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第46代鸡贫血病病毒细胞凋亡素基因的体外扩增、克隆、序列比较 被引量：5
1
作者 刘岳龙 崔治中 +3 位作者 秦爱建 叶建强 段玉友 金文杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期337-341,共5页
通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增了第 46代鸡贫血病病毒 (CAV)Cux株的细胞凋亡素 (Apoptin)基因 ,并克隆入pGEX_5X_3质粒载体中。通过限制性内切酶分析、序列测定 ,验证了克隆的正确性。细胞凋亡素基因全长为 36 3bp ,编码 12 1个氨基酸。... 通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增了第 46代鸡贫血病病毒 (CAV)Cux株的细胞凋亡素 (Apoptin)基因 ,并克隆入pGEX_5X_3质粒载体中。通过限制性内切酶分析、序列测定 ,验证了克隆的正确性。细胞凋亡素基因全长为 36 3bp ,编码 12 1个氨基酸。与Meehan .等发表的CAVCux株序列相比 ,第 46代细胞适应毒的细胞凋亡素基因的第 2 0 9个核苷酸由CT ,与澳大利亚株、美国株CAV序列分别有 5个和 2个碱基的差别 ,并且均匀分布在 5’端前 2 10碱基区 ,而在 3’端序列较为保守。与同处欧洲的英国株CAV序列相比 ,序列较为一致。本研究对所克隆的调亡素编码蛋白进行了疏水性分析和抗原表位优势分析。 展开更多
关键词 鸡盆血病病毒 凋亡素基因 PCR 基因克隆 序列比较
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鸡传染性贫血病毒分离株凋亡素基因的克隆及序列测定 被引量：1
2
作者 韦莉 杨兵 +3 位作者 周文平 韩苏平 沈冰 刘爵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第11期3-5,共3页
使用 PCR技术扩增出鸡传染性贫血病毒分离株 SR43 的凋亡素基因 ,大小为 40 0 bp左右 ,将该片断克隆到 p Bluescript- ks载体中 ,获得含分离株 SR43 凋亡素基因的重组质粒。序列分析表明 ,该分离株凋亡素基因全长36 3bp,编码 12 1个氨基... 使用 PCR技术扩增出鸡传染性贫血病毒分离株 SR43 的凋亡素基因 ,大小为 40 0 bp左右 ,将该片断克隆到 p Bluescript- ks载体中 ,获得含分离株 SR43 凋亡素基因的重组质粒。序列分析表明 ,该分离株凋亡素基因全长36 3bp,编码 12 1个氨基酸 ,与德国标准株 Cux- 1具有高度的同源性 ,仅有 1个氨基酸的差异 ,发生在 116位 ,该分离株为 R(精氨酸 ) ,而 Cux- 1为 k(赖氨酸 ) ,认为 展开更多
关键词 鸡 传染性血病毒 凋亡素基因 克隆 序列测定
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腺病毒介导凋亡素基因对裸鼠种植性人胆管癌的治疗研究 被引量：1
3
作者 陈健 李大江 王曙光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1036-1038,共3页
目的探讨腺病毒介导凋亡素基因对裸鼠种植性人胆管癌的治疗。方法建立裸鼠皮下种植性人胆管癌模型,观察肿瘤内注射含凋亡素基因的重组腺病毒后种植瘤的体积变化、毒副作用和组织学变化,同时计算抑瘤率。结果在治疗12d后含凋亡素基因的... 目的探讨腺病毒介导凋亡素基因对裸鼠种植性人胆管癌的治疗。方法建立裸鼠皮下种植性人胆管癌模型,观察肿瘤内注射含凋亡素基因的重组腺病毒后种植瘤的体积变化、毒副作用和组织学变化,同时计算抑瘤率。结果在治疗12d后含凋亡素基因的腺病毒治疗组的种植瘤体积为(92.31±28.31)mm,较空病毒组(288.86±113.13)mm和生理盐水组(344.86±113.87)mm相比具有显著差别(P<0.01)。同时抑瘤率达到72.10%,明显高于空病毒治疗组11.9%(P<0.01)。在治疗期间没有观察到毒副作用。组织学结果也提示凋亡素基因是通过引发胆管癌细胞的凋亡来抑制肿瘤生长的。结论含凋亡素基因的重组腺病毒对胆管癌具有治疗作用。 展开更多
关键词 凋亡素基因 腺病毒载体 基因治疗 人胆管癌
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携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用 被引量：8
4
作者 尹逊哲 陈爽 +12 位作者 李文杰 朱羿龙 李一权 崔传信 李敏 崔英丽 赵津 李善智 郑颖 孙丽丽 李霄 郭焱 金宁一 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1356-1361,共6页
目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的... 目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting法检测ATV感染对HeLa细胞自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV感染对HeLa细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P<0.01)。ATV感染48 h,ATV组HeLa细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)%vs(14.680±1.174)%,P<0.01]。感染后的HeLa细胞,随着ATV作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组[(58.490±2.447)%vs(43.235±4.419)%,P<0.05]。与对照组相比,ATV感染HeLa后,LC3表达量6、12 h逐渐增高,12 h达到最大值(P<0.01),24 h表达量最低(P<0.01);P62蛋白在24 h出现最高表达水平(P<0.01);而mTOR随着作用时间延长逐渐降低(48 h时,P<0.01)。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h自噬小体数量显著增多[(28.000±2.828)vs(8.500±2.121),(37.000±4.243)vs(14.000±1.414);均P<0.01],24 h相对减少[(12.000±2.828)vs(17.000±1.414),P<0.01]。结论:携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。 展开更多
关键词 宫颈癌 HELA细胞 凋亡素基因 溶瘤腺病毒 自噬 凋亡
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腺病毒载体介导凋亡素基因联合阿霉素与顺铂对种植性肝癌的治疗研究 被引量：1
5
作者 刘清 罗永胜 +3 位作者 耿岚 王伟 赖卓胜 李富荣 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期538-540,共3页
目的探讨腺病毒介导凋亡素基因联合阿霉素(ADM)与顺铂(CDDP)对种植性肝癌的治疗。方法建立c57BL/6小鼠皮下荷肝细胞癌模型(n=64),计算成瘤率,观察肿瘤内注射含凋亡素基因的重组腺病毒、ADM及CDDP后种植瘤的体积变化、毒副作用和组织学变... 目的探讨腺病毒介导凋亡素基因联合阿霉素(ADM)与顺铂(CDDP)对种植性肝癌的治疗。方法建立c57BL/6小鼠皮下荷肝细胞癌模型(n=64),计算成瘤率,观察肿瘤内注射含凋亡素基因的重组腺病毒、ADM及CDDP后种植瘤的体积变化、毒副作用和组织学变化,同时计算抑瘤率。结果在治疗7d后腺病毒AdAFPvp3联合ADM与CDDP治疗组的种植瘤体积、重量均显著低于对照组,比较差异均具有统计学意义,在治疗期间没有观察到毒副作用。结论携带凋亡素基因的重组腺病毒联合ADM与CDDP对肝细胞癌具有治疗作用。 展开更多
