表达肠出血性大肠杆菌O157 O-抗原重组减毒沙门菌的构建及其免疫效果评价

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作者 陈歆丹 张晓荟 +5 位作者 高宇杰 王温馨 葛同鑫 宋厚辉 韩月 程昌勇 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期1261-1269,共9页

为构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157 O-抗原的重组减毒鼠伤寒沙门菌,本研究以EHEC O157基因组为模板,采用PCR分3段扩增O157 O-抗原基因簇(galF~gnd),并采用同源重组技术将EHEC O157 O-抗原基因簇与含asd基因的pSL2161线性化片段重组... 为构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157 O-抗原的重组减毒鼠伤寒沙门菌,本研究以EHEC O157基因组为模板,采用PCR分3段扩增O157 O-抗原基因簇(galF~gnd),并采用同源重组技术将EHEC O157 O-抗原基因簇与含asd基因的pSL2161线性化片段重组,构建表达EHEC O157 O-抗原的重组质粒pSL2161-O157并经PCR与测序鉴定正确后电转化4基因缺失沙门菌ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP,构建表达EHEC O157 O-抗原的重组减毒沙门菌O157-ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP,经PCR及测序鉴定。采用裂解法粗提野生型鼠伤寒沙门菌ATCC14028、EHEC O157与构建的重组减毒沙门菌种中的脂多糖(LPS),采用western blot鉴定上述3种菌中的LPS与EHEC O157 O-因子血清的反应性,并根据该重组菌与野生菌株ATCC14028的OD600nm值测定二者的体外生长能力。PCR与测序鉴定结果显示,重组减毒沙门菌正确构建。Western blot结果显示,重组减毒沙门菌和野生型EHEC O157的粗提LPS均能够与EHEC O157 O-因子血清反应,出现LPS特异性的梯状条带,ATCC14028株与O157 O-因子血清无反应条带。生长曲线结果显示,重组减毒沙门菌与ATCC14028株的生长速度无明显差异。表明EHEC O157 O-抗原基因簇在4基因缺失沙门菌中获得了表达,且该表达与4基因的缺失均不影响沙门菌的体外生长能力。采用首免-加强免疫策略对ICR小鼠分别口服免疫重组减毒沙门菌和4基因缺失沙门菌,二免后13 d采用间接ELISA检测各组小鼠血清中LPS的IgG抗体水平,利用荧光定量PCR(qPCR)检测各组小鼠脾细胞中细胞因子的转录水平。二免后14 d采用10 LD_(50)的EHEC O157攻毒,15 d内观察并记录各组小鼠的临床症状与死亡率,评估该重组菌株对免疫小鼠的保护效果。ELISA与q PCR结果显示,与阴性对照组和4基因缺失沙门菌免疫组相比,重组减毒沙门菌诱导小鼠产生的针对EHEC O157与ATCC14028 LPS的IgG抗体水平均极显著升高(P<0.001、P<0.01);该组小鼠脾细胞中IL-2、IL-4、IL-6和IL-17的转录水平均极显著升高(P<0.001)。攻毒后4基因缺失沙门菌免疫组与阴性对照组小鼠均出现震颤、被毛凌乱等症状,并于攻毒当天即出现小鼠死亡,经统计重组减毒沙门菌、4基因缺失沙门菌对小鼠的免疫保护率分别为65%和30%。上述结果首次证实重组减毒沙门菌O157-ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP能够表达异源EHEC O157 O-抗原,可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答,并对小鼠提供一定的免疫保护力。这为重组减毒沙门菌用于免疫及预防肠出血性大肠杆菌O157的感染及开发大肠杆菌与沙门菌二联疫苗提供了科学参考依据。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 疫苗递呈载体 O-抗原 肠出血性大肠杆菌O157 免疫保护

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减毒沙门菌介导联合基因对腺样囊性癌血管生成的抑制作用 被引量：9

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作者 江中明 吕春堂 +2 位作者 周中华 赵平 高军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期609-612,共4页

