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肝癌患者肝组织中乙肝病毒共价闭合环状DNA表达水平及与e抗原相关性研究 被引量:3
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作者 黄瑶 罗璇 +2 位作者 陈彦猛 黄爱龙 胡源 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1430-1433,共4页
目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:... 目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:运用特异性荧光定量探针法检测了26例HBV感染的肝癌患者中HBV cccDNA和HBV DNA的表达水平,进一步分析这两种病毒因子在HBeAg阳性和HBeAg阴性样本中的表达差别以及与HBeAg状态的关系。结果:HBV cccDNA和HBV DNA在HBeAg阴性组的表达水平均显著低于HBeAg阳性组(P值分别为0.044和0.0214),同时,在HBeAg阴性组中,cccDNA的表达水平与DNA是显著正相关的(r=0.918,P=0.000);HBeAg阳性组中cccDNA与DNA是较弱的正相关关系,且不具有显著性(r=0.591,P=0.072)。结论:肝内cccDNA与DNA表达水平与HBeAg的状态是密切相关的,HBeAg阴性的HCC患者中病毒复制水平下降的原因主要是cccDNA水平的下降。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 肝癌 共价闭合环状dna 乙肝病毒E抗原
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环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA) 被引量:1
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作者 周冬青 刘成永 +7 位作者 王骥 王春颖 张克球 刘加彬 黄海滨 候远沛 成松 王鑫 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期245-249,共5页
目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用... 目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用质粒安全ATP依赖性DNA酶(plasmid-safe ATP-dependent DNase,PSAD)消化,去除非cccDNA后,加入引物及Bst DNA酶进行环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),将检测结果与临床实验室资料结合并进行分析,以判断其临床应用价值。结果 30例HBV感染患者中,有17例HBV cccDNA阳性,阳性检测率56.67%。其中肝癌5例、肝硬化4例、重型乙型肝炎5例、慢性乙型肝炎(轻-中度)3例。提示肝组织HBV cccDNA阳性可能与疾病进展密切相关,与血清HBV cccDNA阳性有一定的相关性,与乙型肝炎病毒血清免疫标志物以及肝功能状况无明显相关。结论 LAMP法能检测到石蜡包埋肝组织中的HBV cccDNA,结合临床实验室资料,对判断抗病毒药物疗效及研究乙型肝炎致病机制具有一定的意义。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 乙型肝炎病毒(HBV) 共价闭合环状dna(cccdna)
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利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型
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作者 严磊 赵婷婷 +4 位作者 王会娟 李小松 黄爱龙 谭毅 赖国旗 《四川动物》 北大核心 2015年第2期200-207,共8页
目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收... 目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P<0.01);肝组织中HBV DNA拷贝数高于同期血清中的拷贝数(P<0.01);实验组和对照组的肝组织中均有HBsAg和HBc Ag的表达;实验组与对照组出现肝脏细胞炎症、肝细胞纤维化、肝细胞坏死等病理变化,而空白组正常。结论利用水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 HBV共价闭合环状dna 水动力法 小鼠模型
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体外培养细胞内乙肝病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立 被引量:2
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作者 黄荣 陈江燕 +2 位作者 胡接力 罗英英 黄爱龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1393-1397,共5页
