采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体的构建

1

作者 陈波 王熙 +1 位作者 贺新生 张义正 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期181-185,共5页

为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈,本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR,从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1基因组DNA扩增获得glaA 2.1 kb启动子片段(包含信号... 为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈,本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR,从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1基因组DNA扩增获得glaA 2.1 kb启动子片段(包含信号肽编码序列)及1.1kb终止子片段,构建了外源基因表达盒。以根瘤农杆菌双元载体pCAMBIA1302为基础,删除非必需区段及多余限制酶位点,插入上述外源基因表达盒及来自丝状真菌标记载体pAN7-1的潮霉素抗性标记,构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉分泌整合型表达载体pSUAA52am。转化结果表明:采用原生质体法的转化效率为21个转化子/10~6分生孢子,而农杆菌介导法可达1106个转化子/10~6分生孢子,是原生质体法的53倍。构建载体成功利用glaA表达盒与农杆菌介导转化法的高效特性,可为利用泡盛曲霉高效表达外源基因奠定基础。 展开更多

关键词 泡盛曲霉 glaA表达盒 农杆菌介导转化法 表达载体

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一种根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的新方法 被引量：1

2

作者 鲍广稳 祝嫦巍 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1168-1171,共4页

设计了一种简单高效的根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的方法。利用嵌套平板的方法,在内层平板培养平菇菌丝,待菌丝生长至平板边缘,将经诱导的根癌农杆菌与共培养培养基(CCM)混合,倒入内层平板与外层平板的间隙中,与正在生长中的菌丝共培... 设计了一种简单高效的根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的方法。利用嵌套平板的方法,在内层平板培养平菇菌丝,待菌丝生长至平板边缘,将经诱导的根癌农杆菌与共培养培养基(CCM)混合,倒入内层平板与外层平板的间隙中,与正在生长中的菌丝共培养,实现转化,利用潮霉素抗性筛选获得转化子,平均转化效率33%左右。此方法操作简单,周期短,极易扩大实验规模,为平菇的分子育种以及其他丝状真菌的遗传转化提供参考。 展开更多

关键词 根癌农杆菌介导转化 菌丝体 平菇

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甘蓝型油菜再生与农杆菌介导转化芽苗分化差异

3

作者 沈奇 邓颖天 赵德刚 《山地农业生物学报》 2007年第5期377-380,共4页

选用9个不同基因型的油菜,采用单因素方差分析,研究其下胚轴再生分化及转化后分化效率,阐明了不同基因型对油菜再生及转化后芽苗分化能力的影响。结果表明,油菜再生及转化的分化效率均受基因型影响,基因型对油菜再生分化的影响程度大于... 选用9个不同基因型的油菜,采用单因素方差分析,研究其下胚轴再生分化及转化后分化效率,阐明了不同基因型对油菜再生及转化后芽苗分化能力的影响。结果表明,油菜再生及转化的分化效率均受基因型影响,基因型对油菜再生分化的影响程度大于转化后分化的程度,且不同油菜品种再生分化芽苗效率及转化后分化芽苗效率之间并不存在严格的相关性。 展开更多

