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RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响
被引量：
1
1
作者
周群燕
陆晓凤
+1 位作者
王良静
姒健敏
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期499-505,共7页
目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响。方法:根据RegIαcDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的...
目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响。方法:根据RegIαcDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致。将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株。通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化。结果:成功构建RegIαcDNA的全序列表达质粒。RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05)。结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力。
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关键词
胃肿瘤
再生/遗传学
细胞系
肿瘤
逆转录聚合酶链反应
遗传
载体
质粒
细胞凋亡
细胞增殖
转染
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职称材料
小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响
被引量：
1
2
作者
陆晓凤
王良静
+1 位作者
周群燕
姒健敏
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期57-63,共7页
目的:探讨小RNA干扰(small interfering RNA,RNAi)对胃癌细胞株RegIα基因表达的抑制作用及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测6株胃癌细胞的RegIα基因mRNA表达水平;体外构建RegIα基因小RNA干扰的重组质粒,分别稳定转染RegIα...
目的:探讨小RNA干扰(small interfering RNA,RNAi)对胃癌细胞株RegIα基因表达的抑制作用及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测6株胃癌细胞的RegIα基因mRNA表达水平;体外构建RegIα基因小RNA干扰的重组质粒,分别稳定转染RegIα高表达细胞株MKN45和AGS,并设空载体作为对照组;应用RT-PCR和Western blot测定转染后细胞RegIα基因及其蛋白的表达水平;应用MTT法和流式细胞仪检测RegIα小RNA干扰对细胞增殖抑制率和凋亡的影响。结果:RT-PCR显示:与空载体组相比,转染RegIα小RNA干扰质粒后,MKN45和AGS细胞的RegIαmRNA明显被抑制;Western blot结果显示:MKN45和AGS细胞的RegIα蛋白表达水平分别降低至空载体组的(44±4)%和(25±4)%;MTT结果显示:RegIα小RNA干扰后MKN45和AGS细胞增殖均受到抑制,凋亡率分别为(12.96±0.50)%和(11.59±1.10)%,与空载体组比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小RNA干扰可有效抑制胃癌细胞株中RegIα基因的表达,具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的重要作用。
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关键词
RNA
小分子干扰
再生/遗传学
基因表达
胃肿瘤
遗传
载体
质粒
细胞凋亡
细胞增殖
转染
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职称材料
题名
RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响
被引量：
1
1
作者
周群燕
陆晓凤
王良静
姒健敏
机构
浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室
浙江大学医学院附属第二医院消化内科
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期499-505,共7页
基金
浙江省自然科学基金(Y206280)
浙江省教育厅科研项目(Y20070071)
文摘
目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响。方法:根据RegIαcDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致。将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株。通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化。结果:成功构建RegIαcDNA的全序列表达质粒。RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05)。结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力。
关键词
胃肿瘤
再生/遗传学
细胞系
肿瘤
逆转录聚合酶链反应
遗传
载体
质粒
细胞凋亡
细胞增殖
转染
Keywords
Stomach neoplasms
Regeneration/gene
Cell line
tumor
Reverse transcriptase polymerase chain reaction
Genetic vectors
Plasmids
Apoptosis
Cell proliferation
Transfection
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响
被引量：
1
2
作者
陆晓凤
王良静
周群燕
姒健敏
机构
浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室浙江省生物治疗重点实验室
浙江大学医学院附属第二医院消化科
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期57-63,共7页
基金
浙江省自然科学基金(Y206280)
浙江省教育厅科研项目(Y20070071)
文摘
目的:探讨小RNA干扰(small interfering RNA,RNAi)对胃癌细胞株RegIα基因表达的抑制作用及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测6株胃癌细胞的RegIα基因mRNA表达水平;体外构建RegIα基因小RNA干扰的重组质粒,分别稳定转染RegIα高表达细胞株MKN45和AGS,并设空载体作为对照组;应用RT-PCR和Western blot测定转染后细胞RegIα基因及其蛋白的表达水平;应用MTT法和流式细胞仪检测RegIα小RNA干扰对细胞增殖抑制率和凋亡的影响。结果:RT-PCR显示:与空载体组相比,转染RegIα小RNA干扰质粒后,MKN45和AGS细胞的RegIαmRNA明显被抑制;Western blot结果显示:MKN45和AGS细胞的RegIα蛋白表达水平分别降低至空载体组的(44±4)%和(25±4)%;MTT结果显示:RegIα小RNA干扰后MKN45和AGS细胞增殖均受到抑制,凋亡率分别为(12.96±0.50)%和(11.59±1.10)%,与空载体组比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小RNA干扰可有效抑制胃癌细胞株中RegIα基因的表达,具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的重要作用。
关键词
RNA
小分子干扰
再生/遗传学
基因表达
胃肿瘤
遗传
载体
质粒
细胞凋亡
细胞增殖
转染
Keywords
RNA
small interfering
Regeneration/genet
Gene expression
Stomach neoplasms
Genetic vectors
Plasmids
Apoptosis
Cell proliferation
Transfection
分类号
R735.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
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发文年
被引量
操作
1
RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响
周群燕
陆晓凤
王良静
姒健敏
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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职称材料
2
小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响
陆晓凤
王良静
周群燕
姒健敏
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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