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山东省某规模化兔场GI.1a型兔出血症病毒的分子特性分析
1
作者 张金叶 林仲寅 +2 位作者 李世恒 鞠燕 赵巧雅 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期29-34,共6页
2023年10月,山东省某规模化兔场(存栏2000只母兔)免疫过兔出血症(RHD)疫苗的经产母兔出现精神不振、体温升高、猝死等情况。为查明发病原因,采集4只病死兔组织进行细菌分离培养和病原核酸检测,并对检出的1份阳性样品(命名为S1001)进行... 2023年10月,山东省某规模化兔场(存栏2000只母兔)免疫过兔出血症(RHD)疫苗的经产母兔出现精神不振、体温升高、猝死等情况。为查明发病原因,采集4只病死兔组织进行细菌分离培养和病原核酸检测,并对检出的1份阳性样品(命名为S1001)进行了兔出血症病毒(RHDV)分型鉴定及遗传进化分析。结果显示:未分离到细菌,4份病料均为RHDV阳性;经测序S1001属于RHDV GI.1a基因型,其p16、p23、p29、VP10基因均属于GI.1a分支;与疫苗株(NJ株)相比,VP60基因的核苷酸同源性为95.9%,p16、p23、p29、VP10等蛋白分别存在9、18、11、2处氨基酸变化。蛋白结构预测结果显示,S1001 VP60蛋白的N端片层结构区变化明显,与参考株结构相似性为93%,TM-score为0.59(越接近于1,结构越相似)。结果说明:该兔场存在RHDV感染,感染的RHDV与疫苗株相比存在较多分子差异,蛋白构象变化有可能导致VP60蛋白抗原性发生变化。建议持续加强RHDV的遗传变异监测,及时掌握病毒变异情况,以期为新型疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 GI.1a 分子特性
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1例兔出血症病毒2型感染疫情的诊断 被引量：4
2
作者 常赵阳 刘玉梅 +3 位作者 刘潍萁 王佳宁 位兰 张自强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1886-1894,共9页
旨在了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)的感染情况,并对RHDV2的致病性进行初步分析。本研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织... 旨在了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)的感染情况,并对RHDV2的致病性进行初步分析。本研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织样本悬液能够凝集人“O”型血红细胞;RT-PCR扩增、测序及序列分析结果显示,检测到RHDV2特异性条带,片段大小为829 bp;系统进化树分析结果发现,分离的病毒与我国四川发现的首例RHDV2毒株SC2020/04的VP60基因相似性高达98.2%;临床病例的剖检显示病死兔胸腺、气管、肺、肝、脾、肾等实质性器官出血较为严重;动物回归试验发现攻毒组家兔死亡率为100%,平均死亡时间为65.8 h,RT-PCR扩增均检测到RHDV2特异性条带。本研究首次在河南兔场检测到RHDV2,为RHDV2的防控提供了科学参考。 展开更多
关键词 兔出血症病毒1型 兔出血症病毒2型 VP60基因 RT-PCR 致病力
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兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果 被引量：26
3
作者 王芳 胡波 +5 位作者 任雪枫 范志宇 杨龙圣 徐为中 张则斌 何孔旺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1382-1387,共6页
用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因，通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60，用此质粒转染Sf9昆虫细胞，得到重组病毒rAcV—Bac—VP60，经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定，结果显... 用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因，通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60，用此质粒转染Sf9昆虫细胞，得到重组病毒rAcV—Bac—VP60，经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定，结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下，用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔，结果显示，免疫后21天，兔体内可产生抗RHDV抗体，抗体血凝抑制效价为2^6～2^7，该抗体可以抵抗血凝效价为2^10致死剂量RHDV强毒的攻击，本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 重组杆状病毒 表达 免疫
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兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用 被引量：15
4
作者 胡波 魏后军 +5 位作者 王芳 范志宇 徐鹏 徐为中 薛家宾 何孔旺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1442-1446,共5页