目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法。方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hir... 目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法。方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hirt法分别提取细胞内的去蛋白DNA(protein-free DNA,PF DNA),经加热变性处理,EcoRⅠ酶切,然后用Southern blot检测HBV cccDNA;用同样方法检测不同培养时间的HepAD38细胞内cccDNA,观察培养时间对cccDNA积累量的影响。结果:用Southern blot可在HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞中检测到HBV复制中间体;Hirt法提取物经变性和酶切处理,可有效地将cccDNA与其他形式HBV DNA区分开;HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞内均可检测到HBV cccDNA;HepAD38细胞在铺满后继续培养的时间较长时,其细胞内cccDNA的量较多。结论:成功建立了体外培养细胞内HBV cccDNA检测方法,该方法结合Hirt提取法和地高辛探针Southern blot方法,能可靠、准确地检测HBV cccDNA。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna SOUTHERN BLOT
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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究现状及进展 被引量:6
5
作者 刘艳瑾 冯丽英 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第22期2084-2087,共4页
目前,乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种不能被治愈的疾病。乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV前基因组复制的原始模板,是导致HBV持续感染的关键因素。本文参考近几年的临床与动物实验结果,就HBV cccDNA的研究现状及进展做一综述。
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 肝炎 慢性
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靶向共价闭合环状DNA抗HBV治疗的研究进展 被引量:1
6
作者 王艺颖 刘熙称 +1 位作者 朴荣利 秦俊杰 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期1189-1192,共4页
HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担。共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不... HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担。共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不复存在。介绍了通过基因编辑、表观遗传修饰等方法靶向共价闭合环状DNA,以期完全性治愈HBV感染。 展开更多
关键词 共价闭合环状dna 乙型肝炎病毒 基因编辑
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重组HBV共价闭合环状DNA在小鼠模型中长期持留并诱导慢性肝炎
7
作者 邓强 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期345-345,共1页
【据《Hepatology》2018年1月报道】题:重组HBV共价闭合环状DNA在小鼠模型中长期持留并诱导慢性肝炎(作者Li G等) HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是病毒持续感染的分子基础。研究者早先发展了一种基于位点特异性重组,诱导HBV重组ccc... 【据《Hepatology》2018年1月报道】题:重组HBV共价闭合环状DNA在小鼠模型中长期持留并诱导慢性肝炎(作者Li G等) HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是病毒持续感染的分子基础。研究者早先发展了一种基于位点特异性重组,诱导HBV重组cccDNA(rcccDNA)产生的策略。通过尾静脉高压注射,rcccDNA能够诱导免疫机能正常小鼠模型中短暂延长的病毒抗原血症,类似于HBV急性感染的疾病过程。 展开更多
关键词 共价闭合环状dna 特异性重组 小鼠模型 慢性肝炎 HBV HEPATOLOGY 病毒持续感染 病毒抗原血症
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HBV相关慢加急性肝衰竭恢复期患者肝组织HBV cccDNA水平及其临床意义
8
作者 蔡哲凯 徐龙 +4 位作者 刘文丽 肖影群 钟青梅 张伟 吴敏 《临床肝胆病杂志》 北大核心 2025年第1期57-62,共6页
目的观察HBV cccDNA在HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)恢复期患者肝组织中的表达水平,并探讨其与HBV标志物、肝组织病理改变的关系。方法选取2015年1月—2023年10月在南昌市第九医院住院的HBV-ACLF恢复期患者30例为肝衰竭组,另选取同期... 目的观察HBV cccDNA在HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)恢复期患者肝组织中的表达水平,并探讨其与HBV标志物、肝组织病理改变的关系。方法选取2015年1月—2023年10月在南昌市第九医院住院的HBV-ACLF恢复期患者30例为肝衰竭组,另选取同期9例性别及年龄匹配的慢性乙型肝炎患者(CHB)作为对照组,检测肝组织HBV cccDNA水平,并分析其与临床资料、实验室检查指标的关联性。计量资料两组间比较采用成组t检验或Mann-Whitney U检验;多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验。计数资料组间比较采用Fisher精确检验。相关性分析采用Spearman相关分析。结果肝衰竭组肝组织HBV cccDNA水平显著低于对照组[(−0.92±0.70)log10 copies/cell vs(−0.13±0.91)log10 copies/cell,t=2.761,P=0.009]。