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒沙门菌对腺样囊性癌荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的抑制作用。方法:4周龄BALB/cnunu雄鼠25只,随机分成5组,对照组(PBS组)、单纯减毒沙门菌组(SL7207组)、携带人IFN-γ基... 目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒沙门菌对腺样囊性癌荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的抑制作用。方法:4周龄BALB/cnunu雄鼠25只,随机分成5组,对照组(PBS组)、单纯减毒沙门菌组(SL7207组)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCIIFN组)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCITip30组)、携带Tip30与人IFNγ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCITip30/IFN组),均于颌下接种腺样囊性癌(ACC2)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。然后检测肿瘤生长体积、带瘤存活期、裸鼠体内肿瘤的微血管密度(MVD)。结果:各治疗组比较对照组、携带基因治疗组比较SL7207组、联合基因治疗组比较单基因治疗组肿瘤生长慢、体积小,带瘤存活期长(P<0.05);携带Tip30基因治疗组MVD较其他3组低,联合基因组较携带Tip30单基因组MVD低(P<0.05)。结论:减毒沙门菌载体分别介导Tip30、IFN-γ基因有抑制肿瘤生长作用,联合基因较单基因治疗效果好,有协同作用。 展开更多

关键词 TIP30 干扰素Γ 减毒沙门菌 基因疗法 腺样囊性癌

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减毒沙门菌运送的H9N2亚型禽流感病毒DNA疫苗的研制及其免疫试验 被引量：5

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作者 刘丽平 焦新安 +1 位作者 张小荣 潘志明 《动物医学进展》 CSCD 2007年第9期1-6,共6页

根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株的HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达质粒pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA。... 根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株的HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达质粒pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA。将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207和X4550,得到两种运送DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA)。以5×109cfu/只的剂量两次口服接种1日龄的商品代伊莎褐蛋鸡,免疫鸡既能检测到HA特异性的血清抗体应答,又能检测到黏膜免疫应答,采用A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株经滴鼻和口服同时攻毒免疫鸡后,这两种疫苗抑制免疫鸡排毒的效果与灭活疫苗有显著差异。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 DNA疫苗 H9N2亚型禽流感病毒 免疫效力

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携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对前列腺癌移植瘤的体内抑制作用 被引量：2

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作者 赵晓晖 芦丽莉 +3 位作者 葛贺 李冰 赵雪俭 刘艳波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期961-967,共7页

目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织... 目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织化学染色法、RT-PCR法和TUNEL法检测携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对肿瘤抑制作用的相关机制。结果:与psi-survivin或pGRIM-19单基因治疗对照组比较,携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒减毒沙门菌组肿瘤体积明显缩小,其缩小率分别约为2.36和3.02倍;肿瘤组织内survivin mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),GRIM-19 mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-xL、Stat3、cyclin D1和c-Myc的mRNA表达明显降低(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及Ki67蛋白表达降低而caspase-3 mRNA表达明显上调(P<0.05),同时细胞凋亡明显。结论:携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌明显抑制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤的生长,其发生机制与促进细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。 展开更多

关键词 RNA干扰 存活蛋白 GRIM-19 前列腺肿瘤 减毒沙门菌

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表达NDV HN和IBDV VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌的构建及其生物学特性分析 被引量：1

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作者 贾艳艳 刘莎莎 +9 位作者 丁轲 何雷 余祖华 李静 郁川 廖成水 程相朝 李银聚 殷月兰 张春杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期567-572,共6页

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组... 为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组质粒电转化至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd中,获得表达HN-VP2融合蛋白的减毒重组菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd(pYA-HN-VP2),并分析其生化特性、遗传稳定性和毒力等生物学特性。Westernblot结果显示,重组减毒沙门菌可分泌表达HN-VP2融合蛋白,大小为84ku,且该融合蛋白分别能与相应特异性阳性血清发生反应;生物学特性结果显示,重组菌株失去了利用麦芽糖、山梨醇及乳糖等碳源的能力,其生长速度显著慢于野生菌株SL1344;毒力较野生菌株至少下降5个对数单位,且能够稳定遗传重组质粒pYA-HN-VP2。本研究为鸡新城疫-传染性法氏囊病-沙门菌病的三联口服疫苗研制奠定重要基础。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 传染性法氏囊病 新城疫 构建 生物学特性