本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法... 本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40ng·μL-1,敏感性为血凝试验(HA)的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测,结果显示,阳性样品为22份,阳性率为13.09%。试验表明:RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV,提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象,该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 RT-PCR 鼻拭子 病毒携带
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兔出血症病毒胶体金免疫层析试纸条诊断方法的建立及初步应用 被引量：18
5
作者 蔡少平 王芳 +6 位作者 贾华敏 张海彬 李超美 范志宇 胡波 熊富强 魏后军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1795-1801,共7页
为了建立一种快速、简便的兔出血症病毒(RHDV)的检测方法,用胶体金标记纯化的RHDV多克隆抗体,以杆状病毒表达系统表达的重组RHDV VP60蛋白为免疫原制备RHDV的单克隆抗体(McAb,简称单抗)A3C,将RHDV McAb和羊抗兔IgG抗体包被在硝酸纤维素... 为了建立一种快速、简便的兔出血症病毒(RHDV)的检测方法,用胶体金标记纯化的RHDV多克隆抗体,以杆状病毒表达系统表达的重组RHDV VP60蛋白为免疫原制备RHDV的单克隆抗体(McAb,简称单抗)A3C,将RHDV McAb和羊抗兔IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化研制成RHDV免疫胶体金试纸条。该试纸条可以检出红细胞凝集试验(HA)效价为1∶10的RHDV悬液,即HA检测为阴性的样品,该试纸条检测为阳性,其敏感性高于HA;特异性试验结果显示,该试纸条不与家兔其他常见病菌发生交叉反应。应用该试纸条对127份疑似兔出血症家兔肝脏样品进行初步检测,同时用HA做平行试验,阳性符合率为100%。因此,该试纸条是一种快速、灵敏、特异的兔出血症病毒检测方法,为兔出血症的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 VP60蛋白 单克隆抗体 胶体金免疫层析试验 红细胞凝集试验
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一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 被引量：10
6
作者 田浪 王红宁 +4 位作者 李建文 廖娟 张夏兰 周万蓉 王鸿宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1078-1083,共6页
从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成... 从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线；电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序，序列分析表明VP60基因序列全长1740bp，编码579个氨基酸，测序结果提交GenBank（注册号为DQ069280），并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较，结果表明核苷酸同源性为90．0％～98．0％，氨基酸同源性为94．1％～99．0％，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区；同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株，丰富了地方毒株资源，为明确我国地方株的分子流行病学，以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 无血凝性 衣壳蛋白 VP60基因 序列分析 RT—PCR
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检测兔出血症病毒抗体胶体金试纸条的研制及初步应用 被引量：9
7
作者 魏后军 范志宇 +6 位作者 王芳 宋艳华 胡波 仇汝龙 陈萌萌 徐为中 薛家宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期614-619,共6页
利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,... 利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,并验证其性能及与血凝抑制试验的符合率。结果显示,试纸条检测阳性血清时T线、C线颜色深度相同,强阳性血清T线比C线颜色深,弱阳性血清T线比C线颜色浅,阴性血清T线不显色、C线显色,检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清与血凝抑制试验的符合率分别为93.75%、88.75%、91.25%、95.00%,总的符合率为91.54%;该试纸条具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,为兔病毒性出血症流行病学调查和抗体水平监测提供了有力的检测工具。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症 兔出血症病毒 VP60 胶体金试纸条 抗体
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兔出血症病毒提纯和多肽的比较研究 被引量：10
8
作者 盛祖恬 周明龙 +1 位作者 杜青云 何秉耀 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期380-383,共4页