肝衰竭组中,血清HBeAg阳性与阴性患者肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);肝组织炎症活动度G0~G2级、G3级、G4级患者的肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);肝组织纤维化程度S0~S2期、S3期、S4期患者的肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);血清HBV DNA阴性与血清HBV DNA阳性患者肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肝衰竭组肝组织HBV cccDNA水平与肝组织HBV DNA水平呈正相关(r=0.426,P=0.043),与血清HBV DNA水平无明显相关性(P>0.05)。结论肝组织HBV cccDNA水平在HBV-ACLF恢复期明显降低,肝组织HBV cccDNA持续稳定存在,较血清及肝组织HBV DNA更能反映HBV的持续感染与复制。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 慢加急性肝功能衰竭 恢复期 共价闭合环状dna
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滚环扩增在乙型肝炎病毒cccDNA检测中的应用 被引量:15
9
作者 任晓强 苏何玲 +6 位作者 邹正升 高峰 刘立明 刘妍 李保森 徐东平 钟彦伟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期675-678,共4页
目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链... 目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链结合。在Phi29DNA聚合酶的作用下,获得线性多拷贝cccDNA扩增产物,以该产物为模板获得cccDNA全序列;通过对模板的系列稀释鉴定RCA方法的灵敏度;以RCA产物为模板扩增肝组织cccDNA的反转录酶区基因,并与同时扩增的同时间采集的同一患者血清中的rcDNA序列进行比较。结果成功建立了HBVcccDNA全序列的RCA方法,最低可检测到10个拷贝的cccDNA分子,并获得了所有扩增cccDNA的全基因序列。27例患者中,18例患者的肝组织cccDNA和血清rcDNA反转录酶区的序列完全一致,9例患者中共检出84个不同的核苷酸位点,平均每个患者9.3个,84个不同核苷酸中只有5个引起了氨基酸的改变。结论滚环扩增方法对肝组织HBVcccDNA的检测具有较好的灵敏度。该方法的建立对深入了解cccDNA在HBV致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效有重要意义。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 滚环扩增 共价闭合环状dna
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HBV感染者血清中HBVcccDNA、HBeAg及HBV DNA的关系 被引量:11
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作者 吕其军 魏秀桂 +3 位作者 聂伟 李毅 田永刚 黄黎 《临床肝胆病杂志》 CAS 2005年第4期202-203,共2页
探讨HBV感染者血清HBVcccDNA与血清HBV DNA及HBeAg的关系。分别以PCR分子信标技术和ELISA方法对非HBV相关肝炎、HBV健康携带者、急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化、乙肝患者血清中HBVcccDNA HBV DNA含量及HBeAg进行了... 探讨HBV感染者血清HBVcccDNA与血清HBV DNA及HBeAg的关系。分别以PCR分子信标技术和ELISA方法对非HBV相关肝炎、HBV健康携带者、急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化、乙肝患者血清中HBVcccDNA HBV DNA含量及HBeAg进行了检测。HBVcccDNA仅见于HBVDNA阳性血清中;HBeAg阳性组的HBVcccDNA阳性率显著高于HBeAg阴性组(P<0.05):145例HBVDNA阳性患者中,HBVcccDNA阳性组HBVD- NA水平显著高于HBVcccDNA阴性组(P<0.01)。血清HBVcccDNA可能是乙肝病毒在患者体内大量复制的血清标志。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 血清学
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乙型肝炎病毒感染相关性肝癌中HBV cccDNA水平与突变关系的研究 被引量:15
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作者 罗璇 黄瑶 +2 位作者 陈彦猛 黄爱龙 胡源 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期552-556,共5页
目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌... 目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌旁组织中乙肝病毒复制水平的表征因子HBV ccc DNA,HBV total DNA及前基因组RNA(pregenome RNA,pg RNA)的表达水平,再用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)特异性扩增癌组织中HBV ccc DNA,测序分析了病毒基因组4个编码调控区域pre C/C、RT、X、pre S中ccc DNA序列的突变。最后检测了肿瘤组织ccc DNA的AP位点。