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Streptomyces lavendulae X33遗传转化体系的建立及其内源性启动子活性的比较
被引量：
1
1
作者
孙亚楠
王园秀
+2 位作者
丁忠涛
张斌
吴晓玉
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期1250-1260,共11页
【目的】通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性,为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础。【方法】以携带整合型质...
【目的】通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性,为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础。【方法】以携带整合型质粒pIB139的大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)为供体菌、菌株X33为受体菌进行接合转移;对影响接合转移效率的关键因素(接合转移培养基、热激温度、预萌发时间、供受体比例及抗生素覆盖时间等)进行优化;以质粒pIB139为骨架、β-葡萄糖苷酶(GUS)为报告基因构建启动子活性检测载体,分析4个内源性启动子及permE的启动活性。【结果】通过接合转移方法成功建立了菌株X33的遗传转化体系,其最佳接合转移条件为:孢子于55℃热激10 min,预萌发1 h,供、受体比例为10∶1,以高氏一号为接合转移培养基,混合培养12 h后覆盖抗生素,接合转移效率可达5.8×10^(-5);启动子活性分析表明:链霉菌常用启动子permE的启动活性远高于4个内源性启动子P116、P4565、P5092、P5500。【结论】建立及优化了菌株X33的遗传转化体系,确定了启动子permE在菌株X33中的启动活性。
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关键词
淡紫灰链霉菌X33
接合转移效率
遗传转化体系
内源性启动子
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职称材料
利用REF启动子构建橡胶树乳管特异表达载体及GUS基因的瞬时表达
被引量：
4
2
作者
丛明
凌华
+2 位作者
黄惠琴
吕家森
鲍时翔
《热带作物学报》
CSCD
2005年第2期29-33,共5页
采用SDS法提取橡胶树基因组DNA,用2套引物进行PCR扩增,得到2条REF条带,它们与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.9%,98.4%。用克隆得到的REF片段分别替换载体质粒pBI121中的CaMV35S启动子,得到利用橡胶内源性启动子构建的橡胶树REF...
采用SDS法提取橡胶树基因组DNA,用2套引物进行PCR扩增,得到2条REF条带,它们与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.9%,98.4%。用克隆得到的REF片段分别替换载体质粒pBI121中的CaMV35S启动子,得到利用橡胶内源性启动子构建的橡胶树REF启动子瞬时表达载体(pBIR1和pBIR2)。用基因枪法转化橡胶树组培苗叶片后,GUS组织化学检测显示叶脉为GUS染色阳性。研究中发现,长度为306bp的REF启动子片段可以实现REF启动子的全部功能。从而成功地构建了橡胶树乳管瞬时表达载体,为外源基因的橡胶树乳管特异表达载体的构建打下了基础。
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关键词
橡胶树
内源性启动子
乳管特异
瞬时表达
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职称材料
题名
Streptomyces lavendulae X33遗传转化体系的建立及其内源性启动子活性的比较
被引量：
1
1
作者
孙亚楠
王园秀
丁忠涛
张斌
吴晓玉
机构
江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室
江西省果蔬采后处理关键技术及质量安全协同创新中心
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期1250-1260,共11页
基金
江西省重点研发计划项目(20171ACF60006)。
文摘
【目的】通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性,为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础。【方法】以携带整合型质粒pIB139的大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)为供体菌、菌株X33为受体菌进行接合转移;对影响接合转移效率的关键因素(接合转移培养基、热激温度、预萌发时间、供受体比例及抗生素覆盖时间等)进行优化;以质粒pIB139为骨架、β-葡萄糖苷酶(GUS)为报告基因构建启动子活性检测载体,分析4个内源性启动子及permE的启动活性。【结果】通过接合转移方法成功建立了菌株X33的遗传转化体系,其最佳接合转移条件为:孢子于55℃热激10 min,预萌发1 h,供、受体比例为10∶1,以高氏一号为接合转移培养基,混合培养12 h后覆盖抗生素,接合转移效率可达5.8×10^(-5);启动子活性分析表明:链霉菌常用启动子permE的启动活性远高于4个内源性启动子P116、P4565、P5092、P5500。【结论】建立及优化了菌株X33的遗传转化体系,确定了启动子permE在菌株X33中的启动活性。
关键词
淡紫灰链霉菌X33
接合转移效率
遗传转化体系
内源性启动子
Keywords
Streptomyces lavendulaeX33
conjugation transfer efficiency
genetic transformation system
endogenous promoter
分类号
S436.66 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
利用REF启动子构建橡胶树乳管特异表达载体及GUS基因的瞬时表达
被引量：
4
2
作者
丛明
凌华
黄惠琴
吕家森
鲍时翔
机构
中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
出处
《热带作物学报》
CSCD
2005年第2期29-33,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30160034)
文摘
采用SDS法提取橡胶树基因组DNA,用2套引物进行PCR扩增,得到2条REF条带,它们与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.9%,98.4%。用克隆得到的REF片段分别替换载体质粒pBI121中的CaMV35S启动子,得到利用橡胶内源性启动子构建的橡胶树REF启动子瞬时表达载体(pBIR1和pBIR2)。用基因枪法转化橡胶树组培苗叶片后,GUS组织化学检测显示叶脉为GUS染色阳性。研究中发现,长度为306bp的REF启动子片段可以实现REF启动子的全部功能。从而成功地构建了橡胶树乳管瞬时表达载体,为外源基因的橡胶树乳管特异表达载体的构建打下了基础。
关键词
橡胶树
内源性启动子
乳管特异
瞬时表达
Keywords
Hevea brasiliensis native-promoter specific to laticiferous tube transient expression
分类号
S794.101 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Streptomyces lavendulae X33遗传转化体系的建立及其内源性启动子活性的比较
孙亚楠
王园秀
丁忠涛
张斌
吴晓玉
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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职称材料
2
利用REF启动子构建橡胶树乳管特异表达载体及GUS基因的瞬时表达
丛明
凌华
黄惠琴
吕家森
鲍时翔
《热带作物学报》
CSCD
2005
4
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职称材料
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