我们采用了甘油－酒石酸钾梯度离心、琼脂糖４Ｂ层析和ＤＥＡＥ３２离子交换层析等三种方法提纯兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）进行比较，其结果发现ＤＥＡＥ３２离子交换层析效果最好，获得的病毒纯度最高，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗ－Ｂｌｏ... 我们采用了甘油－酒石酸钾梯度离心、琼脂糖４Ｂ层析和ＤＥＡＥ３２离子交换层析等三种方法提纯兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）进行比较，其结果发现ＤＥＡＥ３２离子交换层析效果最好，获得的病毒纯度最高，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗ－Ｂｌｏｔ试验表明，ＲＨＤＶ只有一条蛋白多肽、分子量为６１ＫＤ，截然不同于以往国内研究报道的ＲＨＤＶ具有３～６条结构多肽等结果，在国内属首次报道。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 梯度离心 病毒多肽
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兔出血症病毒衣壳蛋白VP60在杆状病毒表达系统中的表达及细胞内定位 被引量：6
9
作者 陈柳 云涛 +3 位作者 刘光清 倪征 余斌 宋毅 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期135-139,共5页
为了探讨兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白的细胞内定位,利用杆状病毒表达系统构建了表达RHDV结构蛋白(VP60)的重组杆状病毒。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测以及电子显微镜观察结果表明,VP60不仅能在昆虫细胞中正确表达,而且能自组装... 为了探讨兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白的细胞内定位,利用杆状病毒表达系统构建了表达RHDV结构蛋白(VP60)的重组杆状病毒。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测以及电子显微镜观察结果表明,VP60不仅能在昆虫细胞中正确表达,而且能自组装形成病毒样颗粒(VLPs)。进一步对表达蛋白进行细胞内定位观察发现,表达蛋白定位于Sf9细胞的细胞膜上。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 结构蛋白 昆虫—杆状病毒表达系统 细胞内定位
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兔出血症病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：7
10
作者 肖跃强 谢金文 +2 位作者 徐二丹 沈志强 丁壮 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期69-73,共5页
为建立一种敏感、特异、简便的兔出血症病毒(RHDV)检测方法,根据GenBank中公布的RHDV全基因组序列保守区域设计了2对引物,筛选了其中1对建立并优化了PCR条件,扩增产物为331bp,并基于此建立了SYBR GreenⅠ荧光染料real-time RT-PCR检测... 为建立一种敏感、特异、简便的兔出血症病毒(RHDV)检测方法,根据GenBank中公布的RHDV全基因组序列保守区域设计了2对引物,筛选了其中1对建立并优化了PCR条件,扩增产物为331bp,并基于此建立了SYBR GreenⅠ荧光染料real-time RT-PCR检测方法。通过敏感性、特异性、标准曲线建立等表明,该方法可检出101以上拷贝数的模板,只在RHDV有特异性扩增,标准曲线线性相关性好。实际应用结果显示,该方法对疑似RHDV病料检测的阳性率为74.8%,而普通RT-PCR方法检测的阳性率为65.5%。该方法的建立为开展该病的诊断、疫苗制备质控等提供了有效的技术保障。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 建立
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兔出血症病毒套式PCR检测方法的建立 被引量：8
11
作者 周智君 陈军 +1 位作者 俞远京 肖献忠 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期261-263,共3页
根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列,设计了2对引物,建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.先用外引物扩增一段389bp的DNA片断,继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增(即套式PCR),以提高结果的准确性,避免一次性PCR... 根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列,设计了2对引物,建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.先用外引物扩增一段389bp的DNA片断,继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增(即套式PCR),以提高结果的准确性,避免一次性PCR的假阳性结果.用该方法对12份RHD样本进行检测,检出率为100%. 展开更多
关键词 兔出血症病毒 套式PCR VP60基因
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低温电镜术证实了兔出血症病毒亚基因组颗粒的存在 被引量：13
12
作者 郑东 谌东华 +3 位作者 TaoXUE 郑明 ZHZhou 徐伟 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第5期661-666,共6页