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9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达 被引量：1

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作者 何永林 张黎 +3 位作者 朱道银 伊正君 杨春 徐蕾 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期441-444,共4页

目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片... 目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达。结果成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达。结论成功构建含9ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达。 展开更多

关键词 颗粒溶素 真核表达质粒 重组减毒沙门菌

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携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答研究 被引量：1

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作者 熊朝丽 张华 +3 位作者 程振涛 周碧君 王开功 文明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1970-1975,共6页

为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于... 为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7、15、30和45d的山羊消化道特异性SIgA含量中,重组细菌组明显高于弱毒疫苗组(P<0.05),45d时到达最高值(18.172±0.122)μg·L-1;(2)在诱导产生特异性P32抗体上,重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但差异不明显(P>0.05);(3)在特异性淋巴细胞转化效率上,免疫15d前重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但免疫30d后重组细菌组高于弱毒疫苗组,但差异均不显著(P>0.05);(4)在诱导产生特异性细胞因子方面,重组细菌组山羊血清IL-2含量低于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清IL-5含量高于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清TNF-β高于弱毒疫苗组,差异显著(P<0.05),而血清IFN-γ和TNF-α含量与弱毒疫苗组差异不显著(P>0.05)。上述结果表明,构建的携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌能诱导山羊产生较好的免疫应答反应。 展开更多

关键词 重组减毒沙门菌 免疫应答 山羊

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减毒沙门菌携带CWP2-S基因抗贾第虫口服疫苗的免疫原性 被引量：1

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作者 张宏梅 郑文彧 +2 位作者 李瑶 姜晓明 冯宪敏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期28-30,33,I0001,共5页

构建重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S,对其免疫效果进行检测。酶切连接法构建重组质粒p VAX1-CWP2-S,以电击转染的方式转入减毒沙门菌SL7207。体外连续培养检测重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S对质粒p VAX1-CWP2-S的携带稳定性... 构建重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S,对其免疫效果进行检测。酶切连接法构建重组质粒p VAX1-CWP2-S,以电击转染的方式转入减毒沙门菌SL7207。体外连续培养检测重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S对质粒p VAX1-CWP2-S的携带稳定性;以重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1作为对照,经口服喂饲的方式免疫清洁级雌性BALB/c小鼠,8周后处死,检测各组试验鼠血清中和小肠灌洗液中特异性Ig G和SIg A的水平。结果是重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S连续培养168 h后,质粒携带率为90%;口服免疫小鼠8周后,与对照组相比,重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S免疫组血清特异性Ig G抗体增高约4.4倍,小肠灌洗液中特异性SIg A抗体增高约6.67倍。表明重组CWP2-S减毒沙门菌株具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 囊壁蛋白 减毒沙门菌 口服疫苗

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减毒沙门菌介导的TRAIL和VP3对胃癌细胞的生长抑制作用及其机制

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作者 曹红丹 吕琳 +3 位作者 向廷秀 刘少宁 王丽娟 王丕龙 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1284-1288,共5页

目的:利用沙门菌作为真核质粒携带载体,在体内外观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和鸡贫血病毒VP3基因对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:将重组质粒pBud-TRAIL、pBud-VP3、pBud-TRAIL-VP3电转化减毒沙门菌SL7207,经稳定性鉴定后... 目的:利用沙门菌作为真核质粒携带载体,在体内外观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和鸡贫血病毒VP3基因对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:将重组质粒pBud-TRAIL、pBud-VP3、pBud-TRAIL-VP3电转化减毒沙门菌SL7207,经稳定性鉴定后直接转染胃癌细胞株SGC-7901,24h后利用荧光显微镜观察有无融合绿色荧光蛋白表达,MTT法检测表达载体对胃癌细胞的生长作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期变化,并用免疫组织化学方法检测该载体对胃癌细胞Caspase-3、Caspase-9表达的影响。荷瘤小鼠口服携带重组质粒的减毒沙门菌,8周后通过RT-PCR检测肿瘤组织内真核载体的表达状况,并测量荷瘤瘤体大小。结果:重组质粒能够在减毒沙门菌中稳定存在,经减毒沙门菌介导转染胃癌细胞后能够较好的表达,转染48h后可见到TRAIL和VP3对胃癌细胞生长有抑制作用,流式细胞仪观察到pBud-TRAIL-VP3能使胃癌细胞的凋亡率明显增高,TRAIL和VP3能够协同促进胃癌细胞Caspase-3、Caspase-9的表达。体内实验提示pBud-TRAIL-VP3沙门菌载体能够在肿瘤组织中表达并能抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论:减毒沙门菌将外源基因VP3和TRAIL基因导入胃癌细胞后,体内外实验证实该载体对胃癌细胞的生长起明显抑制作用,TRAIL和VP3联合作用机制与促进Caspase-3、Caspase-9的表达有关。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 细胞凋亡 TRAIL基因 VP3基因

