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农杆菌介导东方百合“西伯利亚”遗传转化体系建立 被引量：7
1
作者 徐品三 刘岚 夏秀英 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期641-645,共5页
以东方百合“西伯利亚”（Lilium seberia）为材料，建立了百合再生和农杆菌介导的遗传转化体系．采用LBA4404和GV3i01菌株对鳞片来源的愈伤组织进行侵染，并以鳞片作为对比转化材料，两种菌株携带有相同的双元载体pCAMBIA1301．研究结... 以东方百合“西伯利亚”（Lilium seberia）为材料，建立了百合再生和农杆菌介导的遗传转化体系．采用LBA4404和GV3i01菌株对鳞片来源的愈伤组织进行侵染，并以鳞片作为对比转化材料，两种菌株携带有相同的双元载体pCAMBIA1301．研究结果表明，农杆菌侵染愈伤组织外植体转化率较高；乙酰丁香酮（AS）的添加能大大提高根癌农杆菌转化百合的效率．另外，共培养时间、不同菌株均对转化效率有一定的影响．筛选后获得的抗性植株经PCR检测和GUS组织化学染色证实外源基因已经整合到基因组DNA中并获得表达，转化率为5％～8％． 展开更多
关键词 百合 农杆菌介导遗传转化 乙酰丁香酮
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农杆菌介导的黄瓜炭疽菌遗传转化 被引量：17
2
作者 方丽 刘海青 +1 位作者 宋凤鸣 郑重 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期360-366,共7页
建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌（Colletotrichum lagenarium）获得T-DNA插入突变体体系，包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等、所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选... 建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌（Colletotrichum lagenarium）获得T-DNA插入突变体体系，包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等、所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选择标记外还携带有融合GFP—GUS报告基因．转化10。个孢子平均可获得约150～200个潮霉素抗性转化子．PCR检测表明，所有潮霉素抗性转化子菌株都能从其基因组DNA中扩增到转化载体中的GUS基因片段，而且都能产生GFP荧光或GUS染色阳性、转化子菌株经过连续继代培养后保持稳定．随机对36个转化子菌株进行致病性测定，发现1个转化子菌株对黄瓜致病性下降，1个丧失致病性，而大多数表现为野生型致病性．农杆菌介导转化瓜类炭疽菌体系的建立，为进一步构建大库容量的T—DNA插入突变体库、致病性突变体筛选以及致病性相关基因的克隆鉴定奠定了基础． 展开更多
关键词 黄瓜炭疽病菌 农杆菌介导的遗传转化 T-DNA插入突变
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农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系 被引量：12
3
作者 刘闵豪 徐郡儡 +3 位作者 叶靖 李周岐 范睿深 李龙 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期79-88,共10页
【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可... 【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可能,为杜仲基因功能的研究与定向改良奠定基础。【方法】以杜仲成年植株叶片为材料诱导愈伤组织,通过添加不同浓度植物生长调节剂与大量元素的MS培养基进行不定芽的诱导与增殖,确定最适培养基。在此基础上,在培养基中添加不同浓度抗生素及抑菌剂,研究愈伤组织对其敏感性。以获得的叶片愈伤组织受体系统为基础,通过L16(45)的正交试验,探索不同转化因子对农杆菌介导叶片愈伤组织遗传转化的瞬时转化效率的影响,建立最适瞬时转化体系。使用获得的瞬时转化体系对愈伤组织进行遗传转化操作,筛选抗性芽,对抗性芽进行GUS组织化学染色与PCR检验。【结果】再生体系优化的结果表明,3/4大量元素浓度的MS培养基能够促进杜仲愈伤组织不定芽的诱导及生长;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0.27μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,诱导率为83%±10.0%;不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,平均伸长长度为(2.47±1.33)cm。抗生素与抑菌剂敏感性试验表明,遗传转化的选择培养基中,抑菌剂头孢霉素的最适浓度为200 mg·L^-1,筛选用的抗生素卡那霉素最适浓度为70 mg·L^-1。转化因子的正交试验表明,最适的农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的转化因子组合为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天。使用最适瞬时转化体系对约200个愈伤组织进行遗传转化操作,共筛选获得3个抗卡那霉素的抗性芽;GUS组织化学染色显示GUS基因在抗性芽中得到了表达,PCR检测证明这些抗性芽中存在NPTⅡ基因。【结论】杜仲叶片愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0.27μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA。农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织瞬时转化体系为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天,筛选培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA+200 mg·L^-1 Cef+70 mg·L^-1 Km。利用此体系共获得3个抗性芽,PCR分析和GUS组织化学染色都表明T-DNA已整合到抗性芽基因组中。 展开更多
关键词 杜仲 农杆菌介导遗传转化 再生体系 GUS瞬时表达
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农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系 被引量：1
4