关键词 基因型 油菜 农杆菌介导转化 芽苗分化 转化效率

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利用农杆菌介导转化法选育橡胶品种的方法

4

作者 刘晓光 《世界热带农业信息》 2007年第8期23-23,共1页

关键词 农杆菌介导转化法 天然橡胶 品种 选育 橡胶树 防治手段 育种方法 种植园

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橡胶离体和直播实生苗细胞的农杆菌介导转化

5

作者 P. Arokiaraj 董建华 王秉忠 《世界热带农业信息》 1993年第5期3-5,共3页

橡胶PB5/51的离体和直播实生苗感染致癌农杆菌株系541(马来西亚橡胶研究院于1971年分离获得)后,茎部出现肿瘤。肿瘤经组织培养表现激素自主性生长并合成章鱼碱。而用蒸馏水接种的对照橡胶苗则不形成冠瘿瘤。在含有章鱼碱作为唯一氮源的... 橡胶PB5/51的离体和直播实生苗感染致癌农杆菌株系541(马来西亚橡胶研究院于1971年分离获得)后,茎部出现肿瘤。肿瘤经组织培养表现激素自主性生长并合成章鱼碱。而用蒸馏水接种的对照橡胶苗则不形成冠瘿瘤。在含有章鱼碱作为唯一氮源的固体培养基上,用溴百里蓝(BTB)作为pH指示剂,可以区分利用章鱼碱的农杆菌株系541与不利用章鱼碱的株系。在蓝色的BTB测试板上,株系541形成桔黄色菌落,而不利用章鱼碱株系的菌落呈透明状。这种细胞转化技术可加快对橡胶转移具有经济价值的重要基因。 展开更多

关键词 章鱼碱 农杆菌介导转化 生苗 冠瘿瘤 细胞转化 基因转移 外源基因 千碱基 原核生物 固体培养基

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基因枪法和农杆菌介导的Bt抗虫基因转化芥蓝 被引量：3

6

作者 陈长明 赵祥明 +2 位作者 雷建军 曹必好 陈国菊 《中国蔬菜》 北大核心 2016年第8期21-28,共8页

以芥蓝品种小香菇为试材,分别采用基因枪法和农杆菌介导转化法将Bt抗虫基因Cry2Aa2转化到芥蓝中,并对两种转化方法进行了优化和比较。结果表明:基因枪法在轰击距离为6cm、轰击次数为1次时转化效率最高,为0.43%;农杆菌介导转化法以带子... 以芥蓝品种小香菇为试材,分别采用基因枪法和农杆菌介导转化法将Bt抗虫基因Cry2Aa2转化到芥蓝中,并对两种转化方法进行了优化和比较。结果表明:基因枪法在轰击距离为6cm、轰击次数为1次时转化效率最高,为0.43%;农杆菌介导转化法以带子叶下胚轴为外植体、预培养2d、侵染10min、共培养2d、抑菌培养5d后转入筛选培养基为最佳参数,转化效率为0.37%。经PCR和PCR-Southern鉴定,基因枪法和农杆菌介导转化法均成功将目的基因导入芥蓝基因组中。经抗虫性表型鉴定,T_0代转基因芥蓝植株对甘蓝夜蛾幼虫的抗性高于非转基因植株。 展开更多

关键词 芥蓝 BT基因 Cry2Aa2 基因枪法 农杆菌介导转化法

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农杆菌介导的VgDGAT1a基因棉花茎尖转化体系优化研究 被引量：2

7

作者 王安可 何秋伶 +3 位作者 潘晶晶 孙英超 祝水金 陈进红 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期253-260,共8页

为了将斑鸠菊(Vernonia galamensis)二酰甘油酰基转移酶基因(VgDGAT1a)导入棉花,创制转基因高油棉花种质,优化建立农杆菌介导的棉花茎尖转化体系,以‘中棉所49’茎尖为外植体,以HptⅡ基因为筛选标记,VgDGAT1a为目的基因,用农杆菌介导法... 为了将斑鸠菊(Vernonia galamensis)二酰甘油酰基转移酶基因(VgDGAT1a)导入棉花,创制转基因高油棉花种质,优化建立农杆菌介导的棉花茎尖转化体系,以‘中棉所49’茎尖为外植体,以HptⅡ基因为筛选标记,VgDGAT1a为目的基因,用农杆菌介导法,研究外植体培养时间、浸菌侵染时间、共培养时间及吸光度A600值等对棉花茎尖转化的影响。结果表明,在外植体培养3～5d、生长点纵切、菌液吸光度A600值0.6～0.9、浸菌40～60min、浸菌后暗培养1d和使用MSB+活性炭1g/L+头孢霉素400mg/L作为生根培养基的条件下能高效获得再生转化植株,从而为转基因高油棉花种质的创制提供了一种有效的方法。 展开更多

关键词 棉花 茎尖培养 农杆菌介导转化 斑鸠菊二酰甘油酰基转移酶基因 种子含油量

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农杆菌介导AFP1基因转化小麦获得转基因植株 被引量：5

