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农杆菌介导法获得小麦转基因植株的研究 被引量:37
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作者 黄益洪 周淼平 +3 位作者 叶兴国 唐克轩 程红梅 陆维忠 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期510-515,共6页
从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,... 从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,以及高敏感受体基因型 Alondra和扬麦 15 8等。实验结果还表明 ,预培养 10~ 15天的幼胚愈伤组织具有较高的瞬时表达率和再生能力 ,是较好的转化受体。对愈伤组织与农杆菌共培养后的筛选程序进行了摸索 ,获得了 70多个 PPT(Phosphinothricin)抗性植株 ,经 PCR等分子检测分析 ,证明部分植株实现了外源基因的成功转化 ,为进一步的研究工作打下了基础。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 小麦 转基因植株 基因转化 GUS 瞬时表达 PPT
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建立青菜(Brassica chinensis)农杆菌介导法基因转化体系 被引量:25
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作者 蔡小宁 佘建明 +3 位作者 朱祯 朱卫民 袁希汉 苏小俊 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 1997年第2期110-114,共5页
以青菜地方品种矮脚黄、苏州青的子叶、子叶柄、真叶为外植体,在改良MS培养基上离体培养获得再生植株。在不定芽诱导培养基中添加2~20mg/LAgNO3可显著提高子叶不定芽诱导频率;添加0.1mg/LNAA和1~2mg/... 以青菜地方品种矮脚黄、苏州青的子叶、子叶柄、真叶为外植体,在改良MS培养基上离体培养获得再生植株。在不定芽诱导培养基中添加2~20mg/LAgNO3可显著提高子叶不定芽诱导频率;添加0.1mg/LNAA和1~2mg/LCPPU既可提高不定芽诱导频率,又可获得较多数量的不定芽。用含CpTI基因和NPTII基因的农杆菌感染子叶,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。培养基中添加羧苄青霉素促进子叶再生不定芽,头孢霉素和卡那霉素则抑制子叶再生。卡那霉素敏感性测定结果表明,当培养基中含卡那霉素10mg/L时。 展开更多
关键词 青菜 子叶 农杆菌介导法 基因转化体系 再生植株
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通过农杆菌介导法将Bt(cryIA)基因导入大豆 被引量:23
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作者 周思军 李希臣 +2 位作者 刘昭军 刘丽艳 杨庆凯 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期157-162,F003,共7页
采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将Bt基因 (cryIA)导入大豆。从发芽 5 - 7天的大豆无菌苗切取子叶节外植体 ,经农杆菌感染和共培养后 ,在选择培养基上 4周左右出现抗性不定芽。将不定芽转移到芽伸长培养基上 ,4 - 6周后再生... 采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将Bt基因 (cryIA)导入大豆。从发芽 5 - 7天的大豆无菌苗切取子叶节外植体 ,经农杆菌感染和共培养后 ,在选择培养基上 4周左右出现抗性不定芽。将不定芽转移到芽伸长培养基上 ,4 - 6周后再生苗长至 2 .5 - 3cm高。再将再生苗切下转入生根培养基 ,2周左右生根。生根后的再生植株经逐步锻炼移入盆中 ,所有植株均能正常开花结荚。在移栽成活的 8株T0 植株中有 7株PCR检测呈阳性反应 ;在 7个T1株系中有 4个株系存在PCR阳性植株。取 4个稳定遗传的T1代株系内的阳性植株的叶片提取DNA ,用地高辛标记的Bt基因探针进行Southern杂交分析 ,结果 4个株系均呈现阳性 ,证明Bt基因已整合到受体大豆的基因组内并能传递给后代。 展开更多
关键词 大豆 转基因植株 BT基因 转化 农杆菌介导法
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农杆菌介导法获得转可溶性淀粉合成酶基因籼稻 被引量:19
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作者 胡昌泉 徐军望 +3 位作者 苏军 陈在杰 朱祯 王锋 《福建农业学报》 CAS 2003年第2期65-68,共4页
