处有24 bp碱基的丢失。系统进化树显示,口唇与内脏感染株不属于同一进化分支,遗传距离较远;口唇感染株CBP基因与中国吉林分离株亲缘关系最近;内脏感染株CBP基因与马来西亚分离株亲缘关系最近。口唇感染株CBP基因编码291个氨基酸,内脏感染株CBP基因编码282个氨基酸,蛋白二级结构均主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构有5处差异,主要是α-螺旋和β-折叠的变化。试验成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,其在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中以包涵体形式表达CBP融合蛋白,分子质量约为60 ku。[结论]本研究内脏感染株与口唇感染株相比,存在24 bp的缺失,并成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,可在大肠杆菌中表达CBP融合蛋白。本研究结果为揭示CBP在ORFV与宿主互作中发挥的作用提供参考,也可为寻找新的羊传染性脓疱防治方法提供依据。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) 趋化因子结合蛋白(cbp) 生物信息学 原核表达
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棉铃虫围食膜肠粘蛋白HaIIM72真核表达及几丁质结合活性检测
8
作者 张晓刚 郭巍 +3 位作者 徐大庆 赵丹 孙伟明 单鸣 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期92-96,共5页
在前期工作中,本实验室已成功克隆得到棉铃虫粘蛋白基因haiim72。为了研究粘蛋白HaIIM72的生化特性,本试验将haiim72基因克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac,构建重组杆状病毒bacmid-hai-im72,转染昆虫细胞系BTI-TN-5B1-4(HighFi... 在前期工作中,本实验室已成功克隆得到棉铃虫粘蛋白基因haiim72。为了研究粘蛋白HaIIM72的生化特性,本试验将haiim72基因克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac,构建重组杆状病毒bacmid-hai-im72,转染昆虫细胞系BTI-TN-5B1-4(HighFive)从而在昆虫细胞系中进行表达。结果表明:成功表达了分子量约260kDa的棉铃虫围食膜肠粘蛋白HaIIM72。几丁质结合活性试验表明,肠粘蛋白HaIIM72具有几丁质结合活性,能够被较强的变性剂洗脱,属于第三类围食膜蛋白。 展开更多
关键词 棉铃虫 围食膜 肠粘蛋白HaIIM72 真核表达 几丁质结合活性
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热液区管状蠕虫几丁质结合蛋白的克隆表达及功能鉴定
9
作者 闫鑫富 阮灵伟 《台湾海峡》 CAS CSCD 2012年第1期34-38,共5页
本文应用PCR技术对四种管状蠕虫几丁质结合蛋白进行了扩增,进而连接到pIZ-FLAG构建了重组表达载体,并在昆虫细胞中实现了几丁质结合蛋白的异源重组表达.我们对几丁质结合蛋白的功能进行了初步研究,亲和活性实验结果表明这四种几丁质结... 本文应用PCR技术对四种管状蠕虫几丁质结合蛋白进行了扩增,进而连接到pIZ-FLAG构建了重组表达载体,并在昆虫细胞中实现了几丁质结合蛋白的异源重组表达.我们对几丁质结合蛋白的功能进行了初步研究,亲和活性实验结果表明这四种几丁质结合蛋白对α-chitin具有亲和活性,并且可以辅助几丁质酶,对降解α-chitin和β-chitin均有不同程度的促进作用,且作用效果明显.结果表明,这四种几丁质结合蛋白均为α型,且可以促进几丁质酶的活性,对降解几丁质多糖具有巨大的应用潜力和应用价值. 展开更多
关键词 海洋生物学 热液口 管状蠕虫 几丁质结合蛋白 克隆 表达
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拟南芥钙调素结合蛋白基因启动子的克隆及表达 被引量:2
10
作者 万东莉 李瑞丽 +4 位作者 邹博 高阳 万永青 王瑞刚 李国婧 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期17-22,共6页
采用PCR技术从拟南芥中克隆了SCBP60g基因的启动子,并与GUS报告基因融合构建重组表达载体,转化野生型拟南芥,对获得的转基因株系进行GUS组织染色,从基因调控水平上探讨其在功能方面的差异。结果显示:SCBP60g基因的启动子能指导GUS报告... 采用PCR技术从拟南芥中克隆了SCBP60g基因的启动子,并与GUS报告基因融合构建重组表达载体,转化野生型拟南芥,对获得的转基因株系进行GUS组织染色,从基因调控水平上探讨其在功能方面的差异。结果显示:SCBP60g基因的启动子能指导GUS报告基因在拟南芥的根、茎、叶和花中表达,并且在这些部位的维管束表达较强。这种表达方式与LCBP60g基因的启动子指导的GUS基因组织化学染色有差异,表明这个启动子的表达调控具有一定的特异性。 展开更多
关键词 拟南芥 启动子 钙调素结合蛋白 cbp60g GUS报告基因
