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保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥保存后回收率的影响 被引量：15
1
作者 权国波 韩颖 +3 位作者 刘秀珍 刘安 靳鹏 曹伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期308-311,共4页
为了研究保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥 (简称冻干 )保存后回收率的影响 ,采用含有 7%二甲亚砜 (v/v)和 2 0 %、30 %、4 0 %或 5 0 %聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) (w/v)的缓冲液作为保护液进行保护液的玻璃化测试和红细胞的冻干保存实验... 为了研究保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥 (简称冻干 )保存后回收率的影响 ,采用含有 7%二甲亚砜 (v/v)和 2 0 %、30 %、4 0 %或 5 0 %聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) (w/v)的缓冲液作为保护液进行保护液的玻璃化测试和红细胞的冻干保存实验。首先检测溶液的玻璃化状态 ,如果冷冻和解冻过程中任一过程出现白色冰晶即为非玻璃化溶液 ;再将浓集红细胞和不同的保护液按比例混匀 ,预冻后移入冻干机内进行冻干处理 ;冻干完毕后 ,快速水化样品 ,测定红细胞回收率、血红蛋白回收率和上清游离血红蛋白浓度 ,然后对冻干后红细胞形态进行电镜观察。结果表明 :2 0 %PVP +7%DMSO和 30 %PVP +7%DMSO在冷冻和解冻过程中都出现白色冰晶 ;4 0 %PVP +7%DMSO在冷冻过程中无冰晶出现 ,但在解冻过程中出现冰晶 ;而 5 0 %PVP +7%DMSO在冷冻和解冻过程中均无冰晶出现。冻干红细胞再水化后 ,4 0 %PVP +7%DMSO的细胞回收率和血红蛋白回收率分别为 (81.36±14 94 ) %和 (77.5 4± 12 .86 ) % ,显著高于其它 3组 (P <0 .0 1) ;另外 4 0 %PVP +7%DMSO的上清游离血红蛋白浓度也显著低于其它 3组 (P <0 .0 1)。研究表明 :随着溶液中PVP浓度的升高 ,溶液的玻璃化程度也随之增加 ,同时冻干 再水化后红细胞的各项指标也随之改善 。 展开更多
关键词 红细胞 玻璃化 脱玻璃化 冷冻干燥保存
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草鱼出血病细胞培养灭活疫苗及病毒株冷冻干燥保存法的研究 被引量：5
2
作者 罗毅志 杨广智 叶雪平 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 1997年第1期11-13,共3页
关键词 草鱼 出血病 疫苗 病毒株 冷冻干燥保存
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预冻温度和冻干机搁板温度对冷冻干燥红细胞的影响 被引量：5
3
作者 权国波 韩颖 +4 位作者 刘秀珍 马恩普 刘安 靳鹏 曹伟军 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期368-371,共4页
为研究预冻温度和冷冻干燥机 (冻干机 )搁板温度对红细胞冻干保存后回收率的影响 ,采用主要成分为7%二甲亚砜和 4 0 %聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)的缓冲液作为保护液 ,在不同预冻温度或搁板温度下进行红细胞的冻干保存。首先将新鲜血液离心、... 为研究预冻温度和冷冻干燥机 (冻干机 )搁板温度对红细胞冻干保存后回收率的影响 ,采用主要成分为7%二甲亚砜和 4 0 %聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)的缓冲液作为保护液 ,在不同预冻温度或搁板温度下进行红细胞的冻干保存。首先将新鲜血液离心、洗涤和平衡以制备浓集红细胞 ,然后将浓集红细胞和保护液按 1∶3混匀制备红细胞悬液 ,在不同温度 (- 2 0 ,- 35 ,- 4 5 ,- 80或 - 196℃ )下预冻后移入冻干机 (搁板温度设为 - 35℃ ,抽真空压力为2 0 0mbar)内进行真空干燥。