8

作者 支大英 徐春晖 +3 位作者 薛哲勇 刘庆忠 姜鸿鸣 夏光敏 《山东农业科学》 2004年第3期14-16,19,共4页

以nptⅡ基因为筛选基因,利用农杆菌转化系统向普通小麦品种核生3号和99P的愈伤组织中转入白粉病抗性基因Rs-AFP1;获得抗生素抗性克隆数目分别为27个和24个,其中再生绿苗的克隆分别为2个和8个;PCR分析检测所得nptⅡ阳性植株分别为2株和6... 以nptⅡ基因为筛选基因,利用农杆菌转化系统向普通小麦品种核生3号和99P的愈伤组织中转入白粉病抗性基因Rs-AFP1;获得抗生素抗性克隆数目分别为27个和24个,其中再生绿苗的克隆分别为2个和8个;PCR分析检测所得nptⅡ阳性植株分别为2株和6株,AFP1基因阳性植株分别为1株和4株。 展开更多

关键词 普通小麦 农杆菌介导转化 转基因植株 Rs-AFP1

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利用农杆菌介导Bar基因转化稻瘟病菌 被引量：1

9

作者 袁远 辻元人 +1 位作者 久保康之 何月秋 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第5期760-761,共2页

用携带除草剂抗性基因(Bar基因)的质粒pBIG4MRBrev和农杆菌EHA105,建立了农杆菌介导Bar基因转化稻瘟病菌的转化体系,使稻瘟病菌菌株95-8-36得到高效转化,且能稳定表达。

关键词 BAR基因 稻瘟病 农杆菌介导转化

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农杆菌介导法转化金针菇不同受体的效率比较 被引量：8

10

作者 刘建雨 徐珍 +3 位作者 张丹 王瑞娟 谭琦 尚晓冬 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期7-12,共6页

以金针菇(Flammulina velutipes)单核体菌株Dan3和双核体菌株G1的菌丝碎片以及原生质体分别为转化受体,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404为侵染菌株,潮霉素为筛选标记,绿色荧光蛋白编码基因(egfp)为外源基因,进行农杆菌介... 以金针菇(Flammulina velutipes)单核体菌株Dan3和双核体菌株G1的菌丝碎片以及原生质体分别为转化受体,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404为侵染菌株,潮霉素为筛选标记,绿色荧光蛋白编码基因(egfp)为外源基因,进行农杆菌介导转化金针菇。结果显示:金针菇双核体菌株G1的菌丝碎片作为受体时转化效率最高,为40.31%;单核体菌株Dan3的原生质体作为受体时转化效率最低,为21.87%。 展开更多

关键词 金针菇 农杆菌介导转化 转化效率 阳性转化子

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根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统的构建 被引量：3

11

作者 陈凤 王坤 +3 位作者 银超 李德明 任楠 李俊星 《安徽农业科学》 CAS 2012年第16期8800-8805,共6页

[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并... [目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性。[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因(HygBr)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciensmediated transformation,ATMT),将带有HygBr的质粒pHGW-amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115.52,建立以HygBr为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系。利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS-PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达。[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性。 展开更多

关键词 泡盛曲霉 根癌农杆菌介导转化(ATMT) 潮霉素抗性基因 米黑根毛霉脂肪酶(RML)

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农杆菌介导的黄瓜炭疽菌遗传转化 被引量：17

12

作者 方丽 刘海青 +1 位作者 宋凤鸣 郑重 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期360-366,共7页

建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌（Colletotrichum lagenarium）获得T-DNA插入突变体体系，包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等、所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选... 建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌（Colletotrichum lagenarium）获得T-DNA插入突变体体系，包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等、所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选择标记外还携带有融合GFP—GUS报告基因．转化10。个孢子平均可获得约150～200个潮霉素抗性转化子．PCR检测表明，所有潮霉素抗性转化子菌株都能从其基因组DNA中扩增到转化载体中的GUS基因片段，而且都能产生GFP荧光或GUS染色阳性、转化子菌株经过连续继代培养后保持稳定．随机对36个转化子菌株进行致病性测定，发现1个转化子菌株对黄瓜致病性下降，1个丧失致病性，而大多数表现为野生型致病性．农杆菌介导转化瓜类炭疽菌体系的建立，为进一步构建大库容量的T—DNA插入突变体库、致病性突变体筛选以及致病性相关基因的克隆鉴定奠定了基础． 展开更多

