目的·探讨沉默信息调节因子2相关酶5(sirtuin 5,SIRT5)在脓毒症肺血管内皮细胞损伤中的作用及机制。方法·对野生型(wild-type,WT)和Sirt5基因敲除的C57BL/6雄性小鼠行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),对小...目的·探讨沉默信息调节因子2相关酶5(sirtuin 5,SIRT5)在脓毒症肺血管内皮细胞损伤中的作用及机制。方法·对野生型(wild-type,WT)和Sirt5基因敲除的C57BL/6雄性小鼠行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),对小鼠安乐死后进行肺组织取材。苏木精-伊红(hematoxylin and eosin staining,H-E)染色评估肺组织炎症水平;伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血管渗漏;肺组织免疫荧光染色评估小鼠凝血功能改变情况;采用免疫组化染色检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白表达,评估CLP小鼠内皮细胞炎症水平。采用基因编辑技术对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)SIRT5基因进行敲减或者过表达,并使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激诱导内皮细胞炎症。采用蛋白质印迹法检测VCAM-1、组织因子(tissue factor,TF)等内皮细胞损伤标志物,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、IL-1β等炎症指标。对SIRT5过表达的HUVEC进行转录组测序,并通过qPCR验证关键基因如F2R样凝血酶或胰蛋白酶受体3(F2R like thrombin or trypsin receptor 3,F2RL3)或serpin家族成员3(serpin family A member 3,SERPINA3)以及转化生长因子-β2/3(transforming growth factorβ2/3,TGF-β2/3)的表达。结果·Sirt5基因敲除显著加重CLP小鼠肺损伤,使其生存率降低(P<0.001);H-E染色显示小鼠肺组织炎症浸润增加,EB染色观察到血管渗漏增加(P<0.001),免疫荧光染色可见纤维蛋白原沉积升高。SIRT5基因敲减的HUVEC中VCAM-1、TF蛋白及IL-6、IL-1β、VCAM-1、E选择素(E-selectin)等炎症因子mRNA表达上调(均P<0.001),而SIRT5过表达可逆转此效应。转录组测序分析表明SIRT5通过抑制F2RL3/SERPINA3/TGF-β通路调控内皮炎症与凝血反应。结论·SIRT5通过负向调控F2RL3/SERPINA3/TGF-β信号轴减轻内皮炎症及促凝血反应,提示其在脓毒症肺损伤中的潜在保护作用。展开更多
文摘目的·探讨沉默信息调节因子2相关酶5(sirtuin 5,SIRT5)在脓毒症肺血管内皮细胞损伤中的作用及机制。方法·对野生型(wild-type,WT)和Sirt5基因敲除的C57BL/6雄性小鼠行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),对小鼠安乐死后进行肺组织取材。苏木精-伊红(hematoxylin and eosin staining,H-E)染色评估肺组织炎症水平;伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血管渗漏;肺组织免疫荧光染色评估小鼠凝血功能改变情况;采用免疫组化染色检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白表达,评估CLP小鼠内皮细胞炎症水平。采用基因编辑技术对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)SIRT5基因进行敲减或者过表达,并使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激诱导内皮细胞炎症。采用蛋白质印迹法检测VCAM-1、组织因子(tissue factor,TF)等内皮细胞损伤标志物,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、IL-1β等炎症指标。对SIRT5过表达的HUVEC进行转录组测序,并通过qPCR验证关键基因如F2R样凝血酶或胰蛋白酶受体3(F2R like thrombin or trypsin receptor 3,F2RL3)或serpin家族成员3(serpin family A member 3,SERPINA3)以及转化生长因子-β2/3(transforming growth factorβ2/3,TGF-β2/3)的表达。结果·Sirt5基因敲除显著加重CLP小鼠肺损伤,使其生存率降低(P<0.001);H-E染色显示小鼠肺组织炎症浸润增加,EB染色观察到血管渗漏增加(P<0.001),免疫荧光染色可见纤维蛋白原沉积升高。SIRT5基因敲减的HUVEC中VCAM-1、TF蛋白及IL-6、IL-1β、VCAM-1、E选择素(E-selectin)等炎症因子mRNA表达上调(均P<0.001),而SIRT5过表达可逆转此效应。转录组测序分析表明SIRT5通过抑制F2RL3/SERPINA3/TGF-β通路调控内皮炎症与凝血反应。结论·SIRT5通过负向调控F2RL3/SERPINA3/TGF-β信号轴减轻内皮炎症及促凝血反应,提示其在脓毒症肺损伤中的潜在保护作用。