作者 周佳君 胡恒康 +5 位作者 龚丽 干安格 喻卫武 吴家胜 黄坚钦 张启香 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期13-21,共9页
【目的】以香榧Torreya grandis‘Merrillii’幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至... 【目的】以香榧Torreya grandis‘Merrillii’幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至第11周的幼胚作为转基因受体材料,比较受体胚龄、农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗生素质量浓度对遗传转化效率的影响,并采用潮霉素、绿色荧光蛋白GFP表达及GFP基因聚合酶链式反应对遗传转化香榧幼胚培养物进行阳性筛选。【结果】随着胚龄的增加,香榧幼胚抗逆性增强,污染率降低,成活率提高,第10周和第11周幼胚成活率分别为52.1%和52.3%。农杆菌菌液浓度和侵染时间均对香榧幼胚的污染率、成活率、愈伤组织诱导率以及体胚发生率具有显著影响(P<0.05)。菌液吸光度[D(600)]为0.5时,香榧幼胚愈伤组织诱导率和体胚发生率最高,分别为17.9%和17.3%;侵染时间为10 min时,愈伤组织诱导率和体胚发生率为最高,分别达17.5%和17.1%。羧苄青霉素对于受体材料的农杆菌脱除具有显著影响(P<0.05),当羧苄青霉素质量浓度为300 mg·L^(-1)时,成活率、愈伤组织诱导率和体胚发生率均最高,分别为60.5%、15.8%和17.5%。潮霉素对于香榧幼胚培养物的阳性筛选具有良好的效果,当潮霉素质量浓度为100 mg·L^(-1)时,成活率为30.5%。【结论】不同胚龄香榧幼胚遗传转化效果不同,突破种鳞后第10周香榧幼胚遗传转化效果良好;当农杆菌菌液D(600)为0.5,侵染时间为10 min时,转化效果最佳;300 mg·L^(-1)为羧苄青霉素脱除农杆菌的最佳质量浓度;100 mg·L^(-1)是潮霉素阳性香榧幼胚筛选的最佳质量浓度。图3表5参37。 展开更多
关键词 香榧 幼胚 农杆菌介导的遗传转化 羧苄青霉素 潮霉素
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农杆菌介导萌动种胚转化法将抗草甘膦基因导入蓖麻 被引量：3
5
作者 杨俊芳 王亚 +4 位作者 张欢欢 王亦学 郝耀山 郭志强 王宏伟 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期267-272,共6页
为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR... 为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR阳性植株,平均转化率为6.3‰;在喷施除草剂后存活的26株转化处理植株中,经PCR和Southern blot检测,获得了3株阳性抗草甘膦T0植株。本方法操作简单,成本低,避免了冗长繁琐的组织培养过程,为蓖麻遗传转化研究提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 蓖麻 农杆菌介导的遗传转化 萌动胚 共培养 超声波
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两种不同选择标记的转化效率比较
6
作者 唐微 《武汉工程大学学报》 CAS 2009年第1期13-16,共4页
为了弄清两个选择标记在相同条件下的转化效率,为转基因选择遗传标记时提供参考,以优良恢复系明恢63为受体材料,采用农杆菌介导的遗传转化法,分别以hpt和bar基因为选择标记进行了转化.结果显示:1 500块胚性愈伤共培养后获得214块抗性愈... 为了弄清两个选择标记在相同条件下的转化效率,为转基因选择遗传标记时提供参考,以优良恢复系明恢63为受体材料,采用农杆菌介导的遗传转化法,分别以hpt和bar基因为选择标记进行了转化.结果显示:1 500块胚性愈伤共培养后获得214块抗性愈伤,转化效率为14.3%;5 400块胚性愈伤共培养后获得156块抗性愈伤,转化效率为2.9%;两者的分化率分别为79.0%和80.7%.此外,以hpt和bar为选择标记,从胚性愈伤诱导到获得转基因植株分别需要75天和125天.因此,以hpt为选择标记的遗传转化,比较适合基因功能验证和共培养培育无选择标记水稻植株;如果是培育商品化的转基因水稻植株,则最好以bar为选择标记基因. 展开更多
关键词 农杆菌介导的遗传转化 hpt基因 BAR基因 水稻
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禽流感抗原基因NA导入生菜的研究 被引量：1
7
作者 范亚丽 李进 +1 位作者 阮颖 刘春林 《湖南农业科学》 2012年第3期13-16,共4页
以生菜子叶为转化受体材料,利用农杆菌介导的方法将禽流感抗原基因NA导入生菜,通过用特异引物进行PCR检测,获得6株转基因植株。经PT-PCR检测,证明外源基因已整合到了生菜基因组中,且能够正常表达。
关键词 禽流感抗原基因NA 农杆菌介导遗传转化 生菜
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油菜黑胫病菌T-DNA插入诱变因素优化及突变体筛选 被引量：2
8
作者 杨越寒 张静 +2 位作者 杨龙 吴明德 李国庆 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1115-1125,共11页
油菜黑胫病是由Leptosphaeria biglobosa引起的一种真菌病害。这种病害在我国油菜产区广泛发生,并造成一定的经济损失。为通过获取突变体来研究L.biglobosa的生态适应性机制及致病机制,本文优化了影响农杆菌介导转化(ATMT)油菜黑胫病菌L... 油菜黑胫病是由Leptosphaeria biglobosa引起的一种真菌病害。这种病害在我国油菜产区广泛发生,并造成一定的经济损失。为通过获取突变体来研究L.biglobosa的生态适应性机制及致病机制,本文优化了影响农杆菌介导转化(ATMT)油菜黑胫病菌L.biglobosa菌株Lb731的因素,评估转化子质量,并筛选相关突变体。结果明确了农杆菌介导转化菌株Lb731的最佳因素:潮霉素B浓度为50μg/mL,转化受体(分生孢子)培养时间为15 d(20℃),浓度为2×10^(7-8)孢子/mL,农杆菌-受体共培养温度为25℃,共培养时间为72 h。在最适条件下的转化效率达到80个转化子/百万分生孢子。T-DNA插入基因组的频率为100%,单拷贝插入频率为72.7%,转化子抗潮霉素性状能稳定遗传。从2136个转化子中获得了11个菌丝生长减缓突变体,7个色素产生缺陷突变体和14个分生孢子产生缺陷突变体,并从这些突变体中鉴定出7个致病力丧失突变体。采用hiTAIL-PCR技术,从3个突变体中获得了T-DNA插入位点侧翼序列。上述结果为深入研究L.biglobosa的生态适应性机制及致病机制提供了材料和线索。 展开更多
关键词 油菜黑胫病菌 农杆菌介导遗传转化 T-DNA插入诱变 突变体筛选
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