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大豆体细胞胚胎发生与农杆菌介导的遗传转化 被引量：15
1
作者 王萍 王罡 +4 位作者 季静 曾凡亭 黄彬城 曹江 吴颖 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期695-700,共6页
以55个大豆基因型未成熟子叶为外植体,用高浓度2,4 D诱导大豆体细胞胚胎发生与植株再生,并对生产上种植面积大、体细胞胚胎发生率高的大豆基因型用农杆菌介导法进行遗传转化。结果表明,东北地区主栽的大豆基因型中有14个基因型体细胞胚... 以55个大豆基因型未成熟子叶为外植体,用高浓度2,4 D诱导大豆体细胞胚胎发生与植株再生,并对生产上种植面积大、体细胞胚胎发生率高的大豆基因型用农杆菌介导法进行遗传转化。结果表明,东北地区主栽的大豆基因型中有14个基因型体细胞胚胎发生率超过40%。用含有pGBI121S4ABC质粒的LBA4404农杆菌侵染5个东北地区主栽大豆基因型的2147个未成熟子叶,经卡那霉素筛选得到17株抗性株。经PCR、PCR Southern检测,有12株呈阳性反应,证明Bt基因已导入到大豆中。 展开更多
关键词 大豆 体细胞胚胎发生 农杆菌 遗传转化
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百合农杆菌介导的遗传转化受体系统的建立 被引量：12
2
作者 余桂红 马鸿翔 +2 位作者 周淼平 黄益洪 陆维忠 《江西农业学报》 CAS 2004年第2期15-19,共5页
以东方百合品种"西伯利亚"作为研究材料建立了百合农杆菌介导的受体系统。鳞片块不定芽的分化以MS培养基中添加0.5mg/L2,4-D和0.5mg/LBA为最好;试管苗小叶块和小鳞茎块的不定芽分化均以MS培养基中添加1.0mg/LBA和0.05mg/LIAA... 以东方百合品种"西伯利亚"作为研究材料建立了百合农杆菌介导的受体系统。鳞片块不定芽的分化以MS培养基中添加0.5mg/L2,4-D和0.5mg/LBA为最好;试管苗小叶块和小鳞茎块的不定芽分化均以MS培养基中添加1.0mg/LBA和0.05mg/LIAA为最好;卡那霉素的筛选浓度小叶块确定为100mg/L,而小鳞茎块确定为125mg/L;羧苄青霉素抑菌浓度确定为300～400mg/L。 展开更多
关键词 百合 农杆菌介导 遗传转化 受体系统
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思茅松成熟胚无菌萌发及农杆菌介导的遗传转化 被引量：4
3
作者 吴涛 陈少瑜 +3 位作者 陈芳 王寅冰 易善军 陈善娜 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期10-12,15,共4页
以思茅松成熟胚为外植体,研究其适宜的萌发培养基,并对其根癌农杆菌介导的遗传转化进行初步研究。结果表明:适宜成熟胚萌发的培养基为1/2MS培养基;卡那霉素的质量浓度为40mg·L-1,抑菌剂羧苄青霉素的质量浓度为800mg·L-1;遗传... 以思茅松成熟胚为外植体,研究其适宜的萌发培养基,并对其根癌农杆菌介导的遗传转化进行初步研究。结果表明:适宜成熟胚萌发的培养基为1/2MS培养基;卡那霉素的质量浓度为40mg·L-1,抑菌剂羧苄青霉素的质量浓度为800mg·L-1;遗传转化的适宜条件为:菌液比色浓度的OD600为0.8,浸染时间15～30min,共培养时间1～2d;组织化学染色检测到了GUS瞬时表达。 展开更多
关键词 思茅松 成熟胚 无菌萌发 根癌农杆菌 遗传转化
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水稻转座子Pong RNAi载体的构建和农杆菌介导的遗传转化 被引量：2
4
作者 高立宏 路云侠 +2 位作者 柴娜 刘宝 刘立侠 《东北师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期117-123,共7页