采用农杆菌介导法将胚乳特异性表达谷蛋白1(Glutelin1,Gtl)基因控制下的可溶性淀粉合成酶基因sss导入籼稻恢复系明恢86,共获得53个独立转化再生植株。PCR检测表明,sss基因已整合进水稻的基因组中。直链淀粉含量测定结果表明,转基因植株... 采用农杆菌介导法将胚乳特异性表达谷蛋白1(Glutelin1,Gtl)基因控制下的可溶性淀粉合成酶基因sss导入籼稻恢复系明恢86,共获得53个独立转化再生植株。PCR检测表明,sss基因已整合进水稻的基因组中。直链淀粉含量测定结果表明,转基因植株后代直链淀粉含量较对照有较大幅度的下降。 展开更多
关键词 籼稻 可溶性淀粉合成酶基因 转基因 农杆菌介导法 直链淀粉含量
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利用农杆菌介导法转化泗棉3号的研究 被引量:12
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作者 吴慎杰 李飞飞 +3 位作者 陈天子 张洁 郭旺珍 张天真 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期632-638,共7页
泗棉3号农艺性状优良,是20世纪90年代长江流域棉区的主栽品种,利用基因工程导入外源基因进行直接改良,可以迅速获得新的品种或育种材料。以陆地棉泗棉3号的下胚轴为外植体,建立了高效的转化体系,得到了大量的转基因植株。泗棉3号的出愈... 泗棉3号农艺性状优良,是20世纪90年代长江流域棉区的主栽品种,利用基因工程导入外源基因进行直接改良,可以迅速获得新的品种或育种材料。以陆地棉泗棉3号的下胚轴为外植体,建立了高效的转化体系,得到了大量的转基因植株。泗棉3号的出愈率和分化率显著高于模式品种Coker312,同时它出现分化中心的主要形态不同于Coker312,其胚性愈伤组织主要来源于两类初生愈伤组织。对泗棉3号的胚性愈伤组织进行GUS检测,以及对再生植株叶片进行PCR检测后,阳性植株嫁接于温室。在温室用2063.98μmolL-1的卡那霉素点涂叶片检测nptII基因的表达和取叶片进行gus基因的组织化学检测,同时通过Southernblot分析检测,证明目的基因成功地整合到泗棉3号基因组中。 展开更多
关键词 泗棉3号 农杆菌介导法转化 再生
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应用农杆菌介导法的多年生黑麦草遗传转化研究 被引量:7
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作者 刘萍 张振霞 +4 位作者 苏乔 袁剑刚 席嘉宾 辛国荣 杨中艺 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期126-128,共3页
以草坪型多年生黑麦草LoliumperenneL.成熟种子为外植体,经过愈伤组织诱导和植株再生研究,建立了该草种的遗传转化体系,并成功地应用农杆菌介导法将克隆自辽宁碱蓬的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转移进多年生黑麦草,获得的转基因株系Gsc_LP... 以草坪型多年生黑麦草LoliumperenneL.成熟种子为外植体,经过愈伤组织诱导和植株再生研究,建立了该草种的遗传转化体系,并成功地应用农杆菌介导法将克隆自辽宁碱蓬的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转移进多年生黑麦草,获得的转基因株系Gsc_LP5通过PCR检测证明了目的基因的存在,通过叶片离体检测法证明了作为检测基因随同质粒一同转入的抗潮霉素基因的表达,通过盆栽耐盐试验证明了转基因植株具有较强的耐盐能力。 展开更多
关键词 多年生黑麦草Lolium perenne L. 愈伤组织诱导 植株再生 遗传转化 农杆菌介导法
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农杆菌介导法将FPF1基因导入油菜的研究初报 被引量:19
7
作者 黄琼华 杨光伟 +2 位作者 李德谋 罗小英 裴炎 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第2期124-127,共4页
将拟南芥早花基因FPF1(floweringpromotingfactor 1)插入双元高效表达载体pBI 12 1中 ,构建了植物表达载体pBIUbi-FPF1。以“双低”甘蓝型晚熟油菜品种 2 0 0 0F4 10 2 ,2 0 0 0F4 15 3的下胚轴为转化受体 ,通过农杆菌介导的遗传转化获... 将拟南芥早花基因FPF1(floweringpromotingfactor 1)插入双元高效表达载体pBI 12 1中 ,构建了植物表达载体pBIUbi-FPF1。以“双低”甘蓝型晚熟油菜品种 2 0 0 0F4 10 2 ,2 0 0 0F4 15 3的下胚轴为转化受体 ,通过农杆菌介导的遗传转化获得抗卡那霉素的再生转基因植株 ,并探讨了影响油菜再生频率以及遗传转化效率的几个因素。对部分经卡那霉素筛选得到的再生植株进行了PCR检测 ,其中 70 %以上的卡那霉素抗性植株表现阳性 。 展开更多
关键词 FPF1基因 转基因 油菜 农杆菌介导法 早熟性 卡那霉素 遗传转化