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GLP-1重组减毒沙门菌对2型糖尿病小鼠的血糖调控作用 被引量：2

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作者 田丽芳 刘尚全 +4 位作者 李卫东 田晓丽 陈蕾 任斌 袁媛 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第5期639-644,共6页

目的观察重组减毒沙门菌作为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的基因载体,对2型糖尿病小鼠的血糖调控作用。方法高脂饲料饲喂4周后予以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建KM种小鼠2型糖尿病模型,小鼠分为4组,每组10只,即:正常组、模型组、空载组及治疗... 目的观察重组减毒沙门菌作为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的基因载体,对2型糖尿病小鼠的血糖调控作用。方法高脂饲料饲喂4周后予以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建KM种小鼠2型糖尿病模型,小鼠分为4组,每组10只,即:正常组、模型组、空载组及治疗组,分别予以:5%NaHCO_3、5%NaHCO_3、同等剂量的空载减毒沙门菌及GLP-1重组减毒沙门菌灌胃治疗,观察并记录治疗前后第0、7、14、21、28天的空腹血糖值及进食量、饮水量、体重变化,分别于治疗后第14天及第28天行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)。取小鼠胰腺组织,采用HE染色法观察各组小鼠的胰腺组织形态学变化。结果 GLP-1重组减毒沙门菌灌胃治疗后,模型组小鼠空腹血糖水平较正常组升高,差异有统计学意义(P<0.01),空载组空腹血糖与模型组比较,差异无统计学意义,治疗组空腹血糖与空载组比较降低,差异有统计学意义(P<0.01),糖尿病小鼠体重变化有明显改善(P<0.01),多饮多食症状好转;第14天及第28天OGTT示:空载组血糖与模型组比较,差异无统计学意义,治疗组血糖较空载组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。胰腺HE染色结果示,空载组与模型组比较,无明显变化,治疗组与空载组比较有明显改善。结论 GLP-1重组减毒沙门菌能够改善2型糖尿病小鼠多饮、多食、体重下降等症状,降低血糖,改善胰岛形态学变化,对2型糖尿病小鼠具有一定的治疗作用。 展开更多

关键词 GLP-1 减毒沙门菌 2型糖尿病 链脲佐菌素

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携带Lipocalin 2基因重组减毒沙门菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究 被引量：1

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作者 唐弘 王瑜伟 +8 位作者 何永林 卢楠 徐蕾 庄稀尧 李智颖 杨婕 陈俊伊 熊雨涵 杨春 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期239-244,共6页

