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HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
1
作者
孙兴会
张宇清
+4 位作者
王霞
侯敏
谭理
李平
朱运松
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期32-35,共4页
目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原...
目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)_(600nm)达到0.6时,加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20％以上。表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85％以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变。结论 融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率。
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关键词
HA20-Iys10
大肠埃希菌
凝胶阻滞试验
融合基因
基因表达
基因纯化
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职称材料
从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段
被引量：
2
2
作者
周颐
王忆平
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期194-198,共5页
获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂...
获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂糖凝胶电泳回收纯化的DNA,经由聚丙烯酰胺凝胶电泳的进一步检测,结果显示,该方法与琼脂糖凝胶电泳回收法相比,所获得DNA的纯度高,特异性好,且效率相当。在提高DNA特异性的同时也兼具了经济高效耗时少等优点,可以广泛应用。
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关键词
非变性聚丙烯酰胺
凝
胶
琼脂糖
凝
胶
小片段DNA回收纯化
凝胶阻滞试验
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职称材料
N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析
被引量：
2
3
作者
刘天婵
余应年
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第11期1953-1960,共8页
目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的...
目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位 ,在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果 :预测出 11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位 ,其中除已知转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP1)在MNNG处理后被激活外 ,用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有 2个转录因子—核因子Y(nuclearfactor,NFY)和GATA结合因子 (GATAbindingfactor,GATA)的活性升高。结论 :进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。
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关键词
进化足迹法
转录因子结合部位
凝胶阻滞试验
甲基硝基亚硝基胍
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职称材料
题名
HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
1
作者
孙兴会
张宇清
王霞
侯敏
谭理
李平
朱运松
机构
复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期32-35,共4页
基金
国家自然科学基金(30170398)
文摘
目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)_(600nm)达到0.6时,加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20％以上。表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85％以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变。结论 融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率。
关键词
HA20-Iys10
大肠埃希菌
凝胶阻滞试验
融合基因
基因表达
基因纯化
Keywords
hemagglutinin
gel retardation experiment
fused gene
expression and purification
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段
被引量：
2
2
作者
周颐
王忆平
机构
北京大学生命科学学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期194-198,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30830005)
国家杰出青年科学基金项目(39925017)
文摘
获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂糖凝胶电泳回收纯化的DNA,经由聚丙烯酰胺凝胶电泳的进一步检测,结果显示,该方法与琼脂糖凝胶电泳回收法相比,所获得DNA的纯度高,特异性好,且效率相当。在提高DNA特异性的同时也兼具了经济高效耗时少等优点,可以广泛应用。
关键词
非变性聚丙烯酰胺
凝
胶
琼脂糖
凝
胶
小片段DNA回收纯化
凝胶阻滞试验
Keywords
Non-denaturing polyacrylamide gel Agarose gel Small DNA fragment recovery and purification Electrophoretic mobility shift assay
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析
被引量：
2
3
作者
刘天婵
余应年
机构
浙江大学医学院病理生理学教研室
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第11期1953-1960,共8页
基金
国家重点基础研究发展规划项目 (No .2 0 0 2CB5 12 90 1)
国家自然科学基金资助项目 (No.30 170 810 )
文摘
目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位 ,在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果 :预测出 11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位 ,其中除已知转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP1)在MNNG处理后被激活外 ,用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有 2个转录因子—核因子Y(nuclearfactor,NFY)和GATA结合因子 (GATAbindingfactor,GATA)的活性升高。结论 :进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。
关键词
进化足迹法
转录因子结合部位
凝胶阻滞试验
甲基硝基亚硝基胍
Keywords
Phylogenetic footprinting
Transcription factor binding site
Electrophoresis mobility shift assay
N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
孙兴会
张宇清
王霞
侯敏
谭理
李平
朱运松
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段
周颐
王忆平
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析
刘天婵
余应年
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
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