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重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株的构建及意义
被引量：
2
1
作者
王刚
姜博文
+5 位作者
杨林花
聂欣
贾辰亮
刘静
申泉
柴宝峰
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期422-425,共4页
本研究构建重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株并探讨其意义。将人凝血因子Ⅸ(F9)小基因克隆到哺乳动物表达载体pCMV-Tag3B上;利用PCR定点突变技术得到在小基因121位氨基酸位置含有一个提前终止密码子(premature terminati...
本研究构建重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株并探讨其意义。将人凝血因子Ⅸ(F9)小基因克隆到哺乳动物表达载体pCMV-Tag3B上;利用PCR定点突变技术得到在小基因121位氨基酸位置含有一个提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的无义突变体;将构建的F9小基因及其无义突变体分别转染人肝癌细胞HepG2,经G418抗性筛选,单克隆化扩大培养,得到稳定细胞株,分别命名为HepG2-WT和HepG2-N。结果显示:通过酶切鉴定、PCR鉴定及DNA测序分析证明,小基因及其无义突变体表达载体构建成功;通过RT-PCR及基因组PCR均扩增到了大小正确的目的基因片段,证明了含有重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体的稳定细胞株构建成功。结论:本研究成功构建了重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株,该细胞株可用于无义突变导致血友病的治疗药物的筛选和PTC通读药物的筛选等。
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关键词
血
友病B
凝血因子ⅸ小基因
无义突变
稳定细胞株
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职称材料
无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株选择性剪接的研究
被引量：
1
2
作者
王刚
孙雯雯
+7 位作者
朱履锴
马艳春
张夏林
张建华
任娟
秦秀玉
杨林花
柴宝峰
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期228-232,共5页
目的:探讨无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株发生选择性剪接的分子机制。方法:将人凝血因子IX小基因(Mini-hF9)及其无义突变体分别转染哺乳动物细胞HeLa,经G418抗性筛选、单克隆化得到稳定细胞株;通过RT-PCR及Western blot分别检...
目的:探讨无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株发生选择性剪接的分子机制。方法:将人凝血因子IX小基因(Mini-hF9)及其无义突变体分别转染哺乳动物细胞HeLa,经G418抗性筛选、单克隆化得到稳定细胞株;通过RT-PCR及Western blot分别检测稳定细胞株中Mini-hF9基因mRNA的选择性剪接及蛋白表达情况。结果:成功构建了野生型和无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株HeLa-F9-WT、HeLa-F9-M1和HeLa-F9-M2。野生型稳定细胞株HeLa-F9-WT中扩增到正常剪接产物Norm;无义突变稳定细胞株HeLa-F9-M1中扩增到Norm和Alt-S1这两种剪接产物,HeLa-F9-M2中扩增到Norm、Alt-S1和Alt-S2这三种剪接产物。结论:无义突变的凝血因子IX基因可能触发无义相关的选择性剪接(NAS)途径,导致选择性剪接的产生。
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关键词
血
友病
凝血因子ⅸ小基因
无义突变
稳定细胞株
无义相关的选择性剪接
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职称材料
题名
重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株的构建及意义
被引量：
2
1
作者
王刚
姜博文
杨林花
聂欣
贾辰亮
刘静
申泉
柴宝峰
机构
山西大学生物技术研究所
山西医科大学第二医院血液科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期422-425,共4页
基金
国家自然科学基金(编号31172078
30770294)
+1 种基金
高等学校博士学科点专项科研基金(编号20111401110008)
山西省高等教育优秀创新项目(编号20113011)
文摘
本研究构建重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株并探讨其意义。将人凝血因子Ⅸ(F9)小基因克隆到哺乳动物表达载体pCMV-Tag3B上;利用PCR定点突变技术得到在小基因121位氨基酸位置含有一个提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的无义突变体;将构建的F9小基因及其无义突变体分别转染人肝癌细胞HepG2,经G418抗性筛选,单克隆化扩大培养,得到稳定细胞株,分别命名为HepG2-WT和HepG2-N。结果显示:通过酶切鉴定、PCR鉴定及DNA测序分析证明,小基因及其无义突变体表达载体构建成功;通过RT-PCR及基因组PCR均扩增到了大小正确的目的基因片段,证明了含有重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体的稳定细胞株构建成功。结论:本研究成功构建了重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株,该细胞株可用于无义突变导致血友病的治疗药物的筛选和PTC通读药物的筛选等。
关键词
血
友病B
凝血因子ⅸ小基因
无义突变
稳定细胞株
Keywords
hemophilia B
minigene hF9
nonsense mutation
sable cell lines
分类号
R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病]
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职称材料
题名
无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株选择性剪接的研究
被引量：
1
2
作者
王刚
孙雯雯
朱履锴
马艳春
张夏林
张建华
任娟
秦秀玉
杨林花
柴宝峰
机构
山西医科大学第二临床医学院(山西医科大学第二医院)血液科
山西医科大学血液病学研究所
山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期228-232,共5页
基金
国家自然科学基金(81700182,31772450,81970172)
山西省重点研发计划(201803D31123)。
文摘
目的:探讨无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株发生选择性剪接的分子机制。方法:将人凝血因子IX小基因(Mini-hF9)及其无义突变体分别转染哺乳动物细胞HeLa,经G418抗性筛选、单克隆化得到稳定细胞株;通过RT-PCR及Western blot分别检测稳定细胞株中Mini-hF9基因mRNA的选择性剪接及蛋白表达情况。结果:成功构建了野生型和无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株HeLa-F9-WT、HeLa-F9-M1和HeLa-F9-M2。野生型稳定细胞株HeLa-F9-WT中扩增到正常剪接产物Norm;无义突变稳定细胞株HeLa-F9-M1中扩增到Norm和Alt-S1这两种剪接产物,HeLa-F9-M2中扩增到Norm、Alt-S1和Alt-S2这三种剪接产物。结论:无义突变的凝血因子IX基因可能触发无义相关的选择性剪接(NAS)途径,导致选择性剪接的产生。
关键词
血
友病
凝血因子ⅸ小基因
无义突变
稳定细胞株
无义相关的选择性剪接
Keywords
hemophilia
Mini-hF9 gene
nonsense mutation
stable cell strain
nonsense-associated altered splicing
分类号
R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株的构建及意义
王刚
姜博文
杨林花
聂欣
贾辰亮
刘静
申泉
柴宝峰
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
在线阅读
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职称材料
2
无义突变的人凝血因子IX小基因稳定细胞株选择性剪接的研究
王刚
孙雯雯
朱履锴
马艳春
张夏林
张建华
任娟
秦秀玉
杨林花
柴宝峰
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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