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拟南芥受体激酶At CERK1胞外结构域互作蛋白的筛选与验证
1
作者
史文炯
付振超
曾洪梅
《植物保护》
北大核心
2025年第3期113-121,134,共10页
几丁质激发子受体激酶1(chitin elicitor receptor kinase 1,CERK1)是一种含有溶素基序(lysin motif,LysM)的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),在植物免疫响应过程中起重要作用。目前发现CERK1识别的激发子主要为碳水化...
几丁质激发子受体激酶1(chitin elicitor receptor kinase 1,CERK1)是一种含有溶素基序(lysin motif,LysM)的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),在植物免疫响应过程中起重要作用。目前发现CERK1识别的激发子主要为碳水化合物,是否识别蛋白类配体还不清楚。禾谷镰刀菌Fusarium graminearum是众所周知的真菌病原体,可以侵染谷物也可以侵染拟南芥。为了确定CERK1的新功能并筛选获得新的激发子,我们以拟南芥几丁质激发子受体激酶胞外结构域(Arabidopsis thaliana chitin elicitor receptor kinase 1 extra cellular domain,At CERK1-ECD)为诱饵,通过酵母双杂交(yeast-two-hybrid,Y2H)筛选禾谷镰刀菌cDNA文库,获得候选互作蛋白内切葡聚糖酶5(Fg-endoglucanase-5)。内切葡聚糖酶是一类参与植物免疫反应及微生物侵染、定殖、共生的蛋白,Fg-endoglucanase-5是其中的一种。进一步,通过谷胱甘肽S-转移酶下拉(GST pull-down)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验验证了At CERK1-ECD与Fg-endoglucanase-5的相互作用,并分析了Fg-endoglucanase-5的功能。本研究获得了At CERK1-ECD的互作蛋白Fg-endoglucanase-5并阐明了它们在植物-微生物相互作用中的功能,有助于开发新型激发子并找到植物病害防治的新策略。
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关键词
拟南芥
几丁质激发子受体激酶胞外结构域
酵母双杂交
互作蛋白
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职称材料
人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测
被引量：
1
2
作者
郭靖
冯滢滢
+5 位作者
王涛
张柯
李玲
冀全博
徐小洁
叶棋浓
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期1211-1215,共5页
目的构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD融合蛋白,并检测其活性。方法用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PK...
目的构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD融合蛋白,并检测其活性。方法用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体。重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,最后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用。结果构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1Rβ-PKD可以和MEMO相互作用。结论成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白。
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关键词
胰岛素样生长因子1
受体
(IGF1R)
β亚基
胞
外
结构域
β亚基
胞
内蛋白
激酶
结构域
原核表达
纯化
表皮生长因子
受体
2驱动的细
胞
运动调节蛋白(MEMO)
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职称材料
题名
拟南芥受体激酶At CERK1胞外结构域互作蛋白的筛选与验证
1
作者
史文炯
付振超
曾洪梅
机构
中国农业科学院植物保护研究所
出处
《植物保护》
北大核心
2025年第3期113-121,134,共10页
基金
国家重点研发计划(2017YFD0200900)。
文摘
几丁质激发子受体激酶1(chitin elicitor receptor kinase 1,CERK1)是一种含有溶素基序(lysin motif,LysM)的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),在植物免疫响应过程中起重要作用。目前发现CERK1识别的激发子主要为碳水化合物,是否识别蛋白类配体还不清楚。禾谷镰刀菌Fusarium graminearum是众所周知的真菌病原体,可以侵染谷物也可以侵染拟南芥。为了确定CERK1的新功能并筛选获得新的激发子,我们以拟南芥几丁质激发子受体激酶胞外结构域(Arabidopsis thaliana chitin elicitor receptor kinase 1 extra cellular domain,At CERK1-ECD)为诱饵,通过酵母双杂交(yeast-two-hybrid,Y2H)筛选禾谷镰刀菌cDNA文库,获得候选互作蛋白内切葡聚糖酶5(Fg-endoglucanase-5)。内切葡聚糖酶是一类参与植物免疫反应及微生物侵染、定殖、共生的蛋白,Fg-endoglucanase-5是其中的一种。进一步,通过谷胱甘肽S-转移酶下拉(GST pull-down)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验验证了At CERK1-ECD与Fg-endoglucanase-5的相互作用,并分析了Fg-endoglucanase-5的功能。本研究获得了At CERK1-ECD的互作蛋白Fg-endoglucanase-5并阐明了它们在植物-微生物相互作用中的功能,有助于开发新型激发子并找到植物病害防治的新策略。
关键词
拟南芥
几丁质激发子受体激酶胞外结构域
酵母双杂交
互作蛋白
Keywords
Arabidopsis thaliana
chitin elicitor receptor kinases 1 extracellular domain
yeast-two-hybrid
interacting protein
分类号
S432.44 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测
被引量：
1
2
作者
郭靖
冯滢滢
王涛
张柯
李玲
冀全博
徐小洁
叶棋浓
机构
大连医科大学生物工程研究所
军事医学科学院生物工程研究所
第二炮兵总医院
军事医学科学院科技部
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期1211-1215,共5页
基金
国家自然科学基金(81472589
31100604)
+2 种基金
北京市科技新星计划(Z141102001814055)
军事医学科学院创新基金转化医学项目(ZHYX003)
北京市自然科学基金(7132155)
文摘
目的构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD融合蛋白,并检测其活性。方法用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体。重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,最后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用。结果构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1Rβ-PKD可以和MEMO相互作用。结论成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白。
关键词
胰岛素样生长因子1
受体
(IGF1R)
β亚基
胞
外
结构域
β亚基
胞
内蛋白
激酶
结构域
原核表达
纯化
表皮生长因子
受体
2驱动的细
胞
运动调节蛋白(MEMO)
Keywords
insulin-like growth factor 1 receptor（IGF1R）
β subunit extracellular domain（β-ED）
β subunit intracellular protein kinase domain（β-PKD）
prokaryotic expression
purification
mediator of ERBB2-driven cell motility（MEMO）
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
Q816 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
拟南芥受体激酶At CERK1胞外结构域互作蛋白的筛选与验证
史文炯
付振超
曾洪梅
《植物保护》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测
郭靖
冯滢滢
王涛
张柯
李玲
冀全博
徐小洁
叶棋浓
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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