目的:探讨携带脂质运载蛋白2(lipocalin 2,Lcn2)的减毒沙门菌对分枝杆菌生长的影响。方法:以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为c DNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒pBudCE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒pBudCE4.1-or... 目的:探讨携带脂质运载蛋白2(lipocalin 2,Lcn2)的减毒沙门菌对分枝杆菌生长的影响。方法:以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为c DNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒pBudCE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒pBudCE4.1-orim-Lcn2;将重组质粒转染RAW264.7细胞,用RT-qPCR法检测Lcn2的mRNA相对表达量,并以空白载体为对照组;将重组质粒转入减毒沙门菌SL7207得到重组菌株SL7207-pBudCE4.1-orim-Lcn2;重组菌感染RAW264.7细胞,Western blot检测Lcn2的蛋白表达,RT-qPCR法检测Lcn2的mRNA的相对表达量,并以空载菌组为对照;7H10平板上通过菌落计数观察重组菌对感染RAW264.7细胞的卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG)生存的影响,以空载菌组为对照。用重组菌灌胃小鼠,检测脾组织Lcn2和血清IFN-γ水平,以空载菌和生理盐水为对照组。结果:PCR扩增出Lcn2基因;重组质粒经双酶切及基因测序鉴定正确。重组菌感染RAW264.7细胞Lcn2的蛋白表达量较对照组增加(P=0.000)。RT-qPCR法检测重组菌、重组质粒Lcn2 mRNA表达较对照组明显升高(P=0.000,F=5.281;P=0.000,F=22570)。7H10平板上重组菌组BCG数量与空载菌组相比明显减少(P=0.000,F=11.41)。重组菌组与空载对照菌组相比小鼠脾组织Lcn2表达升高(P=0.000,F=4.449),重组菌组与生理盐水组血清IFN-γ升高(P=0.004,F=15.27)。结论:成功构建了携带Lcn2基因的重组减毒沙门菌。重组菌感染RAW264.7细胞后Lcn2的表达增加,对感染RAW264.7的BCG存活起到一定的抑制作用。重组菌灌胃后小鼠脾组织Lcn2表达增加,血清IFN-γ含量增加,小鼠免疫状态有利于结核病转归。该研究为进一步研究脂质运载蛋白和结核分枝杆菌感染的关系及分子机制打下基础。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 Lcn2基因 分枝杆菌 RAW264.7细胞

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减毒沙门菌在禽用疫苗应用中的研究进展 被引量：4

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作者 张丽君 罗开健 《动物医学进展》 CSCD 2007年第8期73-76,共4页

减毒沙门菌感染宿主细胞后,可诱导机体产生强烈的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫反应,不仅可以用作疫苗,而且也是理想的疫苗载体。文章对禽用疫苗中的减毒沙门菌活疫苗、减毒沙门菌携带的重组疫苗和DNA疫苗的研究进行了综述,以期为新型... 减毒沙门菌感染宿主细胞后,可诱导机体产生强烈的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫反应,不仅可以用作疫苗,而且也是理想的疫苗载体。文章对禽用疫苗中的减毒沙门菌活疫苗、减毒沙门菌携带的重组疫苗和DNA疫苗的研究进行了综述,以期为新型禽用疫苗的研究提供参考。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 活疫苗 重组疫苗 DNA疫苗

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利用减毒沙门菌递送的柯萨奇病毒A16型VP1基因重组质粒的构建和鉴定 被引量：5

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作者 刘泽 白冰珂 +4 位作者 高蓉 蔡少平 胡燕 沈宏辉 貌盼勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期501-503,共3页

目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗。方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋白表... 目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗。方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋白表达情况及抗原活性,并将该质粒通过电转化构建重组减毒伤寒沙门菌。结果:构建了表达CoxA16 VP1蛋白的重组质粒,转染vero细胞后检测到CoxA16 VP1蛋白的表达并具有抗原活性;获得能稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌。结论:成功构建稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌,为口服CoxA16疫苗的研究打下了基础。 展开更多

关键词 柯萨奇病毒A16型 口服DNA疫苗 减毒伤寒沙门菌

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应用减毒沙门菌载体递呈多糖抗原的研究进展 被引量：1

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作者 卞晓萍 刘青 孔庆科 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期977-981,共5页

近年来,应用减毒沙门菌载体递呈异源抗原开发口服活疫苗受到广泛的重视。沙门菌作为活的疫苗载体,其优点有:(1)沙门菌疫苗通过常规的细菌培养方法即可大量获得,而且可以通过食物或饮水口服给药,是大规模养殖场接种疫苗的经济、方便选择;... 近年来,应用减毒沙门菌载体递呈异源抗原开发口服活疫苗受到广泛的重视。沙门菌作为活的疫苗载体,其优点有:(1)沙门菌疫苗通过常规的细菌培养方法即可大量获得,而且可以通过食物或饮水口服给药,是大规模养殖场接种疫苗的经济、方便选择;(2)经口服接种的减毒沙门菌能够通过粘膜途径感染宿主,诱发特异性粘膜、体液和细胞免疫应答[1];(3)沙门菌可以在活细胞中生物合成多糖,并且这些多糖可以连接至类脂A(Lipid A)的核心寡糖部分,从而诱导针对异源多糖抗原的系统性免疫应答[2-3]。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 疫苗载体 免疫应答 口服给药 多糖抗原 接种疫苗 递呈 感染宿主

