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冰岛硫化叶菌β-1,4-内切葡聚糖酶的同源表达、纯化与性质
被引量：
3
1
作者
朱泾
赵述淼
+1 位作者
彭楠
梁运祥
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期674-679,共6页
利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转...
利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转化至S.islandicus E233S(△pyrEF△lacS)。重组菌株经D-阿拉伯糖诱导后,细胞破碎上清经镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)柱纯化,得到重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:不带有信号肽的葡聚糖酶(ENG-W)分子质量为41ku,带有信号肽的分子质量(ENG-SP)为43ku;酶学性质分析表明前者没有酶活性,后者酶活力为103.4U/L,最适反应温度为90℃,最适pH为4.0。耐热性试验结果表明:在90℃保温60min后酶活力稳定在最高酶活力的40%以上。金属离子试验结果表明:Mn2+对重组酶促进作用最大,使其酶活力提高了约50%,Ca2+对其抑制作用最强,使其酶活力下降了约50%。
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关键词
冰岛硫化叶菌
Β-1
4-内切葡聚糖酶
同源表达
硫化
叶
菌
表达载体pZC2
重组蛋白
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题名
冰岛硫化叶菌β-1,4-内切葡聚糖酶的同源表达、纯化与性质
被引量：
3
1
作者
朱泾
赵述淼
彭楠
梁运祥
机构
华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期674-679,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31100096
31100050)
文摘
利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转化至S.islandicus E233S(△pyrEF△lacS)。重组菌株经D-阿拉伯糖诱导后,细胞破碎上清经镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)柱纯化,得到重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:不带有信号肽的葡聚糖酶(ENG-W)分子质量为41ku,带有信号肽的分子质量(ENG-SP)为43ku;酶学性质分析表明前者没有酶活性,后者酶活力为103.4U/L,最适反应温度为90℃,最适pH为4.0。耐热性试验结果表明:在90℃保温60min后酶活力稳定在最高酶活力的40%以上。金属离子试验结果表明:Mn2+对重组酶促进作用最大,使其酶活力提高了约50%,Ca2+对其抑制作用最强,使其酶活力下降了约50%。
关键词
冰岛硫化叶菌
Β-1
4-内切葡聚糖酶
同源表达
硫化
叶
菌
表达载体pZC2
重组蛋白
Keywords
Sulfolobus islandicus
endo-β-1
4-glucanase
homogeneous expression
Sulfolobus expression vector pZC2
recombinant protein
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
冰岛硫化叶菌β-1,4-内切葡聚糖酶的同源表达、纯化与性质
朱泾
赵述淼
彭楠
梁运祥
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
3
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