从病兔肝细胞分离纯化的兔出血症病毒 ( RHDV)的低温电镜术显示出存在两种核心密度有明显差异的颗粒——高密度颗粒和低密度颗粒 ;而病毒的负染电镜术则显示出绝大多数病毒颗粒具有完整病毒颗粒的形态。结构分析表明高密度颗粒和低密度... 从病兔肝细胞分离纯化的兔出血症病毒 ( RHDV)的低温电镜术显示出存在两种核心密度有明显差异的颗粒——高密度颗粒和低密度颗粒 ;而病毒的负染电镜术则显示出绝大多数病毒颗粒具有完整病毒颗粒的形态。结构分析表明高密度颗粒和低密度颗粒具有相同的衣壳结构 ,且不存在释放核酸的通道。对低密度颗粒核心区的密度分析表明相当数量的颗粒并非空衣壳。我们认为这部分低密度颗粒是含病毒亚基因组 RNA的病毒颗粒 ,从而为兔出血症病毒在复制过程中其 7.5kb基因组和 2 .2 kb亚基因组 RNA分别包装成病毒颗粒提供了结构证据。 展开更多
关键词 低温电镜术 兔出血症病毒 亚基因组病毒颗粒
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兔出血症病毒试验感染及临床病理学观察 被引量：4
13
作者 刘俊林 胡永浩 +4 位作者 伏小平 王若聪 姚学萍 包世俊 项光华 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第4期364-368,共5页
以不同日龄及生理状态下的中国白兔为试验动物,经静脉接种、皮下接种、滴鼻和同居感染兔出血症病毒,进行临床检查和病理学观察。结果表明,静脉接种感染的兔潜伏期比其他途径感染的兔短;2月龄以下幼兔有明显的抵抗力,其他月龄的兔均易感... 以不同日龄及生理状态下的中国白兔为试验动物,经静脉接种、皮下接种、滴鼻和同居感染兔出血症病毒,进行临床检查和病理学观察。结果表明,静脉接种感染的兔潜伏期比其他途径感染的兔短;2月龄以下幼兔有明显的抵抗力,其他月龄的兔均易感,怀孕兔全部发生流产;临床病理学观察以各实质器官的退行性病变及弥散性血管内凝血为主要特征,表现为各组织器官严重出血、水肿,实质细胞广泛性变性、坏死,微血管内大量血栓形成、炎性细胞浸润等。 展开更多
关键词 家兔 兔出血症病毒 感染 临床病理学
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兔出血症病毒ZB分离株VP60基因克隆、截短表达与活性鉴定 被引量：3
14
作者 杨丽梅 马力 +6 位作者 张志美 徐倩倩 郭时金 沈志强 李峰 张颖 王艳萍 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第9期57-61,共5页
为分析兔出血症病毒地方分离株的变异情况，并获得活性良好的兔出血症病毒基因工程抗原，对兔出血症病毒ZB分离株的VP60基因进行了克隆、序列分析与原核表达。ZB株分离病毒与GenBank中的6株RHDVVP60基因的核苷酸序列同源性在92．5％～97... 为分析兔出血症病毒地方分离株的变异情况，并获得活性良好的兔出血症病毒基因工程抗原，对兔出血症病毒ZB分离株的VP60基因进行了克隆、序列分析与原核表达。ZB株分离病毒与GenBank中的6株RHDVVP60基因的核苷酸序列同源性在92．5％～97．9％之间，参照ZB株分离病毒VP60基因序列，设计合成一对特异性引物，PCR扩增了876bp的VP60基因片段。将目的片段定向克隆至pET30a表达载体中，经鉴定正确后，重组质粒转化BL21表达菌，经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白，重组蛋白纯化后，Westernblot检测表明具有良好的抗原性与特异性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 VP60基因 克隆 截短表达
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四川省兔出血症病毒2型流行病学调查及遗传变异分析 被引量：5
15
作者 李丽 陈弟诗 +5 位作者 陈斌 张毅 邓飞 邵靓 周莉媛 任永军 《中国动物检疫》 CAS 2022年第5期42-48,共7页
为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品... 为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品3825份,采用商品化荧光RT-PCR试剂盒,对以上样品进行RHDV2检测;对筛选出的12份肝组织阳性样品进行RHDV2 VP60基因RT-PCR扩增、测序和遗传进化分析。结果显示:RHDV2流行无明显季节性,各养殖品系家兔均有RHDV2感染,哺乳仔兔、幼兔、怀孕哺乳母兔死亡率分别为25%~60%、18%~45%、9%~30%。发病兔场肝脏样品RHDV2阳性检出率为88.89%(104/117),环境样品为46.09%(112/243);受监测兔场全血样品RHDV2阳性检出率为25.99%(868/3340),环境样品为16.29%(623/3825)。12份阳性样品的RHDV2 VP60基因序列长度均为1740 bp,核苷酸序列同源性为98.4%~100%,在系统发生进化树上独成一簇;与国内外参照毒株的VP60基因序列核苷酸同源性为93.7%~100%,编码的氨基酸序列同源性为95.7%~99.8%。结果表明:RHDV2已开始在四川省流行,需要加强检疫,重视饲养管理工作;其VP60基因序列出现了一定程度的变异,但遗传演化相对稳定。本研究补充了国内RHDV2的分子流行病学信息,也为该病的相关防控研究和控制对策制定提供了参考。 展开更多
关键词 兔出血症病毒2型(RHDV2) 流行病学调查 遗传变异分析 四川省
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兔出血症病毒分子生物学研究进展 被引量：11
16
作者 张玉颖 刘光清 吴润 《动物医学进展》 CSCD 2006年第3期9-13,共5页
兔出血症是由兔出血症病毒引起的一种急性、高度致死性传染病,病死率可高达100%,给养兔业带来了巨大的经济损失。近年来,随着对其研究的不断深入,在病毒分子生物学方面取得了很大的进展。文章主要从基因组结构及功能、编码的结构蛋白与... 兔出血症是由兔出血症病毒引起的一种急性、高度致死性传染病,病死率可高达100%,给养兔业带来了巨大的经济损失。近年来,随着对其研究的不断深入,在病毒分子生物学方面取得了很大的进展。文章主要从基因组结构及功能、编码的结构蛋白与非结构蛋白、基因疫苗等方面系统阐述了兔出血症病毒分子生物学方面的研究进展,同时,提出了存在的问题和展望。为进一步研制兔出血症病毒基因工程疫苗及诊断试剂提供理论基础,以期能更有效地防治此病。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 分子生物学