为研究冻干机搁板温度对冻干红细胞的影响 ,将上述红细胞悬液先在 - 80℃下预冻后移入冻干机 ,在不同的搁板温度 (- 2 0 ,- 2 5 ,- 30 ,- 35 ,- 4 0或 - 4 5℃ )下抽真空干燥 ,冻干结束后用 37℃的再水化液快速水化。结果表明 :在不同预冻温度下 ,冻干后红细胞和血红蛋白的回收率均在 85 %和 75 %以上 ,各组之间差异不显著。但 - 196℃组上清游离血红蛋白浓度显著高于其他各组 (P <0 .0 1) ;当搁板温度等于或高于- 2 5℃时 ,样品无法冻干 ;当搁板温度等于或低于 - 30℃时 ,随着搁板温度的降低 ,冻干时间相应延长。再水化后红细胞和血红蛋白回收率均在 90 %以上 ,各组之间差异不显著 ;但当洗涤至等渗时 ,4组血红蛋白回收率之间差异不显著。结论 展开更多
关键词 红细胞 预冻温度 搁板温度 固化温度 冷冻干燥保存
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预冻技术参数对血小板冻干保存的影响 被引量：3
4
作者 刘瑛 许先国 +2 位作者 洪小珍 朱发明 严力行 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期1201-1206,共6页
本研究采用正交设计方案探讨冻结速率、退火速率、退火温度和退火持续时间4个预冻条件参数对血小板冻干保存的影响。冻干血小板再水化后的数值恢复率、细胞形态和结构、血小板活化和聚集力等指标分别用血细胞计数计、扫描电子显微镜、3... 本研究采用正交设计方案探讨冻结速率、退火速率、退火温度和退火持续时间4个预冻条件参数对血小板冻干保存的影响。冻干血小板再水化后的数值恢复率、细胞形态和结构、血小板活化和聚集力等指标分别用血细胞计数计、扫描电子显微镜、3色流式细胞仪及对凝血酶的聚集反应进行检测并综合评价。结果显示:在不同的预冻条件组合方式下,冻干血小板的数值恢复率在(91.3%-53.5)%范围内;实验各组血小板冻干制品的冰晶大小和形状有所不同;冻干再水化血小板的活化标记物PAC-1和CD62p的表达和分布与新鲜血小板较为接近,其中PAC-1表达率均维持在较低水平(0.03%-0.22%),而各组样本CD62p的表达水平存在差异。实验中根据血小板数值恢复率得到预冻条件的最佳理论组合是A2B1C1D3,即将血小板悬液先以20℃/min的速率冻结至-40℃维持2小时,再以1.5℃/min对搁板升温至-30℃后维持0.5小时,最后进入冻干程序直至结束。结论:冻结速率、退火速率、退火温度和退火持续时间对冻干血小板的数值恢复率均有作用,预冻条件参数的不同组合方式影响血小板冻干保存效果。 展开更多
关键词 血小板 冷冻干燥保存 冻结速率 退火
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海藻糖负载红细胞及其冻干保存研究 被引量：5
5
作者 陈燕 陆志刚 韩颖 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期605-609,共5页
为了研究海藻糖负载红细胞方法的可行性及红细胞内海藻糖对冻干红细胞的影响,利用红细胞膜在37℃时细胞膜上部分脂质由固态变为液态、流动性增大和膜通透性增加的性质,将红细胞置于高浓度海藻糖负载液中孵育7小时,并以磷酸缓冲盐溶液中... 为了研究海藻糖负载红细胞方法的可行性及红细胞内海藻糖对冻干红细胞的影响,利用红细胞膜在37℃时细胞膜上部分脂质由固态变为液态、流动性增大和膜通透性增加的性质,将红细胞置于高浓度海藻糖负载液中孵育7小时,并以磷酸缓冲盐溶液中孵育的红细胞作为对照,对红细胞的海藻糖负载率、形态学、渗透脆性、变形性、ATP含量及2,3-DPG含量进行评价。结果表明:负载后红细胞内海藻糖含量为36.56±7.95mmol/L,实验组红细胞溶血率为(15.663±3.848)%,对照组红细胞溶血率为(5.03±1.85)%,差异显著(P<0.05);实验组红细胞变形指数是0.0289±0.00738,对照组红细胞变形指数是0.1200±0.0121,差异显著(P<0.05);负载后实验组红细胞内ATP含量为2.67±0.54μmol/gHb,对照组红细胞内ATP含量为5.22±1.10μmol/gHb(P>0.05),实验组红细胞渗透脆性降低,明显低于对照组。尽管负载组的红细胞大小不一,形态各异,但在透射电镜下绝大多数红细胞膜完整,胞内血红蛋白密度均匀,而对照组有近一半的细胞膜不完整并有漏孔,胞内血红蛋白密度变浅。实验组与对照组中2,3-DPG含量均为零。实验组红细胞冻干再水化后,血红蛋白回收率46.44±4.14%,对照组血红蛋白回收率8.33±2.34%,差异显著(P<0.001)。结论:海藻糖负载的红细胞功能符合输注标准,负载方法可行,负载入细胞内的海藻糖能够保持细胞膜的完整性,大大提高了冻干红细胞的回收率,为红细胞的冷冻干燥成功迈出了第一步。 展开更多