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农杆菌介导法与基因枪轰击法结合在植物遗传转化上的应用 被引量:16
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作者 耿立召 刘传亮 李付广 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期205-210,共6页
根癌农杆菌介导法 Agrobacterium-mediatedtransformation 和基因枪轰击法 particlebombardmenttransformation 是植物遗传转化的主要方法.两种方法各有优缺点,农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝... 根癌农杆菌介导法 Agrobacterium-mediatedtransformation 和基因枪轰击法 particlebombardmenttransformation 是植物遗传转化的主要方法.两种方法各有优缺点,农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝数低,遗传稳定性好;基因枪转化法不受材料基因型的限制.通过结合两种方法的优点,发展了3种农杆菌介导和基因枪轰击法相结合的遗传转化方法,分别为农杆枪法、基因枪轰击/农杆菌感染法、金粉或钨粉包裹菌体细胞作为微弹轰击法.对3种结合转化方法的技术途径、原理、转化受体及研究进展等方面进行了综述. 展开更多
关键词 农杆菌介导法 基因枪轰击 杆枪 遗传转化
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农杆菌介导法获得草地早熟禾转Bt基因植株 被引量:17
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作者 佘建明 梁流芳 +3 位作者 张保龙 何晓兰 陈志一 倪万潮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期102-105,共4页
以草地早熟禾品种超级伊克利成熟种子为外植体材料,当愈伤组织诱导培养基中琼脂的用量增加至16g/L时,诱导产生的颗粒状胚性愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织经携带pGBI4AB农杆菌LBA4404的感染和共培养后,在继代培养基上添加50... 以草地早熟禾品种超级伊克利成熟种子为外植体材料,当愈伤组织诱导培养基中琼脂的用量增加至16g/L时,诱导产生的颗粒状胚性愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织经携带pGBI4AB农杆菌LBA4404的感染和共培养后,在继代培养基上添加50mg/L筛选剂G418,可较好地筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,进而获得具有卡那霉素抗性的再生植株。PCR分子检测结果表明,Bt基因已导入转化植株。生物学抗虫性鉴定结果显示,转Bt基因当代植株对1~2龄棉铃虫具有不同程度的抗性。 展开更多
关键词 转BT基因 草地早熟禾 农杆菌介导法 卡那霉素抗性 胚性愈伤组织 诱导培养基 继代培养基 成熟种子 用量增加 再生植株 检测结果 转化植株 鉴定结果 体材料 颗粒状 共培养 筛选剂 PCR 抗虫性 生物学 棉铃虫 添加 导入
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辐照对结缕草农杆菌介导法遗传转化的影响 被引量:3
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作者 张磊 胡繁荣 +3 位作者 张琳琳 王雪艳 马传喜 吴殿星 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期435-437,442,共4页
以结缕草成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织为材料 ,研究了钴 60伽玛射线辐照对农杆菌介导法遗传转化的影响。结果表明 ,在辐照剂量为 1~ 4Gy时 ,GUS瞬间表达率随剂量的增加逐渐提高 ,但在辐射剂量高于 4Gy时 ,GUS瞬间表达率随剂量的增... 以结缕草成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织为材料 ,研究了钴 60伽玛射线辐照对农杆菌介导法遗传转化的影响。结果表明 ,在辐照剂量为 1~ 4Gy时 ,GUS瞬间表达率随剂量的增加逐渐提高 ,但在辐射剂量高于 4Gy时 ,GUS瞬间表达率随剂量的增加而下降。综合考虑辐照后愈伤组织的存活率和GUS瞬间表达率 ,初步认为 2Gy为最佳辐照剂量。进一步观察表明 ,辐照处理后以继代培养 36h最适合农杆菌介导感染。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 结缕草 遗传转化 瞬间表达 成熟种子 继代培养 胚性愈伤组织 剂量 影响 辐照
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通过根癌农杆菌介导法将抗虫基因CpTI导入辣椒的研究 被引量:13