结果:HBV ccc DNA在癌组织的表达水平明显低于癌旁组织(3.32 copies/cell vs.9.64 copies/cell,P=0.029),但是HBV总DNA和pg RNA的表达没有明显差异(16.94 copies/cell vs.12.18 copies/cell,P=0.325,75.54 copies/cell vs.22.46 copies/cell,P=0.128);在肝癌组织中,HBV ccc DNA pre C/C和X区间,G-A突变是主要的突变类型;其次,pre C/C和X区域发生G-A突变的位置上,均更倾向于GA二联核苷酸组合方式,在肝癌中所占比例为37.1%和40%。最后,肿瘤组织中APE1酶处理后,HBV ccc DNA水平明显下降(1 011 copies/μl vs.501.8 copies/μl,P=0.058)。结论:HBV ccc DNA水平在癌组织中明显低于癌旁组织,可能与癌组织中HBV ccc DNA发生大量GA突变及形成的AP位点有关。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 肝癌 HBV共价闭合环状dna 序列突变
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人工肝支持系统对重型乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA影响的初步研究 被引量:7
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作者 杨培 秦波 +1 位作者 单幼兰 刘杞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期1463-1466,共4页
目的:建立HBV cccDNA荧光定量PCR方法并检测重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清中HBVcccDNA含量。初步探索人工肝支持系统对重型乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA的影响。方法:以50例重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清... 目的:建立HBV cccDNA荧光定量PCR方法并检测重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清中HBVcccDNA含量。初步探索人工肝支持系统对重型乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA的影响。方法:以50例重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清作为检测标本,对血清中总HBV DNA、HBV cccDNA含量进行定量检测。用SAS8.0统计软件对结果进行统计学分析。结果:成功建立定量检测HBV cccDNA方法并证实在重型乙型肝炎患者血清中存在HBV cccDNA。在人工肝血浆置换前后总HBV DNA及HBV cccDNA含量明显降低(P<0.05)。总HBV DNA与HBV cccDNA之间有较好的相关性(r=0.78,P<0.01)。总HBV DNA水平与PT(r=0.37,P<0.01)、ALT(r=0.29,P<0.05)、AST(r=0.39,P<0.01)水平有一定的相关性;HBV cccDNA水平与PT(r=0.34,P<0.05)、ALT(r=0.34,P<0.05)、AST(r=0.40,P<0.01)水平有一定的相关性。结论:总HBV DNA及HBV cccDNA在一定程度上能够反映肝细胞坏死程度;血浆置换术后病毒含量明显降低,为进一步研究重型乙型肝炎治疗途径及发病机制打下基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 荧光定量PCR 重型乙型肝炎 人工肝支持系统
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干扰素和核苷(酸)类似物治疗对HBV cccDNA的影响与慢性乙型肝炎的功能性治愈 被引量:17
13
作者 陈捷亮 袁正宏 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期1181-1187,共7页
目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈... 目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈的关键核心。鉴于cccDNA很难被彻底清除,近年来以cccDNA持续沉默为基础的慢性乙型肝炎功能性治愈已成为临床和基础研究的主要目标。从现有治疗手段对cccDNA的影响切入,介绍当前对cccDNA含量和活性受控因素的认知,探讨cccDNA池难以清除的关键特性环节,在此基础上展望功能性治愈慢性乙型肝炎目标下研究cccDNA的重点。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 抗病毒药 共价闭合环状dna
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乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA和HBVcccDNA定量检测 被引量:3
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作者 钟艳丹 谭德明 +3 位作者 李涛 刘国珍 徐旭雯 刘菲 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第5期292-296,共5页
目的通过对外周血单个核细胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒,用双蒸水连续10倍梯度稀释,建立浓度为3×10^2~... 目的通过对外周血单个核细胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒,用双蒸水连续10倍梯度稀释,建立浓度为3×10^2~3×10^5拷贝/mL PGM-HBV标准系列;常规分离全血中的PB-MCs,提取DNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMCs中HBV DNA和HBVcccDNA。结果78例慢性乙型肝炎患者,PBMCs中HBVcccDNA阳性31例(39.74%)。HBVcccDNA与血清和PBMCs中HBV DNA阳性率和滴度有良好的一致性。但在不同临床类型的乙型肝炎患者之间,PBMCs中HBVcccDNA的检出率无差别(P〉0.05)。结论根据HBVcccDNA检测结果阳性,进一步证实HBV能感染PBMCs,并在其中复制;PBMCs中HBVcccDNA阳性与疾病的炎症活动和疾病的严重性无关。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 外周血单个核细胞 肝炎 乙型 慢性