关键词 海藻糖 红细胞 冷冻干燥保存
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搁板温度对人血小板冻干保存的影响 被引量：2
6
作者 王波 周正 +3 位作者 徐梦洁 许先国 张绍志 陈光明 《上海理工大学学报》 CAS 北大核心 2013年第2期187-192,共6页
一次干燥温度位的高低直接影响一次干燥所需时间.实验研究了干燥箱搁板温度对血小板冷冻干燥保存的影响,检测了冻干血小板复水后的数值恢复率、细胞形态和结构、血小板凋亡和活化等指标,与新鲜组进行了对照分析.结果显示:当搁板温度为-3... 一次干燥温度位的高低直接影响一次干燥所需时间.实验研究了干燥箱搁板温度对血小板冷冻干燥保存的影响,检测了冻干血小板复水后的数值恢复率、细胞形态和结构、血小板凋亡和活化等指标,与新鲜组进行了对照分析.结果显示:当搁板温度为-30℃时,血小板冻干复水后的数值恢复率为(89.0±3.2)%;血小板平均体积(MPV)和分布宽度(PDW)值分别为(12.4±1.5)fL和(18.3±1.5)%,在可以接受的范围之内;未凋亡率为(87.5±2.6)%,非活化率为(80.4±2.6)%. 展开更多
关键词 血小板 冷冻干燥保存 一次干燥 搁板温度 恢复率
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不同冻干保护体系对海藻糖负载红细胞冻干保存影响的研究 被引量：3
7
作者 陈燕 陆志刚 白海 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期775-779,共5页
本研究旨在评价冻干保护剂人血白蛋白、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘油对海藻糖负载后红细胞冰冻干燥保存的影响,筛选最佳冻干保护体系。将浓缩红细胞在37℃,浓度为800 mmol/L的海藻糖溶液中孵育7 h,经PBS液冲洗3遍后制成海藻糖负载的浓... 本研究旨在评价冻干保护剂人血白蛋白、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘油对海藻糖负载后红细胞冰冻干燥保存的影响,筛选最佳冻干保护体系。将浓缩红细胞在37℃,浓度为800 mmol/L的海藻糖溶液中孵育7 h,经PBS液冲洗3遍后制成海藻糖负载的浓缩红细胞。对照组为海藻糖负载红细胞不添加保护剂,直接冻干;实验组将人血白蛋白、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、甘油等组成的冻干保护体系与海藻糖负载浓缩红细胞混合,两组样品在常温下平衡30 min,移入-80℃深低温冰箱,预冻24 h,入冻干机冻干处理24 h。用温度为37℃,6%羟乙基淀粉40注射液快速再水化样品,用氰化血红蛋白试剂盒测定血红蛋白溶血率,计算血红蛋白回收率,同时测定干燥样品含水量。结果表明:当样品含水量在3%-4%时,对照组冻干红细胞血红蛋白回收率为(33.57±2.89)%,白蛋白组血红蛋白回收率为(51.15±1.98)%,差异有显著性意义(P<0.05)。选用不同浓度的葡聚糖为冻干保护剂,血红蛋白回收率较对照组明显降低,随浓度增加,血红蛋白回收率逐渐升高,当浓度为36%时,血红蛋白回收率为(22.15±4.12)%,差异有显著性意义(P<0.05)。不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)组成的冻干保护体系,当浓度小于40%时,血红蛋白回收率明显低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。10%甘油组血红蛋白回收率为(3.93±1.80)%,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:人血白蛋白在海藻糖负载的冻干红细胞中发挥重要保护作用,葡聚糖与浓度小于40%PVP可削弱细胞内海藻糖的保护作用。液态的甘油不宜作为红细胞冰冻干燥保存的保护剂。 展开更多
关键词 红细胞 海藻糖 冷冻干燥保存
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