为探讨水稻转座子Pong的功能及其对水稻基因组甲基化的影响,构建了水稻转座子Pong的RNAi表达载体TPAⅠ和TPAⅡ,并利用这两个载体采用农杆菌介导法转化水稻（品种松前）的成熟胚愈伤组织,获得PCR结果阳性的再生植株.同时通过不同的农杆... 为探讨水稻转座子Pong的功能及其对水稻基因组甲基化的影响,构建了水稻转座子Pong的RNAi表达载体TPAⅠ和TPAⅡ,并利用这两个载体采用农杆菌介导法转化水稻（品种松前）的成熟胚愈伤组织,获得PCR结果阳性的再生植株.同时通过不同的农杆菌侵染途径、侵染浓度和侵染时间等,建立并优化了水稻的遗传转化程序.结果表明：农杆菌侵染成熟胚愈伤组织3 min,共培养24 d,预培养7 d为最佳的遗传转化方式. 展开更多
关键词 水稻 转座子 RNAI 农杆菌介导 遗传转化
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果蔗‘拔地拉’植株再生与农杆菌介导的遗传转化研究 被引量：4
5
作者 李瑞美 何炎森 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期567-570,共4页
以果蔗(Saccharum officenarum L.)‘拔地拉’的幼嫩叶鞘为材料,以MS+2,4-D2.0mgL-1为诱导培养基,MS+2,4-D2.0mgL-1+6-BA1.0mgL-1为分化培养基,MS+IAA2.0mgL-1为生根培养基,建立了高效的果蔗再生体系。利用农杆菌介导法将含有cryIA基因... 以果蔗(Saccharum officenarum L.)‘拔地拉’的幼嫩叶鞘为材料,以MS+2,4-D2.0mgL-1为诱导培养基,MS+2,4-D2.0mgL-1+6-BA1.0mgL-1为分化培养基,MS+IAA2.0mgL-1为生根培养基,建立了高效的果蔗再生体系。利用农杆菌介导法将含有cryIA基因和CPTI基因的植物表达载体导入果蔗愈伤组织,经潮霉素筛选、PCR以及Southern杂交分析表明,cryIAc基因已整合进果蔗基因组中。 展开更多
关键词 果蔗 农杆菌介导 cryIAc基因 遗传转化
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农杆菌介导的遗传转化在水稻基因工程中的应用 被引量：4
6
作者 潘素君 戴良英 +1 位作者 刘雄伦 王国梁 《中国稻米》 2007年第3期10-14,共5页
农杆菌作为一种天然的遗传转化系统,在水稻基因工程中倍受重视。本文概述了农杆菌介导转化水稻的原理、影响因素、遗传改良上的应用及存在的问题。
关键词 农杆菌转化系统 原理 影响因素 遗传改良
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水稻转座子Pong特异性RNAi载体TPAS的构建和农杆菌介导的遗传转化条件的优化
7
作者 高立宏 张春玉 +3 位作者 柴娜 路云侠 刘宝 刘立侠 《东北师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期122-127,共6页
为研究水稻转座子Pong的功能,构建了Pong的特异RNAi表达载体TPAS,并利用农杆菌介导法将这个载体转化到水稻的成熟胚愈伤组织,获得了PCR阳性的再生植株.同时通过对农杆菌侵染途径、侵染浓度和侵染时间等的研究,建立并优化了水稻的遗传转... 为研究水稻转座子Pong的功能,构建了Pong的特异RNAi表达载体TPAS,并利用农杆菌介导法将这个载体转化到水稻的成熟胚愈伤组织,获得了PCR阳性的再生植株.同时通过对农杆菌侵染途径、侵染浓度和侵染时间等的研究,建立并优化了水稻的遗传转化程序.结果表明:在农杆菌侵染成熟胚愈伤组织的时间为3min,共培养2～4d,预培养7d,G418质量浓度为150～200mg/L条件下筛选7d,转化率可达到30%,为最佳的遗传转化参数.研究结果为今后水稻转座子Pong功能的进一步研究提供了一定的基础和参考. 展开更多
关键词 水稻 转座子 RNAI 农杆菌介导 遗传转化
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农杆菌介导的遗传转化籼稻Kasalath的条件优化 被引量：4
8
