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水生几丁质降解菌来源双功能几丁质酶截短突变体的异源表达和酶学性质研究
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作者 顾晨曦 陈建荣 +3 位作者 唐莹华 韦权峰 姜明国 潘丽霞 《广西科学》 北大核心 2025年第3期526-537,共12页
为促进几丁质的绿色、高效降解及其高值化利用,本研究从Chitinilyticum aquatile CSC-1中克隆几丁质酶基因CaChi18B及其截短突变体CaChi18B_ΔChBD_(1)并诱导表达、纯化,同时对获取的重组几丁质酶Ca Chi18B_ΔChBD_(1)进行酶学性质研究... 为促进几丁质的绿色、高效降解及其高值化利用,本研究从Chitinilyticum aquatile CSC-1中克隆几丁质酶基因CaChi18B及其截短突变体CaChi18B_ΔChBD_(1)并诱导表达、纯化,同时对获取的重组几丁质酶Ca Chi18B_ΔChBD_(1)进行酶学性质研究。实验结果表明,截短几丁质结合域(ChBD_(1))后,目的蛋白的可溶性表达水平提高。以胶体几丁质为底物时,Ca Chi18B_ΔChBD_(1)比活力为3.05 U·mg^(-1),最适温度为50℃,最适pH值为7;米氏常数(K_(m))为0.6626 mg·mL^(-1),最大反应速率(V_(max))为1.104μmol·L^(-1)·min^(-1)·mg^(-1),转换频率(k_(cat))为11.04 s^(-1)。利用高效液相色谱(HPLC)对水解产物进行分析,结果表明重组几丁质酶Ca Chi18B_ΔChBD_(1)是具有几丁二糖外切酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的双功能酶。本研究构建的重组几丁质酶具有较好的酶活力和环境耐受性,在降解几丁质及虾蟹壳生物质方面有一定的应用前景。 展开更多
关键词 水生几丁质降解菌 几丁二糖外切酶 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 异源表达 酶学性质
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