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一种高特异性和灵敏性的HBV cccDNA检测方案研究 被引量:2
15
作者 陈敏 王永忠 +1 位作者 江培学 张继明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期2127-2129,共3页
目的建立一种TaqMan探针的实时PCR检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)方案。方法根据rcDNA与cccDNA结构差异,在缺口两侧设计引物,应用TaqMan探针分析,加入1种可以去除rcDNA和部分扩增产物的依赖ATP的内切酶(Plasmid-Safe ATP-depe... 目的建立一种TaqMan探针的实时PCR检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)方案。方法根据rcDNA与cccDNA结构差异,在缺口两侧设计引物,应用TaqMan探针分析,加入1种可以去除rcDNA和部分扩增产物的依赖ATP的内切酶(Plasmid-Safe ATP-dependent DNase)。结果通过高速离心获得病毒单质颗粒验证了该方案的特异性;通过克隆和酶切得到3.2 kb的环状DNA验证了方案的灵敏性。乙肝患者血清、肝组织cccDNA占总HBV DNA的比例分别为0.03%~0.81%、0.4%~28.0%。结论成功地建立了以TaqMan探针检测血清和肝组织HBV cccDNA的实时PCR检测方法。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna 病毒单质颗粒 肝组织 血清
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血清乙肝病毒cccDNA检测的临床分析 被引量:2
16
作者 陈伟 张晓峰 +1 位作者 刘群英 肖华龙 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1448-1450,共3页
目的:探讨血清中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)全序列的PCR检测与HBV复制及肝细胞损伤的临床相关性。方法:用长链PCR方法对乙型肝炎患者血清进行HBV cccDNA全序列直接扩增,同时检测血清中乙型肝炎病毒前S1(PreS1)抗原和丙... 目的:探讨血清中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)全序列的PCR检测与HBV复制及肝细胞损伤的临床相关性。方法:用长链PCR方法对乙型肝炎患者血清进行HBV cccDNA全序列直接扩增,同时检测血清中乙型肝炎病毒前S1(PreS1)抗原和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性。结果:cccDNA和PreS1抗原在乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性血清中检出率分别为43.94%(29/66)和83.33%(55/66),在HBeAg阴性血清中的检出率分别为13.33%(4/30)和30.00%(9/30);cccDNA阳性血清的PreS1抗原阳性率和ALT活性升高分别为90.91%(30/33)和93.94%(31/33),cccDNA阴性血清的PreS1抗原阳性率和ALT活性升高分别为53.97%(34/63)和41.27%(26/63)。结论:血清中cccDNA的检出与PreS1抗原、HBeAg的表达以及肝细胞损伤呈高度相关性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna 前Sl抗原 E抗原 丙氨酸氨基转移酶
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改良PCR法检测外周血单个核细胞中的HBV DNA与HBVcccDNA 被引量:1
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作者 陈瑞琳 蔺淑梅 +3 位作者 张树林 叶峰 张曦 赵英仁 《临床肝胆病杂志》 CAS 2008年第5期328-331,共4页
目的检测慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV DNA的存在状况。方法采用改良PCR法检测慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA、共价闭合环状DNA(cccDNA)。结果120例慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA、cccDNA阳性检出率分别为62.50%、45.83%,HB... 目的检测慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV DNA的存在状况。方法采用改良PCR法检测慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA、共价闭合环状DNA(cccDNA)。结果120例慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA、cccDNA阳性检出率分别为62.50%、45.83%,HBV DNA阳性检出率高于cccDNA(P<0.01);其中HBeAg阳性组PBMCs中HBV DNA(80.00%)和cccDNA阳性检出率(45.00%)分别明显高于HBeAg阴性组(61.67%)(30.00%)(P均<0.01);PBMCs中HBVDNA检测阳性者血清HBVDNA水平明显高于HBVDNA检测阴性者(P<0.01)。结论改良PCR法检测表明HBV DNA不仅可感染PBMCs,且部分参与复制;PBMCs中HBVDNA存在和复制能力与HBeAg阳性相关;PBMCs中HBV DNA阳性检出率与血清HBV DNA水平有一致性。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 外周血单个核细胞 共价闭合环状dna 绿豆核酸酶