作者 周艳 黄亚萍 +3 位作者 周遥 吴亚先 周兰英 姜孝成 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期471-477,共7页
Kasalath是目前用于水稻转基因研究的籼稻模式材料。运用组织培养和农杆菌介导的遗传转化技术,对水稻Kasalath愈伤组织诱导和遗传转化体系进行了优化。结果表明:以Kasalash的幼嫩种子或新鲜的成熟种子为外植体诱导愈伤组织的效果优于贮... Kasalath是目前用于水稻转基因研究的籼稻模式材料。运用组织培养和农杆菌介导的遗传转化技术,对水稻Kasalath愈伤组织诱导和遗传转化体系进行了优化。结果表明:以Kasalash的幼嫩种子或新鲜的成熟种子为外植体诱导愈伤组织的效果优于贮藏1年的种子;用0.5、1、1.5、2、2.5、3、10、20、30 mg/L的2,4–D诱导愈伤组织,以2.5 mg/L的2,4–D诱导效果最佳;用菌液OD600 nm为0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4的农杆菌Ag10和EHA105与愈伤组织共培养介导遗传转化,皆以OD600 nm为0.15的农杆菌溶液效果最好,且EHA105的介导效果比Ag10更佳,其抗性愈伤率可达82.0%;EHA105的介导(共培养)时间以3 d为宜;分化培养前对愈伤组织进行6～8 h快速干燥或48～72 h慢速干燥处理,可以明显提高愈伤组织的再生成苗率,并缩短分化时间;在对愈伤组织侵染处理前的预培养处理和对抗性愈伤进行分化培养前的预分化培养处理对Kasalath的遗传转化效率影响不大,可省略以缩短遗传转化时间。遵循以上优化条件,从愈伤组织诱导至遗传转化获得再生植株全过程的时间只需57～60 d(已报道的遗传转化全过程需70 d以上),遗传转化效率可达到已报道的最高值65%。 展开更多
关键词 籼稻 2 4-D 农杆菌介导 遗传转化 影响因素
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农杆菌介导的遗传转化在花生上的应用及前景
9
作者 吴丽萍 吴祖建 《福建农业科技》 2001年第2期16-18,共3页
农杆菌介导的遗传转化已广泛应用于各种植物。本文综述了农杆菌介导的遗传转化在花生上的应用及其前景。
关键词 花生 农杆菌介导 遗传转化 器官发生 萌动种胚 转基因育种
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利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化 被引量：6
10
作者 杨明明 高海京 +5 位作者 马啸燕 孙英楠 邵宇鹏 包格格 李文滨 王志坤 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期353-359,共7页
高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、... 高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、切豆方法、侵染时间、共培养方式以及共培养时间等方面对东农47、垦农18和B12088大豆栽培品种的遗传转化体系进行优化。结果表明:东农47萌发1 d,侵染30 min;垦农18和B12088萌发12 h,侵染30 min,GUS基因瞬时表达率最高。在其它的处理上,3个品种表现结果一致,即蘸取菌液切豆,共培养中子叶伤口朝下摆放,黑暗条件下共培养3～5 d,GUS基因瞬时表达最高。3个品种在最适条件下,GUS染色效率均达到90%以上,垦农18遗传转化效率较高。本研究为大豆农杆菌介导子叶节转化方法提供了一个改进的方案,并且为拓宽可利用于大豆遗传转化的种质资源奠定基础。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 大豆遗传转化 转化率 GUS基因瞬时表达
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根癌农杆菌介导的遗传转化及其在稻瘟病菌中的应用 被引量：7
11