关键词 凋亡素基因 腺病毒载体 ADM CDDP 肝细胞癌
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超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺介导凋亡素基因诱导肝癌细胞凋亡的研究
6
作者 张园 朱惠明 +3 位作者 李银鹏 王娜 姜岭梅 黄庆娟 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第3期351-354,共4页
目的:探讨超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因(VP3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:体外培养HepG2细胞,随机分为4组:(1)对照组;(2)PEI-Gal组;(3)PEI-... 目的:探讨超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因(VP3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:体外培养HepG2细胞,随机分为4组:(1)对照组;(2)PEI-Gal组;(3)PEI-Gal+超声组;(4)PEI-Gal+超声+微泡组。转染24h后荧光显微镜观察pEGFP-VP3在HepG2细胞中的表达,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot分别检测VP3 mRNA和蛋白表达水平,AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率。结果:流式细胞仪、RT-PCR和Western blot分析表明,PEI-Gal+超声+微泡组的转染效率为(28.83±2.07)%、VP3 mRNA水平为0.92±0.02,蛋白水平为1.65±0.06,HepG2凋亡率为(37.40±2.12)%,均显著高于其他各组(均P<0.01)。结论:UTMD联合PEI-Gal可明显提高VP3基因转染HepG2细胞的效率及在HepG2细胞内的表达,增加HepG2细胞的凋亡率。 展开更多
关键词 肝肿瘤 超声学 超声靶向微泡破碎 半乳糖聚乙烯亚胺 凋亡素基因 凋亡
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鸡贫血病毒VP3基因对荷C6胶质瘤Weister大鼠的治疗 被引量：1
7
作者 邱吉庆 金宁一 +5 位作者 连海 罗毅男 郭云宝 米志强 李宵 孙迎春 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第2期25-27,共3页
构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明，pVVP3治疗组肿瘤... 构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明，pVVP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制，其抑瘤率达85．57％。病理组织学观察可见化疗对照组肝组织有点状坏死，而pVVP3治疗组肝组织未见明显病变。肿瘤组织超微结构观察在pVVP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗对Weister大鼠C6胶质瘤生长有抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡，且对肝组织无明显损伤。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 凋亡素基因 治疗 VP3基因 凋亡素 神经胶质瘤
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抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析 被引量：6
8
作者 李霄 金宁一 +6 位作者 李昌 田明尧 陈漉 贾鹏 刘立明 刘妍 高鹏 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期682-686,共5页
结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain F... 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂. 展开更多
关键词 癌胚抗原 二硫键稳定性单链抗体 凋亡素基因 原核表达
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携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用 被引量：3
9
作者 陈智飞 李一权 +5 位作者 胡宁宁 兰添 周晔 李霄 孙丽丽 金宁一 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期16-21,共6页
目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-m... 目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 凋亡素基因 进行性增量基因3 结直肠癌 SW1116细胞 GES细胞
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pIRApoptinHNIL18对结肠癌细胞HCT-116的抑制效应
10
作者 郑洪玲 金宁一 +6 位作者 李霄 米志强 连海 李昌 田明尧 李雪梅 孙丽丽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期42-46,共5页
目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHN... 目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHNIL18通过脂质体介导法体外转染人结肠癌细胞HCT-116,通过Western blotting和RT-PCR检测外源基因表达;采用AO/EB染色法检测pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用;利用流式细胞术分析pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψ)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用3,5-二羟基甲苯法测定唾液酸含量。结果:pIRApoptinHNIL18转染人结肠癌细胞HCT-116后,外源基因能够有效表达;肿瘤细胞生长受到抑制;线粒体△Ψ由(94.41±8.17)%下降到(30.70±8.01)%(P<0.05);唾液酸含量由(0.33±0.06)mmol/L下降到(0.09±0.03)mmol/L(P<0.01);ROS水平由(52.48±6.09)%升高到(68.98±7.26)%(P<0.05)。结论:pIRApoptinHNIL18可通过线粒体途径诱导细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞HCT-116的生长。 展开更多
关键词 凋亡素基因 血凝素-神经氨酸酶基因 人白介素18基因 结肠癌细胞 线粒体 凋亡
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