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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验被引量：7: 1; 作者许信刚赵红妮童德文《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期955-962,共8页; 本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏... 展开更多; 关键词减毒鼠伤寒沙门氏菌 PRRSV GP5蛋白活载体疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定被引量：5: 2; 作者田芳华程相朝 +3 位作者张春杰李银聚李静刘一尘《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期59-63,共5页; 试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒... 展开更多; 关键词新城疫 HN基因原核表达载体pYA3493 减毒鼠伤寒沙门氏菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定被引量：2: 3; 作者方希修乐国伟 +2 位作者王冬梅刘建文施用辉《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期98-102,共5页; 采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的... 展开更多; 关键词重组减毒鼠伤寒沙门氏菌电转化乙肝表面抗原 SDS—PAPG 基因序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

携带pEGFPC3的减毒鼠伤寒沙门氏菌在雏鸡体内的表达: 4; 作者方希修王冬梅 +3 位作者杨晓志管军军孙进乐国伟《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期403-407,共5页; 构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达。将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液... 展开更多; 关键词增强型绿色荧光蛋白C3(EGFP—C3) 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌荧光表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究(英文) 被引量：4: 5; 作者迪卡陈雪燕 +2 位作者帅江冰陈宁方维焕《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期237-244,共8页; 本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于... 展开更多; 关键词减毒鼠伤寒沙门氏菌大肠杆菌重组质粒增强型绿色荧光蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验被引量：7: 1; 作者许信刚赵红妮童德文; 机构西北农林科技大学动物医学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期955-962,共8页; 基金西北农林科技大学青年学术骨干项目(E111020901) 陕西省农业科技创新项目(2010NKC-06) 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-07-0701); 文摘本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5)。鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体。本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础。; 关键词减毒鼠伤寒沙门氏菌 PRRSV GP5蛋白活载体疫苗; Keywords attenuated Salmonella typhimurium PRRSV GP5 protein live vector vaccine; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定被引量：5: 2; 作者田芳华程相朝张春杰李银聚李静刘一尘; 机构河南科技大学动物科技学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期59-63,共5页; 基金河南科技大学研究生创新基金(CXJJ-YJS-Z005) 河南省科技公关项目(112102110019); 文摘试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd,通过双酶切和PCR对质粒进行鉴定。结果表明,携带NDV HN基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)构建成功。本研究结果为开发鸡新城疫的口服基因工程活载体疫苗奠定了基础。; 关键词新城疫 HN基因原核表达载体pYA3493 减毒鼠伤寒沙门氏菌; Keywords Newcastle disease HN gene prokaryotic expression vector pYA3493 attenuated Salmonella typhimurium; 分类号 S852.612 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定被引量：2: 3; 作者方希修乐国伟王冬梅刘建文施用辉; 机构江南大学营养与生物技术研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏畜牧兽医职业技术学院营养与饲料研究所; 出处《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期98-102,共5页; 文摘采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的稳定性,该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代。试验结果表明,携带HBsAg的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X8786/pcDNA3s已成功构建,为研究和应用人和动物治疗用乙型肝炎病毒口服基因工程活疫苗奠定了基础。; 关键词重组减毒鼠伤寒沙门氏菌电转化乙肝表面抗原 SDS—PAPG 基因序列分析; Keywords recombinant attenuated salmonella typhimurium electricity transformation method HBsAg SDS-PAPG gene sequence analysis; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名携带pEGFPC3的减毒鼠伤寒沙门氏菌在雏鸡体内的表达: 4; 作者方希修王冬梅杨晓志管军军孙进乐国伟; 机构江苏畜牧兽医职业技术学院河南工业大学生物工程学院江南大学食品学院; 出处《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期403-407,共5页; 基金江苏畜牧兽医学院科技攻关项目(SM06005); 文摘构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达。将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液均呈淡绿色。流式细胞仪结果证实,减毒鼠伤寒沙门菌可以将pEGFP-C3转入脾脏细胞,并在其中表达。在体内稳定试验中,经雏鸡连续传代12次,从肝脏、脾脏中分离的细菌经LB固体培养仍为绿色,证明构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的。用免疫剂量的重组细菌接种雏鸡后,观察1个月未见有异常现象,同时剖检后也未见脏器有眼观病变。免疫一定时间后,在雏鸡肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、十二指肠、肌肉等组织有荧光表达。表达PEGFP-C3的重组鼠伤寒沙门氏菌在鸡体产生荧光表达,为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗研制提供一个优良模型。; 关键词增强型绿色荧光蛋白C3(EGFP—C3) 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌荧光表达; Keywords enhance green fluorescent protein （EGFP-C3）, recombinant attenuated Salmonella typhimurium, fluorescent expression; 分类号 S852.5 [农业科学—基础兽医学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究(英文) 被引量：4: 5; 作者迪卡陈雪燕帅江冰陈宁方维焕; 机构浙江大学动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室; 出处《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期237-244,共8页; 基金 SponsoredbyZhejiangProvicialScienceFoundation(ProjectNo.ZA0105); 文摘本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol?L-1,增加浓度至0.75 mmol?L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol?L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 h.Hela细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究.; 关键词减毒鼠伤寒沙门氏菌大肠杆菌重组质粒增强型绿色荧光蛋白; Keywords attenuated Salmonella typhimurium Escherichia coli recombinant plasmid enhanced green fluorescent protein; 分类号 S852.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验	许信刚赵红妮童德文	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定	田芳华程相朝张春杰李银聚李静刘一尘	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2013	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定	方希修乐国伟王冬梅刘建文施用辉	《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	携带pEGFPC3的减毒鼠伤寒沙门氏菌在雏鸡体内的表达	方希修王冬梅杨晓志管军军孙进乐国伟	《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究(英文)	迪卡陈雪燕帅江冰陈宁方维焕	《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2006	4	在线阅读下载PDF 职称材料