作者 何丽云 张树林 +3 位作者 崔百元 朱庆锋 刘圣杰 刘文华 《广东农业科学》 CAS 2019年第3期93-100,共8页
根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)技术是近20年发展起来的真菌研究中最具变革性的技术之一,它作为一种转化工具已被广泛应用于真菌基因功能研究中,使人们对真菌基因组学的理解有了很大的改变。利用ATMT获得随机的T-DNA插入突变体库,结合... 根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)技术是近20年发展起来的真菌研究中最具变革性的技术之一,它作为一种转化工具已被广泛应用于真菌基因功能研究中,使人们对真菌基因组学的理解有了很大的改变。利用ATMT获得随机的T-DNA插入突变体库,结合突变体菌株表型筛选,使许多过程的遗传基础得到阐明。ATMT法具有操作简单,转化受体广泛,转化效率高以及转化子遗传稳定性高等优势。稻瘟病菌是植物十大重要真菌之一,是引发水稻稻瘟病的病原真菌。目前,培育水稻抗病品种是控制稻瘟病最经济和环保的方法。通过克隆稻瘟病菌相关致病基因并研究其功能,在解释致病机理和生理特性,以及培育抗病品种方面具有重要的理论和实践意义。以根癌农杆菌为介导的遗传转化为稻瘟病菌的插入突变、基因敲除和标记克隆等方面研究提供了一个重要工具。针对根癌农杆菌介导的遗传转化原理、特点、步骤、影响因素以及该技术在稻瘟病菌功能基因组学研究中的应用进行综述,以期能够为稻瘟病菌等真菌的遗传转化方面研究提供相关的参考。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 遗传转化 稻瘟病菌 功能基因 突变体库
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一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法
12
作者 夏启玉 降彦苗 +5 位作者 刘亚男 李海权 程汝宏 郭安平 刘国庆 赵辉 《热带作物学报》 北大核心 2025年第1期44-50,共7页
糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤... 糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤,以其作为转化受体材料,用含植物表达载体的农杆菌侵染60min并共培养6d,转接至含0.025g/L潮霉素的筛选培养基上筛选出抗性愈伤,接着在含0.015g/L潮霉素的分化培养基上分化,最后在含0.015g/L潮霉素的生根培养基上生根成苗,用载体特异性引物对再生植株进行PCR检测,鉴定其是否为阳性转基因植株。根据多个批次的转化实验统计糜子的抗性再生植株的筛选效率和转化效率。结果表明:CIM和MSD诱导培养基均能诱导出糜子胚性愈伤,但CIM培养基诱导的糜子胚性愈伤效果更好;糜子胚性愈伤在被农杆菌侵染及与农杆菌共培养后,经在含潮霉素的培养基上筛选、分化和生根后获得多株抗性再生糜子植株,3次试验获得的糜子抗性再生植株的PCR鉴定阳性率为100%,平均转化效率为30%以上。本研究成功建立了农杆菌介导的糜子遗传转化方法,操作简单,转化效率高,成本低廉,且转化不受季节限制,能规模化开展,为糜子的遗传改良提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 糜子 农杆菌 遗传转化 转化效率
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农杆菌介导微型月季遗传转化中抗生素的优化
13
作者 李燕 黄婧 +1 位作者 张启香 张敏 《江苏林业科技》 2025年第2期1-9,共9页