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兔出血症病毒衣壳蛋白P区二聚体的表达及其与受体结合能力分析 被引量：1
17
作者 胡波 范志宇 +5 位作者 王芳 魏后军 宋艳华 仇汝龙 徐为中 薛家宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期325-330,共6页
为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)P区形成二聚体的能力及其与HBGAs受体结合的能力,作者以pMD19T-VP60为模板扩增包含铰链区H的P区基因(HP)并克隆至原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,获得HP蛋... 为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)P区形成二聚体的能力及其与HBGAs受体结合的能力,作者以pMD19T-VP60为模板扩增包含铰链区H的P区基因(HP)并克隆至原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,获得HP蛋白。经SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示,HP蛋白主要以包涵体的形式高效表达,经HisTrap亲和柱纯化后可形成二聚体结构。通过HBGAs受体结合试验表明,P区与完整病毒衣壳相似,能与唾液中的HBGAs受体发生结合。本研究为进一步开展RHDV衣壳蛋白与受体的相互作用研究奠定基础。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白 P区 组织血型抗原 受体结合
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兔出血症病毒VP60主要抗原表位的原核表达及其免疫原性 被引量：6
18
作者 隋慧 杨金生 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15660-15661,共2页
[目的]研究兔出血症病毒(RHDV)VP60主要抗原表位基因原核表达蛋白的免疫原性。[方法]采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。以pET-28b(+)为表达载体,在E.coliRosetta菌株中表达重组蛋白。通过Western blot分析和接种... [目的]研究兔出血症病毒(RHDV)VP60主要抗原表位基因原核表达蛋白的免疫原性。[方法]采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。以pET-28b(+)为表达载体,在E.coliRosetta菌株中表达重组蛋白。通过Western blot分析和接种家兔检测了重组蛋白的免疫原性。[结果]经Western blot检测,在相对分子量24.0k Da处出现特异性的反应带。以纯化的重组蛋白制备的抗血清可以与纯化的RHDV发生特异性的ELISA反应。[结论]RHDV VP60主要抗原表位的原核表达产物具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 VP60 主要抗原表位基因 免疫原性
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猪瘟活疫苗(脾淋源)污染外源性兔出血症病毒的检测与启示 被引量：5
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作者 高金源 陈晓春 +3 位作者 韩玉玲 吴华伟 邓永 郎洪武 《中国兽药杂志》 2011年第12期16-18,共3页
在进行2批猪瘟活疫苗(脾淋源)效力检验时,出现效力检验家兔突然死亡现象,为了查明家兔死亡原因,采用无菌检验、支原体检验、血凝试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)对疫苗或注苗后死亡家兔肝脏、脾脏混合病料进行了检测。结... 在进行2批猪瘟活疫苗(脾淋源)效力检验时,出现效力检验家兔突然死亡现象,为了查明家兔死亡原因,采用无菌检验、支原体检验、血凝试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)对疫苗或注苗后死亡家兔肝脏、脾脏混合病料进行了检测。结果显示,疫苗的无菌检验、支原体检验结果均为阴性;疫苗及注射疫苗死亡家兔肝脏、脾脏混合病料具有较低的血凝价,血凝试验结果均为可疑;在兔体中和试验中,中和组家兔2/2健康存活,未中和的疫苗对照组家兔2/2死亡;疫苗及注射疫苗死亡后家兔肝脏、脾脏混合病料的ELISA检测结果均为阳性。检测结果证实疫苗中含有兔出血症病毒(Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV)。猪瘟活疫苗(脾淋源)污染RHDV的现象启示:应该加强猪瘟活疫苗(脾淋源)抗原制备过程的控制;同时有必要对猪瘟活疫苗(脾淋源)质量标准进行修订使之进一步补充完善。 展开更多
关键词 猪瘟活疫苗(脾淋源) 兔出血症病毒 污染 启示
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兔出血症病毒感染性克隆的优化 被引量：1
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作者 杨宗伟 张伟伟 +3 位作者 陈宗艳 李传峰 吴润 刘光清 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期8-12,共5页
为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构... 为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程. 展开更多
关键词 兔出血症病毒 病毒拯救 全长CDNA
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