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Src羧基末端激酶结合蛋白过表达及棕榈酰化对裸鼠T系白血病Jurkat细胞增殖作用影响的研究 被引量:2
11
作者 马宇 高美华 +3 位作者 张敏锐 张蓓 王冰 杨丽华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期51-55,共5页
目的:建立Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞裸鼠模型,研究Cbp过表达及棕榈酰化对Jurkat细胞增殖作用的影响。方法:利用neg-EGFP、Cbp-EGFP、Cbp-m-EGFP融合蛋白慢病毒载体转染的Jurkat细胞构建动物模... 目的:建立Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞裸鼠模型,研究Cbp过表达及棕榈酰化对Jurkat细胞增殖作用的影响。方法:利用neg-EGFP、Cbp-EGFP、Cbp-m-EGFP融合蛋白慢病毒载体转染的Jurkat细胞构建动物模型,24只5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、空病毒对照组、Cbp过表达组和Cbp棕榈酰化位点突变组,每组6只。接种前和接种后0、1、2、3、4、5周裸鼠称重,取外周血计数白细胞总数。利用病毒本身携带的EGFP绿色荧光蛋白在激光共聚焦显微镜下观察Jurkat细胞在外周血中的增殖情况;HE染色观察肝脏的病理变化;流式细胞仪检测Jurkat细胞在小鼠骨髓和外周血中的增殖水平。结果:Cbp过表达组小鼠体重低于空白对照组,高于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组,Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠体重低于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。Cbp过表达组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、低于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组。Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。结论:成功建立了Cbp过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞动物模型,Cbp过表达可抑制Jurkat细胞增殖,Cbp棕榈酰化位点突变可促进Jurkat细胞增殖。 展开更多
关键词 Src羧基末端激酶结合蛋白(cbp) T系白血病 JURKAT细胞 裸鼠模型
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萝卜CBPs溶菌酶活性的稳定性研究 被引量:1
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作者 赖晓芳 沈善瑞 +1 位作者 王炜军 徐凤彩 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第6期1330-1333,共4页
植物溶菌酶是植物防御体系中的一部分,在植物防卫体系中具有重要作用。萝卜中有2个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),分别是CBP1、CBP2组分。为了解CBPs的作用机制以及在萝卜中的生理功能,试验研究了CBP1、C... 植物溶菌酶是植物防御体系中的一部分,在植物防卫体系中具有重要作用。萝卜中有2个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),分别是CBP1、CBP2组分。为了解CBPs的作用机制以及在萝卜中的生理功能,试验研究了CBP1、CBP2溶菌酶组分酶活性的稳定性。结果显示,CBP1、CBP2在pH 5.4、65℃条件下迅速失活,在pH 3.4~10.6、25℃条件下较稳定;CBP1较CBP2对氧化剂H2O2、NaClO敏感;CBP2较CBP1对木瓜蛋白酶敏感;2个组分对胰蛋白酶均敏感。 展开更多
关键词 萝卜 溶菌酶活性 几丁质结合蛋白 稳定性
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拟南芥钙调素结合蛋白参与胁迫响应的研究(英文)
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作者 万东莉 丛靖宇 +3 位作者 李瑞丽 邹博 王瑞刚 李国婧 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1099-1105,共7页