通过对3种抗生素的筛选,确立最适抑制农杆菌过度生长、促进微型月季愈伤组织生长与分化的抗生素及其浓度,从而建立稳定而有效的微型月季遗传转化体系。结果表明:微型月季叶片培养于150 mg/L头孢噻肟钠培养基可抑制农杆菌生长且利于材料... 通过对3种抗生素的筛选,确立最适抑制农杆菌过度生长、促进微型月季愈伤组织生长与分化的抗生素及其浓度,从而建立稳定而有效的微型月季遗传转化体系。结果表明:微型月季叶片培养于150 mg/L头孢噻肟钠培养基可抑制农杆菌生长且利于材料生长分化。侵染最佳条件为:侵染菌液OD_(600)为0.5—0.6,侵染5—10 min,共培养2 d。‘荷仙姑’‘彩虹’和‘笑脸’微型月季阳性愈伤的PCR阳性率分别为26.4%,18.4%和31.2%。该研究结果为微型月季农杆菌遗传转化的抗生素选择和培育条件的优化提供一定参考。 展开更多
关键词 微型月季 遗传转化 抗生素 培养 农杆菌
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农杆菌介导的梭梭种子遗传转化体系初探
14
作者 娜菲莎·木则帕尔 孙朗 +6 位作者 王萍 任燕萍 马丽 程聪 姚正培 王波 张桦 《中国草地学报》 北大核心 2025年第7期13-20,共8页
以梭梭种子为材料,在农杆菌种类、浓度、侵染时间优化条件后,进一步探索乙酰丁香酮(AS)、头孢霉素(Cef)、除草剂草铵膦(PPT)浓度对遗传转化的影响。结果表明:适合梭梭种子侵染的农杆菌菌株为GV3101,将带有伤口的梭梭种子在OD_(600)为0.... 以梭梭种子为材料,在农杆菌种类、浓度、侵染时间优化条件后,进一步探索乙酰丁香酮(AS)、头孢霉素(Cef)、除草剂草铵膦(PPT)浓度对遗传转化的影响。结果表明:适合梭梭种子侵染的农杆菌菌株为GV3101,将带有伤口的梭梭种子在OD_(600)为0.6的菌液中侵染10 min,在MS+150μmol/L AS培养基中共培养2 d后,转移至含头孢霉素的抗性培养基(MS+250 mg/mL Cef)中延迟筛选10~14 d,再在含有草铵膦的抗性筛选培养基(MS+250 mg/mL Cef+1.0 mg/L PPT)经过21~28 d培养,得到抗PPT梭梭苗,利用PCR检测和GUS染色验证,获得转基因阳性植株,转化率为1.6%~5.2%。 展开更多
关键词 梭梭种子 农杆菌介导 转化效率
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发根农杆菌介导的蓝莓遗传转化体系的建立
15
作者 邬婷婷 刘凉琴 +5 位作者 姜燕琴 葛春峰 田亮亮 刘梦溪 曾其龙 於虹 《果树学报》 北大核心 2025年第8期1897-1904,共8页
【目的】建立蓝莓(Vaccinium corymbosum)简单、快速、经济的发根农杆菌转化体系。【方法】以蓝美1号蓝莓地栽植株当年生绿枝的茎段为外植体,使用携带GFP过表达质粒的发根农杆菌K599,在不同菌液浓度及不同添加剂组合(乙酰丁香酮和表面... 【目的】建立蓝莓(Vaccinium corymbosum)简单、快速、经济的发根农杆菌转化体系。【方法】以蓝美1号蓝莓地栽植株当年生绿枝的茎段为外植体,使用携带GFP过表达质粒的发根农杆菌K599,在不同菌液浓度及不同添加剂组合(乙酰丁香酮和表面活性剂)的筛选条件下,通过注射蓝莓茎段的芽点及两端切口进行侵染,利用GFP荧光检测和DNA检测进行转基因株系验证。【结果】GFP荧光检测发现茎段芽点及下端切口处分别产生表达荧光信号的侧芽及毛状根;在菌液OD600值为0.5~1.5的浓度区间,OD600值为1.0时诱导率最高达42.31%;不同添加剂组合对诱导率具有较大影响,200μmol·L-1乙酰丁香酮加0.05%表面活性剂的添加剂组合中诱导率最高达42.50%;最早在培养45 d时取材鉴定蓝莓遗传转化株系,从20个随机样本中测得14株转化植株,预期最高转化率为29.75%。【结论】建立了简单、快速的发根农杆菌介导的蓝美1号蓝莓遗传转化体系,为蓝莓的基因功能研究和良种选育提供技术支持。 展开更多
关键词 蓝美1号 遗传转化 发根农杆菌
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农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系的建立
16
作者 周彬 曹桦 +3 位作者 陆琳 张钰莹 李涵 李东徽 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期111-119,共9页