关键词 黄瓜炭疽病菌 农杆菌介导的遗传转化 T-DNA插入突变

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农杆菌介导东方百合“西伯利亚”遗传转化体系建立 被引量：7

13

作者 徐品三 刘岚 夏秀英 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期641-645,共5页

以东方百合“西伯利亚”（Lilium seberia）为材料，建立了百合再生和农杆菌介导的遗传转化体系．采用LBA4404和GV3i01菌株对鳞片来源的愈伤组织进行侵染，并以鳞片作为对比转化材料，两种菌株携带有相同的双元载体pCAMBIA1301．研究结... 以东方百合“西伯利亚”（Lilium seberia）为材料，建立了百合再生和农杆菌介导的遗传转化体系．采用LBA4404和GV3i01菌株对鳞片来源的愈伤组织进行侵染，并以鳞片作为对比转化材料，两种菌株携带有相同的双元载体pCAMBIA1301．研究结果表明，农杆菌侵染愈伤组织外植体转化率较高；乙酰丁香酮（AS）的添加能大大提高根癌农杆菌转化百合的效率．另外，共培养时间、不同菌株均对转化效率有一定的影响．筛选后获得的抗性植株经PCR检测和GUS组织化学染色证实外源基因已经整合到基因组DNA中并获得表达，转化率为5％～8％． 展开更多

关键词 百合 农杆菌介导遗传转化 乙酰丁香酮

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农杆菌介导bar基因转化水稻胚性愈伤组织的研究 被引量：6

14

作者 何少海 姚盛存 +2 位作者 丰宇凯 汪轲 李飞飞 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期129-136,共8页

为建立以草丁膦为选择标记的农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的水稻Oryza sativa胚性愈伤组织转化体系,通过农杆菌介导法将bar基因导入了‘日本晴’Oryza sativa‘Nipponbare’‘秀水134’‘Xiushui 134’和‘中花11’‘Zhonghua 1... 为建立以草丁膦为选择标记的农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的水稻Oryza sativa胚性愈伤组织转化体系,通过农杆菌介导法将bar基因导入了‘日本晴’Oryza sativa‘Nipponbare’‘秀水134’‘Xiushui 134’和‘中花11’‘Zhonghua 11’等3个水稻品种的胚性愈伤组织。在分别以选择压15.0,10.0和10.0 mg·L^(-1)的草丁膦质量浓度进行了3次选择后,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)发现‘日本晴’‘秀水134’和‘中花11’的愈伤组织转化效率分别是77.9%,67.5%和92.2%,获得的抗性愈伤组织可以进一步分化成苗。它们的分化率依次是76.1%,44.4%和86.7%;成苗率分别为65.6%,66.7%和30.7%。在以草丁膦作为筛选标记时,首选‘日本晴’作为转化受体进行遗传转化。该体系为以抗除草剂基因作为筛选标记的水稻遗传转化和基因功能验证提供了技术基础,获得的抗草丁膦转化植株为水稻育种提供了材料。 展开更多

关键词 分子生物学 草丁膦 BAR基因 胚性愈伤组织 粳稻 农杆菌介导法转化

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农杆菌介导水稻遗传转化的影响因素及应用研究进展 被引量：3

15

作者 陈思 张从合 +4 位作者 王慧 吴浩然 杨力 黄艳玲 管昌红 《现代农业科技》 2023年第5期1-4,8,共5页

在水稻遗传转化过程中,农杆菌介导转化法与其他方法相比优势较多,比如转入的外源DNA结构完整及表达比较稳定、操作简便、转化率高等,已被广泛应用于转基因技术中。本文对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的原理、影响遗传转化的因素进行了综... 在水稻遗传转化过程中,农杆菌介导转化法与其他方法相比优势较多,比如转入的外源DNA结构完整及表达比较稳定、操作简便、转化率高等,已被广泛应用于转基因技术中。本文对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的原理、影响遗传转化的因素进行了综述,并探讨了农杆菌介导转化法的应用前景。 展开更多