11
作者 柳建军 于洪欣 +1 位作者 崔德才 于彦丽 《山东农业科学》 2001年第4期15-16,共2页
研究建立了一套简单、高效的辣椒遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的带柄子叶转化法将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因转入辣椒栽培品种益都羊角椒中。对获得的 3 3株卡那霉素 (Km)抗性再生植株进行PCR检测 ,证明有
关键词 辣椒 根癌农杆菌介导法 转基因植株 抗虫基因 胰蛋白酶抑制剂基因
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利用农杆菌介导法获得转cry2A抗虫基因水稻的研究 被引量:11
12
作者 吴振映 柳絮 +2 位作者 王文英 姚方印 刘开启 《山东农业科学》 2011年第5期1-3,7,共4页
稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫对cry2A*编码的Bt毒性蛋白有明显的排斥效应,从而可达到抗虫的效果。本研究利用农杆菌介导法,将载有cry2A*基因的pC-2A质粒转入受体水稻品种镇稻88基因组内,获得转基因植株。由于cry2A*与抗Basta基因紧密连锁,通... 稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫对cry2A*编码的Bt毒性蛋白有明显的排斥效应,从而可达到抗虫的效果。本研究利用农杆菌介导法,将载有cry2A*基因的pC-2A质粒转入受体水稻品种镇稻88基因组内,获得转基因植株。由于cry2A*与抗Basta基因紧密连锁,通过Basta抗性筛选,进而得到转cry2A*基因阳性株。PCR和AGE分析结果表明,外源基因cry2A*已成功整合到镇稻88基因组内。田间试验结果显示转基因阳性植株有明显的抗虫效果。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 cry2A*基因 水稻 抗虫性
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棉花农杆菌介导法转化机理及研究进展 被引量:4
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作者 吴霞 焦改丽 +5 位作者 吴家和 范小平 孟晋红 罗小丽 上官小霞 李燕娥 《山西农业科学》 2001年第1期27-30,共4页
在农杆菌中Ti质粒上的若干重要区域共同作用下 ,将经改造的含有目的基因的T -DNA片断导入植物基因组中 ,并得以表达。采用农杆菌介导法 ,山西省农业科学院棉花研究所已将多个外源基因导入棉花中 ,获得转化品种与品系。
关键词 棉花 农杆菌介导法 转化机理 TI质粒 转化载体
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葡萄砧木5BB超声波辅助农杆菌介导法遗传转化的条件 被引量:2
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作者 李金凤 陶建敏 +2 位作者 糜林 李国平 章镇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期1190-1192,共3页
关键词 葡萄砧木 5BB 超声波 农杆菌介导法 遗传转化
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根癌农杆菌介导法获得烟草转人骨形成蛋白-3成熟肽基因植株 被引量:5
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作者 高书颖 郭蔼光 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第6期1128-1133,共6页
利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初... 利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初步鉴定并筛选整合了人骨形成蛋白 - 展开更多
关键词 烟草 人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m 根癌农杆菌介导法 转基因
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油菜下胚轴农杆菌介导法转化影响因素探讨 被引量:14
16
作者 王景雪 杜建中 +2 位作者 荣二花 李晓灿 孙毅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期12-15,共4页
利用甘蓝型油菜下胚轴为外植体,对油菜农杆菌介导转化中的主要因素进行了研究,并由此建立了油菜下胚轴农杆菌介导的遗传转化体系。研究发现,在农杆菌介导的油菜下胚轴转化中,较好的转化体系是:外植体在农杆菌侵染前进行3d的预培养。农... 利用甘蓝型油菜下胚轴为外植体,对油菜农杆菌介导转化中的主要因素进行了研究,并由此建立了油菜下胚轴农杆菌介导的遗传转化体系。研究发现,在农杆菌介导的油菜下胚轴转化中,较好的转化体系是:外植体在农杆菌侵染前进行3d的预培养。农杆菌的浸染浓度为OD600=0.2~0.4。共培养时的pH值为5.2。在转化后的分化培养基中附加30μmol/LAgNO3。 展开更多