【目的】探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系。【方法】以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium‘Shizhanghong’)单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌... 【目的】探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系。【方法】以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium‘Shizhanghong’)单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌介导建兰遗传转化效率和再生效率的主要因素。【结果】市长红遗传转化的最佳菌株为EHA105,乙酰丁香酮最适浓度为200μmol/L,潮霉素最佳质量浓度为40 mg/L。为保证高转化率和高再生率,市长红的最佳侵染体系为:预培养10 d后,在OD600值为0.4~0.6的农杆菌侵染液中振荡20 min,最后在黑暗条件下共培养3 d。通过筛选的最佳遗传转化条件,经绿色荧光蛋白鉴定、抗生素筛选、PCR和qRT-PCR检测,最终在180个市长红的根状茎中得到17株转基因阳性植株,转化率为9.44%。【结论】本研究建立了农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系,为其转基因育种奠定了基础。 展开更多
关键词 建兰品种市长红 根状茎 农杆菌侵染 遗传转化 绿色荧光蛋白(GFP)
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农杆菌介导的植物非组培遗传转化技术研究进展
17
作者 李娇娇 王晓光 +2 位作者 白梦岚 侯小改 郭丽丽 《浙江农林大学学报》 北大核心 2025年第5期888-897,共10页
植物遗传转化技术是现代植物基因功能研究以及分子育种方面的关键手段。然而,运用传统方法开展遗传转化对植物组织培养的依赖性极强,另外还存在明显的基因型限制等问题。农杆菌Agrobacterium介导的非组培遗传转化技术,因操作简便易行、... 植物遗传转化技术是现代植物基因功能研究以及分子育种方面的关键手段。然而,运用传统方法开展遗传转化对植物组织培养的依赖性极强,另外还存在明显的基因型限制等问题。农杆菌Agrobacterium介导的非组培遗传转化技术,因操作简便易行、不需要经历脱分化及再生等优势渐渐在多种植物中应用。本研究较为系统地梳理了农杆菌介导遗传转化的基本原理及非组培转化的各种方法,包含了种子介导法、花器官转化法、活体注射递送法、切割-浸渍-出芽法、电穿孔法、病毒递送法等;还总结了其他非组培遗传转化方法,如纳米载体辅助递送法、发育调控因子辅助转化法、花粉管介导法、病毒载体介导法。通过对不同方法的应用实例、转化效率、优缺点以及适用植物进行比较,较为清晰地展现非组培转化体系在提升遗传转化效率、拓宽物种适用范围、降低转化技术要求等方面所拥有的潜力,以期为建立高效、稳定且普适性强的植物非组培遗传转化体系提供理论参考及技术支持。 展开更多
关键词 非组培 根癌农杆菌 遗传转化 综述
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发根农杆菌介导的桑遗传转化体系的优化
18
作者 吴敏 廖扬振 +3 位作者 皮继岚 刘尚煜 魏渊 欧阳臻 《山东农业科学》 北大核心 2025年第3期27-36,共10页