采用实时荧光定量RT-PCR和Northern blotting技术检测了野生型拟南芥中CBP60g基因对丁香假单胞菌和非生物胁迫的响应,并对丁香假单胞菌接种后,野生型拟南芥、cbp60g-1突变体和CBP60g过表达转基因植物中抗逆相关基因的表达变化进行检测... 采用实时荧光定量RT-PCR和Northern blotting技术检测了野生型拟南芥中CBP60g基因对丁香假单胞菌和非生物胁迫的响应,并对丁香假单胞菌接种后,野生型拟南芥、cbp60g-1突变体和CBP60g过表达转基因植物中抗逆相关基因的表达变化进行检测。结果显示:(1)在野生型拟南芥中CBP60g基因的表达能被丁香假单胞菌、高盐、冷和机械损伤所诱导。(2)经丁香假单胞菌诱导后病程相关基因PR5和AIG1的表达在过表达转基因植物中明显高于野生型。(3)受干旱和ABA诱导的AtMYB2基因的表达在过表达转基因植物中也高于野生型。研究表明,CBP60g同时参与了拟南芥对生物和非生物胁迫响应。 展开更多
关键词 拟南芥 钙调素结合蛋白 cbp60g 基因表达 胁迫
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过表达Src羧基末端激酶结合蛋白的Jurkat细胞荷瘤小鼠模型的建立与鉴定
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作者 高美华 马宇 +3 位作者 王冰 张蓓 张敏锐 张树超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1167-1169,1174,共4页
目的建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型。方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只。小鼠腋窝皮下注射Ju... 目的建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型。方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只。小鼠腋窝皮下注射Jurkat细胞1×107个/0.1 m L。建模成功后取出完整瘤体组织称质量、HE染色观察小鼠皮下肿块的病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血Jurkat细胞增殖水平;ELISA检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)水平。结果病毒转染过表达CBP模型组小鼠瘤体组织块体积和质量小于对照组,HE染色瘤体内有Jurkat细胞增殖,外周血Jurkat细胞增殖水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组,血清中IL-2水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组。结论成功建立了过表达CBP的Jurkat白血病细胞小鼠荷瘤模型,CBP可抑制Jurkat细胞IL-2分泌和增殖。 展开更多
关键词 Src羧基末端激酶结合蛋白(cbp) T系白血病 JURKAT细胞 小鼠模型
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亚洲玉米螟表皮蛋白CPR9的表达纯化及与几丁质的相互作用 被引量:1
15
作者 卜云飞 刘田 +1 位作者 陈磊 杨青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期79-86,共8页
亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis是我国玉米最重要的害虫,了解亚洲玉米螟表皮形成的机制将有助于对其开展生物防治。表皮蛋白和几丁质是构成昆虫表皮的两种主要成分,因此研究两者的相互作用对于阐明昆虫表皮形成机制具有关键意义。CPR9... 亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis是我国玉米最重要的害虫,了解亚洲玉米螟表皮形成的机制将有助于对其开展生物防治。表皮蛋白和几丁质是构成昆虫表皮的两种主要成分,因此研究两者的相互作用对于阐明昆虫表皮形成机制具有关键意义。CPR9是亚洲玉米螟体壁表皮转录组中相对丰度最高的表皮蛋白基因。序列分析发现CPR9属于CPR家族中RR-1亚家族的表皮蛋白,含有R&R结构域,可能是通过结合几丁质来发挥功能。为了研究CPR9与几丁质的相互作用,本研究利用p ET-SUMO载体实现了SUMO-CPR9融合蛋白的可溶表达,并通过SUMO蛋白酶处理及两次金属螯合亲和层析纯化了CPR9,平均收率为5 mg/L。几丁质结合试验发现,CPR9对不同类型的几丁质的结合具有选择性。CPR9对α-几丁质结合能力很强,对胶体几丁质结合能力较强,但不与β-几丁质结合。脱乙酰几丁质(壳聚糖)结合试验发现,CPR9能与脱乙酰几丁质结合并使其发生团聚。圆二色光谱分析表明,CPR9在结合脱乙酰几丁质后,其二级结构中平行β折叠和β转角比例上升,反平行β折叠及无规卷曲比例下降。本研究发现了CPR家族表皮蛋白与不同类型几丁质的结合存在特异性,而且在结合过程中会发生结构变化,有助于进一步了解昆虫表皮的形成机制。 展开更多
关键词 昆虫表皮 表皮蛋白 几丁质结合 结构变化
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胰岛素联合硒抑制糖尿病心肌病大鼠p38MAPK/CBP通路减少心肌细胞凋亡 被引量:7