关键词 水稻 根癌农杆菌 农杆菌介导转化法 遗传转化

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农杆菌介导萌动种胚转化法将抗草甘膦基因导入蓖麻 被引量：3

16

作者 杨俊芳 王亚 +4 位作者 张欢欢 王亦学 郝耀山 郭志强 王宏伟 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期267-272,共6页

为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR... 为简化和提高转化效率,以蓖麻品种汾蓖10号为材料,采用非组培的农杆菌介导萌动种胚转化法,获得抗草甘膦植株T0。方法是在生长点附近针刺3针,超声波(强度800W)处理后,与农杆菌共培养16h。在随机选取的800株转化处理植株中,检测到5株PCR阳性植株,平均转化率为6.3‰;在喷施除草剂后存活的26株转化处理植株中,经PCR和Southern blot检测,获得了3株阳性抗草甘膦T0植株。本方法操作简单,成本低,避免了冗长繁琐的组织培养过程,为蓖麻遗传转化研究提供了新的思路和方法。 展开更多

关键词 蓖麻 农杆菌介导的遗传转化 萌动胚 共培养 超声波

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农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系 被引量：1

17

作者 周佳君 胡恒康 +5 位作者 龚丽 干安格 喻卫武 吴家胜 黄坚钦 张启香 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期13-21,共9页

【目的】以香榧Torreya grandis‘Merrillii’幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至... 【目的】以香榧Torreya grandis‘Merrillii’幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至第11周的幼胚作为转基因受体材料,比较受体胚龄、农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗生素质量浓度对遗传转化效率的影响,并采用潮霉素、绿色荧光蛋白GFP表达及GFP基因聚合酶链式反应对遗传转化香榧幼胚培养物进行阳性筛选。【结果】随着胚龄的增加,香榧幼胚抗逆性增强,污染率降低,成活率提高,第10周和第11周幼胚成活率分别为52.1%和52.3%。农杆菌菌液浓度和侵染时间均对香榧幼胚的污染率、成活率、愈伤组织诱导率以及体胚发生率具有显著影响(P<0.05)。菌液吸光度[D(600)]为0.5时,香榧幼胚愈伤组织诱导率和体胚发生率最高,分别为17.9%和17.3%;侵染时间为10 min时,愈伤组织诱导率和体胚发生率为最高,分别达17.5%和17.1%。羧苄青霉素对于受体材料的农杆菌脱除具有显著影响(P<0.05),当羧苄青霉素质量浓度为300 mg·L^(-1)时,成活率、愈伤组织诱导率和体胚发生率均最高,分别为60.5%、15.8%和17.5%。潮霉素对于香榧幼胚培养物的阳性筛选具有良好的效果,当潮霉素质量浓度为100 mg·L^(-1)时,成活率为30.5%。【结论】不同胚龄香榧幼胚遗传转化效果不同,突破种鳞后第10周香榧幼胚遗传转化效果良好;当农杆菌菌液D(600)为0.5,侵染时间为10 min时,转化效果最佳;300 mg·L^(-1)为羧苄青霉素脱除农杆菌的最佳质量浓度;100 mg·L^(-1)是潮霉素阳性香榧幼胚筛选的最佳质量浓度。图3表5参37。 展开更多

关键词 香榧 幼胚 农杆菌介导的遗传转化 羧苄青霉素 潮霉素

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根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达 被引量：3

18

作者 潘力 王云艳 +2 位作者 王斌 何攀 李俊星 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期84-89,共6页

黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉... 黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上. 展开更多

关键词 无孢黑曲霉 根癌农杆菌介导转化 米黑根毛霉脂肪酶 基因表达

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农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系 被引量：12

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作者 刘闵豪 徐郡儡 +3 位作者 叶靖 李周岐 范睿深 李龙 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期79-88,共10页