本研究在已有桑遗传转化体系的基础上对其进行优化,以提高转化效率,为后续桑基因功能研究及分子育种奠定基础。首先分别从发根农杆菌种类、外植体类型、预培养时间、侵染时间和共培养时间五个方面对农杆菌介导的桑遗传转化体系进行优化... 本研究在已有桑遗传转化体系的基础上对其进行优化,以提高转化效率,为后续桑基因功能研究及分子育种奠定基础。首先分别从发根农杆菌种类、外植体类型、预培养时间、侵染时间和共培养时间五个方面对农杆菌介导的桑遗传转化体系进行优化,再构建MaCYP90A-pBI121质粒转入农杆菌诱导发根以验证优化体系的稳定性。结果表明,优化后的桑遗传转化条件为:采用OD_(600)为0.6的农杆菌LBA9402菌液侵染预培养2 d的无菌桑苗真叶10 min,共培养时间为2 d。在此优化条件下,毛状根诱导率可达到84.51%。同时利用该体系将重组质粒MaCYP90A-pBI121转化至桑叶中,经荧光定量PCR分析,阳性转基因毛状根中MaCYP90A基因表达量为空白对照的39.97倍。综上,本研究成功对已有桑遗传转化体系进行了优化,毛状根诱导率相比优化前(30.21%)提高了1.8倍,可为后续桑基因功能研究、次生代谢物合成途径解析以及分子育种提供技术支撑。 展开更多
关键词 桑 遗传转化体系 发根农杆菌 毛状根诱导 转基因
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农杆菌介导的稻瘟病菌遗传转化体系的建立及优化
19
作者 李爽 张淑梅 +3 位作者 田缘 潘钰 刘伟 闫更轩 《湖北农业科学》 2025年第3期182-189,共8页
以稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)为试验材料,通过PCR获得GFP基因,构建pBarg-GFP-BARAmp重组载体,使用农杆菌转化法获得能够稳定遗传的含GFP基因的稻瘟病菌菌株,采用单因素与响应面法优化转化条件。稻瘟病菌遗传转化体系的最佳转化条件:O... 以稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)为试验材料,通过PCR获得GFP基因,构建pBarg-GFP-BARAmp重组载体,使用农杆菌转化法获得能够稳定遗传的含GFP基因的稻瘟病菌菌株,采用单因素与响应面法优化转化条件。稻瘟病菌遗传转化体系的最佳转化条件:OD_(600 nm)为0.38(农杆菌菌液浓度)、共培养温度为28.2℃、共培养时间为2.12 d,转化效率为280.00×10~(-5)。PCR鉴定和荧光显微镜观察发现,转化的稻瘟病菌GFP基因能够正常表达,和野生型稻瘟病菌的致病性无显著差异。 展开更多
关键词 稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae) 农杆菌介导 遗传转化 GFP基因 建立 优化
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发根农杆菌介导的水角遗传转化体系的建立
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作者 周荟森 谭德冠 +4 位作者 王英 付莉莉 于颖 孙雪飘 张家明 《热带生物学报(中英文)》 2025年第5期755-764,共10页
水角(Hydrocera triflora)是重要的濒危水生植物,耐旱性差是导致其濒危的重要因素。本研究拟建立水角遗传转化体系,并对其进行遗传改良,以期减轻其濒危程度。首次建立并优化了发根农杆菌介导的水角遗传转化体系。在优化该转化体系研究中... 水角(Hydrocera triflora)是重要的濒危水生植物,耐旱性差是导致其濒危的重要因素。本研究拟建立水角遗传转化体系,并对其进行遗传改良,以期减轻其濒危程度。首次建立并优化了发根农杆菌介导的水角遗传转化体系。在优化该转化体系研究中,发现水培扦插转化法较优,菌株K599转化率最高,带顶芽插穗作侵染外植体转化效果较优。优化的转化体系转化率高达63.3%。构建了过表达海藻糖合成酶MeTPS6基因的载体并获得其转基因植株。3%(m/m)polyethylene glycol-6000(PEG-6000)溶液处理3 d,发现转基因植株生长正常,而对照叶片出现萎蔫。经检测转基因植株毛状根的海藻糖含量显著高于对照。这些结果表明过表达MeTPS6转基因水角的耐旱能力得到显著改善。本研究结果为水角的性状改良和基因功能验证提供基础,也为其他水生植物高效转化体系的建立提供技术借鉴。 展开更多
关键词 水角 发根农杆菌 遗传转化 转基因复合植株 耐旱
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