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作者 徐天娇 刘勇 +4 位作者 邓雅婷 孟瑾 李萍 胥晓丽 曾菊绒 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期926-930,935,共6页
目的观察胰岛素联合硒对糖尿病心肌病大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶/CREB结合蛋白(p38MAPK/CBP)通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病心肌病组、糖尿病心肌病胰岛素治疗组、糖尿病心肌病硒治疗组、糖尿病心肌病胰岛素联... 目的观察胰岛素联合硒对糖尿病心肌病大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶/CREB结合蛋白(p38MAPK/CBP)通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病心肌病组、糖尿病心肌病胰岛素治疗组、糖尿病心肌病硒治疗组、糖尿病心肌病胰岛素联合硒治疗组。流式细胞术检测细胞周期;末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡;Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E、Bax、Bcl-2、p38MAPK/磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶(p-p38MAPK)、CBP及Ku70的水平;免疫共沉淀法检测Ku70的乙酰化。结果胰岛素联合硒明显抑制心肌细胞凋亡,增加Bcl-2表达,降低Bax、cyclin D1、cyclin E、p38MAPK/p-p38MAPK、CBP、Ku70和乙酰化Ku70的表达水平。结论胰岛素联合硒通过抑制p38MAPK/CBP通路抑制心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 胰岛素 糖尿病心肌病 p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK) CREB结合蛋白(cbp)
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家蚕不同茧色品种中cbp基因的结构和表达分析 被引量:6
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作者 牛艳山 陈亚东 +5 位作者 席建 司马杨虎 段雪梅 梁海丽 甘丽萍 徐世清 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期942-950,共9页
类胡萝卜素结合蛋白(CBP)是唯一已被确认与家蚕黄色茧形成密切相关的主要蛋白质。文章选择12个有色茧和白茧蚕品种,调查了cbp基因结构、转录产物mRNA类型和丝腺类胡萝卜素紫外可见光吸收特征与其茧色的关系。结果表明:黄色茧蚕品种含有... 类胡萝卜素结合蛋白(CBP)是唯一已被确认与家蚕黄色茧形成密切相关的主要蛋白质。文章选择12个有色茧和白茧蚕品种,调查了cbp基因结构、转录产物mRNA类型和丝腺类胡萝卜素紫外可见光吸收特征与其茧色的关系。结果表明:黄色茧蚕品种含有2种或3种cbp基因结构,同时转录具有CBP功能性的完整mRNA和缺少第2外显子的mRNA;绿茧品种间cbp基因结构存在差异,转录缺少第2外显子的mRNA;白茧蚕品种cbp基因只有1种结构,转录缺少第2外显子的mRNA。文章在黄茧品种中新发现的cbp基因第1内含子序列可能具有茧色品种特异性,家蚕黄茧品种丝腺的紫外可见吸收光谱特征显著区别于绿茧和白茧品种,cbp基因的结构和表达特征与家蚕茧色密切相关。 展开更多
关键词 家蚕 天然彩色茧 类胡萝卜素结合蛋白(cbp) 基因结构和表达
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双叉犀金龟表皮蛋白Td14144表达纯化及性质研究 被引量:1
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作者 刘晶 包涵 +3 位作者 陈磊 刘源涛 刘田 杨青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2022年第2期513-520,共8页
表皮蛋白是昆虫表皮的重要组成成份,在昆虫的生长发育过程中起着重要作用,有可能成为农业害虫的防治靶标。双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus是铁皮石斛的一种重要害虫,且对其表皮蛋白的研究较少。本文通过研究双叉犀金龟表皮蛋白Td1414... 表皮蛋白是昆虫表皮的重要组成成份,在昆虫的生长发育过程中起着重要作用,有可能成为农业害虫的防治靶标。双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus是铁皮石斛的一种重要害虫,且对其表皮蛋白的研究较少。本文通过研究双叉犀金龟表皮蛋白Td14144的表达纯化及与几丁质结合的相关性质明确Td14144功能的重要性。根据双叉犀金龟转录组测序数据,利用RT-PCR获得表皮蛋白Td14144基因(GenBank登录号:MZ463195),并对其进行生物信息学分析。序列分析表明表皮蛋白Td14144属于CPR家族中RR-2亚族,含有R&R保守结构域;系统进化分析结果表明,Td14144与光肩星天牛Anoplophora glabripennis的AgCP的亲缘关系最近。随后将基因片段与pET-28a载体同源重组构建表达载体pET28a-14144,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中原核表达,并使用金属螯合层析进行分离纯化,SDS-PAGE及Western blot验证重组蛋白的表达纯化,成功获得95%以上纯度的Td14144蛋白。利用几丁质结合试验评估Td14144与不同类型几丁质结合的能力,发现Td14144可以与壳聚糖、α-几丁质、β-几丁质和胶体几丁质结合,其中对壳聚糖和α-几丁质的结合能力最强。 展开更多
