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兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定
被引量：
16
1
作者
宋艳华
魏后军
+8 位作者
范志宇
左园园
胡波
仇汝龙
陈萌萌
李明勇
薛家宾
徐为中
王芳
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第5期1117-1121,共5页
本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-...
本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-2和p MD19-T-VP60为模板,进行RT-PCR体系退火温度的优化,优化后的退火温度为58.2℃。对优化后的RT-PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验,并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品,结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段,且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒p MD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性。RHDV人工感染的组织样品检出率为100%,15份临床样品中3份为经典RHDV阳性,其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。
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关键词
兔
出血
症
病毒
经典
毒
株
(
rhdv
)
兔
出血
症
病毒
变异
毒
株
(
rhdv
2)
RT-PCR鉴定
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职称材料
四川省兔出血症病毒2型流行病学调查及遗传变异分析
被引量：
6
2
作者
李丽
陈弟诗
+5 位作者
陈斌
张毅
邓飞
邵靓
周莉媛
任永军
《中国动物检疫》
CAS
2022年第5期42-48,共7页
为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品...
为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品3825份,采用商品化荧光RT-PCR试剂盒,对以上样品进行RHDV2检测;对筛选出的12份肝组织阳性样品进行RHDV2 VP60基因RT-PCR扩增、测序和遗传进化分析。结果显示:RHDV2流行无明显季节性,各养殖品系家兔均有RHDV2感染,哺乳仔兔、幼兔、怀孕哺乳母兔死亡率分别为25%~60%、18%~45%、9%~30%。发病兔场肝脏样品RHDV2阳性检出率为88.89%(104/117),环境样品为46.09%(112/243);受监测兔场全血样品RHDV2阳性检出率为25.99%(868/3340),环境样品为16.29%(623/3825)。12份阳性样品的RHDV2 VP60基因序列长度均为1740 bp,核苷酸序列同源性为98.4%~100%,在系统发生进化树上独成一簇;与国内外参照毒株的VP60基因序列核苷酸同源性为93.7%~100%,编码的氨基酸序列同源性为95.7%~99.8%。结果表明:RHDV2已开始在四川省流行,需要加强检疫,重视饲养管理工作;其VP60基因序列出现了一定程度的变异,但遗传演化相对稳定。本研究补充了国内RHDV2的分子流行病学信息,也为该病的相关防控研究和控制对策制定提供了参考。
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关键词
兔
出血
症
病毒
2型(
rhdv
2)
流行病学调查
遗传
变异
分析
四川省
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职称材料
题名
兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定
被引量：
16
1
作者
宋艳华
魏后军
范志宇
左园园
胡波
仇汝龙
陈萌萌
李明勇
薛家宾
徐为中
王芳
机构
江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
山东青岛康大欧洲兔业育种有限公司
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第5期1117-1121,共5页
基金
江苏省自然科学基金项目(BK20140740)
现代农业产业技术体系建设专项基金项目(CARS-44)
国家自然科学基金项目(31502073)
文摘
本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-2和p MD19-T-VP60为模板,进行RT-PCR体系退火温度的优化,优化后的退火温度为58.2℃。对优化后的RT-PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验,并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品,结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段,且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒p MD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性。RHDV人工感染的组织样品检出率为100%,15份临床样品中3份为经典RHDV阳性,其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。
关键词
兔
出血
症
病毒
经典
毒
株
(
rhdv
)
兔
出血
症
病毒
变异
毒
株
(
rhdv
2)
RT-PCR鉴定
Keywords
classical
rhdv
rhdv
2
RT-PCR identification
分类号
S858.291 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
四川省兔出血症病毒2型流行病学调查及遗传变异分析
被引量：
6
2
作者
李丽
陈弟诗
陈斌
张毅
邓飞
邵靓
周莉媛
任永军
机构
四川省动物疫病预防控制中心
四川省畜牧科学研究院
出处
《中国动物检疫》
CAS
2022年第5期42-48,共7页
文摘
为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品3825份,采用商品化荧光RT-PCR试剂盒,对以上样品进行RHDV2检测;对筛选出的12份肝组织阳性样品进行RHDV2 VP60基因RT-PCR扩增、测序和遗传进化分析。结果显示:RHDV2流行无明显季节性,各养殖品系家兔均有RHDV2感染,哺乳仔兔、幼兔、怀孕哺乳母兔死亡率分别为25%~60%、18%~45%、9%~30%。发病兔场肝脏样品RHDV2阳性检出率为88.89%(104/117),环境样品为46.09%(112/243);受监测兔场全血样品RHDV2阳性检出率为25.99%(868/3340),环境样品为16.29%(623/3825)。12份阳性样品的RHDV2 VP60基因序列长度均为1740 bp,核苷酸序列同源性为98.4%~100%,在系统发生进化树上独成一簇;与国内外参照毒株的VP60基因序列核苷酸同源性为93.7%~100%,编码的氨基酸序列同源性为95.7%~99.8%。结果表明:RHDV2已开始在四川省流行,需要加强检疫,重视饲养管理工作;其VP60基因序列出现了一定程度的变异,但遗传演化相对稳定。本研究补充了国内RHDV2的分子流行病学信息,也为该病的相关防控研究和控制对策制定提供了参考。
关键词
兔
出血
症
病毒
2型(
rhdv
2)
流行病学调查
遗传
变异
分析
四川省
Keywords
rhdv
2
epidemiological investigation
genetic variation analysis
Sichuan Province
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定
宋艳华
魏后军
范志宇
左园园
胡波
仇汝龙
陈萌萌
李明勇
薛家宾
徐为中
王芳
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016
16
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职称材料
2
四川省兔出血症病毒2型流行病学调查及遗传变异分析
李丽
陈弟诗
陈斌
张毅
邓飞
邵靓
周莉媛
任永军
《中国动物检疫》
CAS
2022
6
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