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表达幽门螺杆菌NAP基因的减毒沙门菌疫苗株的建立

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作者 焦志勇 陈旻湖 +3 位作者 朱森林 李国庆 陈洁 胡品津 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期335-337,共3页

目的 :建立表达幽门螺杆菌 (H .pylori)中性粒细胞活化蛋白(Hp NAP)的减毒沙门菌疫苗株。方法 :用PCR扩增Hp NAP基因 ,并克隆至原核表达质粒 pTrc99A中 ,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列 ,并与GenBank中相关序列的同源性进行比较。以... 目的 :建立表达幽门螺杆菌 (H .pylori)中性粒细胞活化蛋白(Hp NAP)的减毒沙门菌疫苗株。方法 :用PCR扩增Hp NAP基因 ,并克隆至原核表达质粒 pTrc99A中 ,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列 ,并与GenBank中相关序列的同源性进行比较。以重组质粒 pTrc99A NAP转化减毒伤寒沙门菌SL32 6 1,培养后筛选阳性菌落 ,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定。表达的Hp NAP蛋白用SDS PAGE进行鉴定 ,用薄层扫描分析蛋白含量。结果 :核苷酸序列测定及同源性分析证实 ,克隆的Hp NAP基因与GenBank中相关序列的同源性为98% (397/40 2 ) ,氨基酸序列的同源性为 98% (131/133)。以重组质粒pTrc99A NAP转化的减毒沙门菌 ,可表达Mr 约15 0 0 0的Hp NAP蛋白 ,表达量约占菌体蛋白量的 37.5 %。结论 :建立了可表达Hp NAP基因的减毒鼠伤寒沙门疫苗株 ,为进一步研制Hp口服疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 Hp-NAP基因 减毒鼠伤寒沙门菌 疫苗

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减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及机制研究

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作者 赖运浩 谭绮婷 +7 位作者 黄庭祺 刘石 彭月荣 李芳红 赵正刚 周素瑾 麦家洛 赵子建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1867-1873,共7页

目的探讨高表达甲硫氨酸酶减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及其机制研究。方法通过甲硫氨酸限制培养,检测对人鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2细胞增殖、迁移能力、克隆形成率以及细胞周期凋亡的影响;将SGN1与鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CN... 目的探讨高表达甲硫氨酸酶减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及其机制研究。方法通过甲硫氨酸限制培养,检测对人鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2细胞增殖、迁移能力、克隆形成率以及细胞周期凋亡的影响;将SGN1与鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2共培养,观察其增殖情况;构建5-8F人鼻咽癌细胞系皮下移植瘤模型,观察SGN1对体内鼻咽癌移植瘤的抑制作用;结果甲硫氨酸限制显著抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移能力、单克隆形成以及阻滞细胞周期G 2/M期并诱导细胞发生凋亡。SGN1能抑制鼻咽癌细胞的增殖并诱导凋亡,体内实验结果表明SGN1治疗后,小鼠皮下移植瘤生长受到抑制(P<0.05)。结论SGN1可促进鼻咽癌细胞发生凋亡且抑制肿瘤细胞迁移,为临床治疗提供一个新的治疗策略。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 甲硫氨酸酶 SGN1 鼻咽癌 凋亡 细胞周期

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减毒沙门菌治疗肿瘤:升级与希望

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作者 郭艳霞 郑金海 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期519-526,共8页