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HBV cccDNA转录调控机制与抗HBV治疗前景 被引量:2
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作者 陈娟 黄爱龙 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期1192-1196,共5页
以微染色体形式存在的HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)在肝细胞核内持续稳定的存在,被认为是HBV感染慢性化、抗病毒治疗无法清除病毒以及停药后肝炎复发的最主要原因。然而,现有各种抗病毒治疗方案中,缺少以cccDNA本身或形成、转录等环节为... 以微染色体形式存在的HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)在肝细胞核内持续稳定的存在,被认为是HBV感染慢性化、抗病毒治疗无法清除病毒以及停药后肝炎复发的最主要原因。然而,现有各种抗病毒治疗方案中,缺少以cccDNA本身或形成、转录等环节为靶点的药物,因此,靶向cccDNA环节的治疗策略是急需填补的空白。随着对cccDNA微染色体上组蛋白表观遗传修饰的逐步解析,表观遗传治疗也有望成为HBV新的潜在治疗方向。主要关注了HBV DNA甲基化和cccDNA组蛋白修饰的研究现状和发展方向,试图为HBV表观遗传治疗提供思路。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因调控网络 共价闭合环状dna 基因 修饰
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增殖细胞核抗原通过其DNA结合结构域促进乙肝病毒rcDNA向cccDNA的转化 被引量:3
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作者 袁颖 冯巾晏 +7 位作者 赵丽娜 杨光 赵曼 袁红凤 贠昊林 刘姿娴 李悦国 张晓东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1197-1204,共8页
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝癌的主要原因,消除病毒基因组中稳定的共价闭合环状DNA(cccDNA)是乙肝治疗的主要难点。HBV cccDNA的形成需要填充单链区域和闭合松弛环状DNA(rcDNA)。我们之前已报道,增殖细胞核抗原(PCNA)参与了HBV c... 慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝癌的主要原因,消除病毒基因组中稳定的共价闭合环状DNA(cccDNA)是乙肝治疗的主要难点。HBV cccDNA的形成需要填充单链区域和闭合松弛环状DNA(rcDNA)。我们之前已报道,增殖细胞核抗原(PCNA)参与了HBV cccDNA的形成。然而,HBV rcDNA向cccDNA转化的分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨PCNA参与从HBV rcDNA到HBV cccDNA的转化过程的分子机制。结果显示,CRISPR/Cas9系统敲除PCNA能显著阻止HBV rcDNA向cccDNA的转化,而过表达PCNA能够有效地拯救这一现象(P<0.001)。敲除PCNA可显著减缓HBV rcDNA向cccDNA转化的动力学(P<0.01)。在HBV rcDNA向cccDNA转化的过程中,PCNA的DNA结合域是必需的(P<0.01)。由此获得结论,PCNA通过其DNA结合结构域促进乙肝病毒从rcDNA向cccDNA的转化。在临床上,PCNA可能成为抗病毒治疗的新靶点。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 闭合松弛环状dna 共价闭合环状dna 增殖细胞核抗原 dna结合域
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靶向HBV cccDNA的药物及生物技术 被引量:1
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作者 陈然 王杰 鲁凤民 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期1188-1191,共4页
HBV感染是慢性乙型肝炎、肝硬化及肝细胞癌的主要致病因素。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的模板,能长期稳定存在于肝细胞内,是病毒持续感染的主要因素。核苷(酸)类药物和干扰素等现有的抗病毒药物均不直接靶向cccDNA,故均难以... HBV感染是慢性乙型肝炎、肝硬化及肝细胞癌的主要致病因素。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的模板,能长期稳定存在于肝细胞内,是病毒持续感染的主要因素。核苷(酸)类药物和干扰素等现有的抗病毒药物均不直接靶向cccDNA,故均难以实现慢性乙型肝炎临床治愈。随着生物技术的进步和对HBV cccDNA特性的深入了解,以靶向清除cccDNA为目标的抗病毒治疗研发日益增多,但离临床应用尚有较远的距离。简要综述了HBV cccDNA靶向药物及生物技术相关的研究进展。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna 分子靶向治疗
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