关键词 双叉犀金龟 表皮蛋白 几丁质结合蛋白
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双叉犀金龟表皮蛋白TdCPR12611与TdCPR7854的表达纯化及特性分析 被引量:3
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作者 叶长青 包涵 +1 位作者 刘田 杨青 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期19-29,共11页
【目的】探析双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus表皮蛋白的序列特征及生化性质。【方法】利用RT-PCR克隆双叉犀金龟表皮蛋白基因,利用生物信息学方法分析表皮蛋白的结构特征及系统发育;采用大肠杆菌Escherichia coli表达系统对双叉犀金... 【目的】探析双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus表皮蛋白的序列特征及生化性质。【方法】利用RT-PCR克隆双叉犀金龟表皮蛋白基因,利用生物信息学方法分析表皮蛋白的结构特征及系统发育;采用大肠杆菌Escherichia coli表达系统对双叉犀金龟表皮蛋白进行重组表达,并通过金属离子鳌合层析的方法对重组蛋白进行纯化;采用体外结合实验检测双叉犀金龟表皮蛋白与α-几丁质(α-chitin)、β-几丁质(β-chitin)、壳聚糖(chitosan)和胶体几丁质(colloidal chitin)的结合能力;观察确定蛋白液液相分离(liquid-liquid phase separation,LLPS)性质。【结果】克隆获得双叉犀金龟表皮蛋白基因TdCPR 12611(GenBank登录号:MT813021)和TdCPR 7854(GenBank登录号:MT813022)。系统进化分析结果表明,TdCPR12611与食粪金龟Onthophagus taurus OtCP-1的亲缘关系最近;TdCPR7854与食粪金龟的OtCP-acp20-1,OtCP-acp20-2和OtCP-acp20-3的亲缘关系最为接近,它们均属于CPR_RR-2家族。原核表达和纯化获得重组表皮蛋白TdCPR12611和TdCPR7854。两重组表皮蛋白与4种类型的几丁质具有不同结合能力,其中有41.4%的TdCPR12611与壳聚糖结合,而有62.3%的TdCPR7854与β-几丁质结合。TdCPR12611具有内部较为无序的结构,并能够在室温条件下自发团聚形成液液相分离现象,而TdCPR7854不能。【结论】本研究测定分析了双叉犀金龟CPR_RR-2家族表皮蛋白TdCPR12611与TdCPR7854的序列特征和与几丁质的结合特性。研究结果有利于加深人们对于昆虫表皮装配机制的了解,为蛋白仿生材料开发提供思路。 展开更多
关键词 双叉犀金龟 表皮蛋白 CPR蛋白 RR-2家族 几丁质结合 液液相分离 仿生材料
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CREB信号通路在神经系统中的调控及功能 被引量:16
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作者 宋海龙 郑焱 王晓民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期797-804,共8页
cAMP应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在神经元生成、突触可塑性及学习记忆等方面都具有重要的调节作用,这使得与CREB信号通路相关的分子成为较受关注的神经系统疾病干预的药物靶点.本文概述了CREB的基本... cAMP应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在神经元生成、突触可塑性及学习记忆等方面都具有重要的调节作用,这使得与CREB信号通路相关的分子成为较受关注的神经系统疾病干预的药物靶点.本文概述了CREB的基本构成、相关信号通路、其目的基因表达调控及其在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中的作用. 展开更多
关键词 cAMP应答元件结合蛋白(CREB) cAMP反应元件(CRE) CREB结合蛋白(cbp) 阿尔茨海默病
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