关键词 下胚轴 农杆菌介导法 杆菌介导转化 遗传转化体系 甘蓝型油菜 分化培养基 外植体 预培养 pH值 共培养 mol 侵染
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农杆菌介导法获得草地早熟禾抗病虫转基因植株 被引量:2
17
作者 佘建明 张保龙 陈志一 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第1期44-44,共1页
关键词 农杆菌介导法 抗病虫 草地早熟禾 转基因植株 江苏省业科学院 抗虫 草坪 科技厅 重点学科 课题
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农杆菌介导法马铃薯遗传转化体系的优化 被引量:8
18
作者 杨永智 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期738-742,共5页
以马铃薯品种高原4号为材料,建立了一套稳定高效的农杆菌EHA105介导的马铃薯遗传转化体系,这个体系包括:IM(MS+20 g/L蔗糖)培养基为浸染培养基,以MGC(MS+16 g/L蔗糖+5.0 mg/L NAA+0.1 mg/L BA+400.0 mg/L头孢霉素+10.0 mg/L潮霉素+8 g/... 以马铃薯品种高原4号为材料,建立了一套稳定高效的农杆菌EHA105介导的马铃薯遗传转化体系,这个体系包括:IM(MS+20 g/L蔗糖)培养基为浸染培养基,以MGC(MS+16 g/L蔗糖+5.0 mg/L NAA+0.1 mg/L BA+400.0 mg/L头孢霉素+10.0 mg/L潮霉素+8 g/L琼脂)培养基为诱导愈伤组织培养基,以MGS培养基(MS+16 g/L蔗糖+2.20 mg/L玉米素+0.02 mg/L NAA+0.15 mg/L GA3+400.00 mg/L头孢霉素+10.00 mg/L潮霉素+8 g/L琼脂)为芽分化诱导培养基,以RM培养基(MS+20 g/L蔗糖+400 mg/L头孢霉素+10 mg/L潮霉素+8g/L琼脂)为生根培养基。优化后的转化体系转化效率稳定,两个不同载体(PLRV-1和PLRV-2)抗性愈伤组织的诱导率分别达到59.3%和64.4%,抗性芽的分化率分别达到56.9%和62.5%。 展开更多
关键词 马铃薯 农杆菌介导法 遗传转化
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农杆菌介导法在橡胶树遗传转化中的应用与展望 被引量:1
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作者 邹智 杨礼富 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期60-69,共10页
综述农杆菌介导法在巴西橡胶树遗传转化中的应用进展,分析影响农杆菌转化的关键因素,如植物基因型与外植体、菌株与载体类型、菌液浓度与侵染时间、vir诱导物、筛选剂与抑菌剂、培养基的组成和附加成分等,并对提高巴西橡胶树转化效率的... 综述农杆菌介导法在巴西橡胶树遗传转化中的应用进展,分析影响农杆菌转化的关键因素,如植物基因型与外植体、菌株与载体类型、菌液浓度与侵染时间、vir诱导物、筛选剂与抑菌剂、培养基的组成和附加成分等,并对提高巴西橡胶树转化效率的策略进行探讨。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 根癌杆菌 遗传转化 农杆菌介导法
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农杆菌介导法构建里氏木霉ura3基因突变体的研究 被引量:3
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作者 闫作梅 张旭 李杰 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期147-153,共7页
构建了ura3缺失基因载体pEMT-△ura3,采用农杆菌介导法转化里氏木霉QM9414,在含尿嘧啶核苷(1.87 mg.mL-1)和五氟乳氰酸(5-FOA,5 mg.mL-1)的筛选培养基上筛选转化子,经表型验证和PCR检测,获得ura3基因缺失突变体1株,ura3基因的同源重组率... 构建了ura3缺失基因载体pEMT-△ura3,采用农杆菌介导法转化里氏木霉QM9414,在含尿嘧啶核苷(1.87 mg.mL-1)和五氟乳氰酸(5-FOA,5 mg.mL-1)的筛选培养基上筛选转化子,经表型验证和PCR检测,获得ura3基因缺失突变体1株,ura3基因的同源重组率为16.6%。采用农杆菌介导法将黑曲霉的pyrA基因导入ura3基因缺失突变体中,使其回复野生型表型,从而建立了以pyrA基因作为筛选标记的里氏木霉受体菌株。 展开更多
关键词 营养缺陷型 农杆菌介导法 同源重组 ura3基因
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