【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可... 【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可能,为杜仲基因功能的研究与定向改良奠定基础。【方法】以杜仲成年植株叶片为材料诱导愈伤组织,通过添加不同浓度植物生长调节剂与大量元素的MS培养基进行不定芽的诱导与增殖,确定最适培养基。在此基础上,在培养基中添加不同浓度抗生素及抑菌剂,研究愈伤组织对其敏感性。以获得的叶片愈伤组织受体系统为基础,通过L16(45)的正交试验,探索不同转化因子对农杆菌介导叶片愈伤组织遗传转化的瞬时转化效率的影响,建立最适瞬时转化体系。使用获得的瞬时转化体系对愈伤组织进行遗传转化操作,筛选抗性芽,对抗性芽进行GUS组织化学染色与PCR检验。【结果】再生体系优化的结果表明,3/4大量元素浓度的MS培养基能够促进杜仲愈伤组织不定芽的诱导及生长;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0.27μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,诱导率为83%±10.0%;不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,平均伸长长度为(2.47±1.33)cm。抗生素与抑菌剂敏感性试验表明,遗传转化的选择培养基中,抑菌剂头孢霉素的最适浓度为200 mg·L^-1,筛选用的抗生素卡那霉素最适浓度为70 mg·L^-1。转化因子的正交试验表明,最适的农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的转化因子组合为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天。使用最适瞬时转化体系对约200个愈伤组织进行遗传转化操作,共筛选获得3个抗卡那霉素的抗性芽;GUS组织化学染色显示GUS基因在抗性芽中得到了表达,PCR检测证明这些抗性芽中存在NPTⅡ基因。【结论】杜仲叶片愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0.27μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA,不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA。农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织瞬时转化体系为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天,筛选培养基为3/4MS+0.054μmol·L^-1 NAA+4.4μmol·L^-16-BA+200 mg·L^-1 Cef+70 mg·L^-1 Km。利用此体系共获得3个抗性芽,PCR分析和GUS组织化学染色都表明T-DNA已整合到抗性芽基因组中。 展开更多

关键词 杜仲 农杆菌介导遗传转化 再生体系 GUS瞬时表达

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西南地区4个籼稻恢复系遗传转化植株再生体系研究 被引量：3

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作者 张惠莹 张黎 +3 位作者 李嵘 肖吉 刘永胜 牛向丽 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1511-1517,共7页

高效遗传转化体系是研究籼稻分子设计育种和功能基因的基础。文章以西南地区4个重要籼稻恢复系乐恢188、万恢88、e12和蜀恢527成熟胚为外植体，NB（NutrientBroth）培养基为基本培养基，通过改变激素配比，研究4个籼稻恢复系的愈伤组织... 高效遗传转化体系是研究籼稻分子设计育种和功能基因的基础。文章以西南地区4个重要籼稻恢复系乐恢188、万恢88、e12和蜀恢527成熟胚为外植体，NB（NutrientBroth）培养基为基本培养基，通过改变激素配比，研究4个籼稻恢复系的愈伤组织诱导、转化和再生体系。结果表明：添加3．0mg／L2，4-D是诱导愈伤组织的最适处理条件，出愈率达75．4％～93．3％；添加3．0g／L山梨醇、5．0mg／LKT、1．0mg／LNAA、3．0rag／L6-BA和3．0mg／L2，4-D可明显提高万恢88、乐恢188的分化率；添加10mg／L KT和0．4mg／LNAA能显著增强Q2的分化能力；以N6、N6D培养基组合后再添加10mg／LKT和0．4mg／LNAA是蜀恢527的最佳分化培养基。采用上述培养基进行遗传转化，4种籼稻材料植株再生率可达到38．5％～65．9％，转基因阳性率70％～90％。在此基础上利用农杆菌介导法将拟南芥热激蛋白基因HSP101导入万恢88，获得了耐热性比其野生型提高的转基因籼稻植株。 展开更多

关键词 籼稻 成熟胚 激素 愈伤组织 农杆菌介导转化 植株再生 耐热

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