减毒沙门菌对实体瘤具有广谱的肿瘤靶向特异性,其可通过激活机体抗肿瘤免疫应答改善肿瘤免疫微环境,从而抑制肿瘤的发展;高度的肿瘤靶向特异性使得减毒沙门菌可作为理想的抗癌药物与影像探针的表达和递送载体,实现肿瘤诊疗一体化。减毒... 减毒沙门菌对实体瘤具有广谱的肿瘤靶向特异性,其可通过激活机体抗肿瘤免疫应答改善肿瘤免疫微环境,从而抑制肿瘤的发展;高度的肿瘤靶向特异性使得减毒沙门菌可作为理想的抗癌药物与影像探针的表达和递送载体,实现肿瘤诊疗一体化。减毒沙门菌在基础或临床领域已有着广泛的研究与应用,展现了良好的应用前景,未来可期。对减毒沙门菌的抗肿瘤机制、应用现状及目前所存在的问题展开分析,探讨如何通过遗传工程技术对减毒菌的安全性、靶向性和抗癌效果等方面进行提升,将促进减毒沙门菌的转化应用,实现免疫学、生物技术等多学科的交叉融合,有望为临床肿瘤生物治疗提供新的研究方向。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 遗传工程改造 肿瘤免疫治疗 肿瘤微环境 联合治疗

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重组减毒沙门菌在雏鸡体内的感染状况研究

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作者 张锋 《现代畜牧兽医》 2020年第2期37-40,共4页

为了检测能够表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组沙门菌在雏鸡体内主要组织和器官的感染情况,分别用亲本菌株和重组沙门菌免疫雏鸡,免疫后24~216 h每隔24 h对雏鸡的盲肠、血液、肝脏、脾脏、法氏囊中的细菌数量进行分析。结果显示:雏鸡... 为了检测能够表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组沙门菌在雏鸡体内主要组织和器官的感染情况,分别用亲本菌株和重组沙门菌免疫雏鸡,免疫后24~216 h每隔24 h对雏鸡的盲肠、血液、肝脏、脾脏、法氏囊中的细菌数量进行分析。结果显示:雏鸡接种重组减毒沙门菌后,其在血液中的数量不断升高并在96 h达到峰值,在脾脏中的数量不断升高并在120 h左右达到峰值,在肝脏、法氏囊中的数量不断升高并在168 h达到峰值,在盲肠中,细菌数量在不断升高并在72 h达到峰值;达到峰值后细菌数量逐渐下降。亲本菌株和重组菌株在相应组织器官中的数量变化趋势一致,但是亲本菌株的数量始终高于重组菌株。结果表明:重组菌株能在雏鸡体内生长定植,能为诱导雏鸡机体产生保护性免疫应答奠定重要基础,有望作为预防传染性法氏囊病毒的口服疫苗。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 IBDV VP2蛋白 雏鸡 感染状况

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减毒沙门菌作为疫苗活载体的研究进展

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作者 杨亚 崔淹鸽 +1 位作者 陈慧敏 郑培森 《河南畜牧兽医（综合版）》 2018年第1期9-11,共3页

沙门菌是一种常见的病原菌，在医学、兽医学和公共卫生学上均具有重要的意义，其是一种胞内侵袭性细菌，能够逃避巨噬细胞的先天性免疫而在胞内存活，研究发现其能够有效递呈外源抗原到黏膜表面，发挥疫苗活载体的作用，重组减毒的沙门... 沙门菌是一种常见的病原菌，在医学、兽医学和公共卫生学上均具有重要的意义，其是一种胞内侵袭性细菌，能够逃避巨噬细胞的先天性免疫而在胞内存活，研究发现其能够有效递呈外源抗原到黏膜表面，发挥疫苗活载体的作用，重组减毒的沙门菌能够在淋巴组织内黏附、侵入和增殖，刺激机体的黏膜免疫，进而激活机体的免疫调节功能，引发全身性的免疫应答。在抗病毒、寄生虫、肿瘤等方面均取得了较为可观的前景，近些年随着一些新方法和新技术的诞生，针对减毒沙门菌作为疫苗载体递呈外源抗原的研究越来越引起人们的关注。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 疫苗活载体 免疫应答 外源抗原

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减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展 被引量：4

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作者 杨冬梅 王鹏雁 +1 位作者 王远志 陈创夫 《动物医学进展》 CSCD 2007年第4期85-88,共4页

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以... 活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 活载体疫苗 重组减毒沙门菌 基因减毒

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