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猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量:43
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作者 刘长明 张超范 +2 位作者 危艳武 张朝霞 袁婧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期621-624,633,共5页
本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3... 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周~10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 免疫过氧化物酶单层细胞试验 抗体检测试剂盒
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猪瘟病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验检测方法的建立
2
作者 朱海侠 陈雷 +3 位作者 查代灿 张惠云 胡晓涵 包松英 《福建畜牧兽医》 2022年第3期8-11,共4页
本研究旨在建立一种针对猪瘟病毒测定的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。通过优化一抗二抗的稀释倍数、细胞接毒时间、细胞固定条件等,建立能够测定猪瘟病毒的特异性方法。结果显示,建立的IPMA检测方法最优反应条件为接种CSFV,3... 本研究旨在建立一种针对猪瘟病毒测定的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。通过优化一抗二抗的稀释倍数、细胞接毒时间、细胞固定条件等,建立能够测定猪瘟病毒的特异性方法。结果显示,建立的IPMA检测方法最优反应条件为接种CSFV,37℃、5%CO_(2)培养72 h后,用含0.3%H_(2)O_(2)的甲醇溶液固定10 min,5%BSA封闭处理,1:200倍稀释的高免血清作用2 h,以1:1000倍稀释羊抗兔HRP-IgG作为二抗作用1 h,AEC 37℃显色15 min。结论:成功建立能够快速对猪瘟病毒含量测定的方法,该方法特异性强、操作方便,可以在生产过程中对猪瘟病毒的产毒情况进行监测。 展开更多
关键词 免疫过氧化物酶单层细胞试验 猪瘟病毒 特异性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫过氧化物酶单层细胞检测方法的建立 被引量:5
3
作者 李华玮 付永 +4 位作者 黄岚 郭宏伟 乔宏兴 赵绪永 边传周 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第1期62-67,共6页
【目的】建立一种可直观判断猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的检测方法。【方法】应用PRRSV多抗血清作为一抗,建立了PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测体系,并对相关反应条件进行优... 【目的】建立一种可直观判断猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的检测方法。【方法】应用PRRSV多抗血清作为一抗,建立了PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测体系,并对相关反应条件进行优化,对其特异性和敏感性进行检测。【结果】最佳病毒接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.1,最佳感染时间为24 h,一抗最佳稀释度为1∶1000,所建立的PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测方法与其他几种流行猪病无交叉反应。对300份来自不同地区的临床血清进行检测,IPMA与PCR检测阳性符合率达93%。【结论】该方法具有良好的特异性和敏感性,为PRRSV的临床检测提供新方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 检测
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应用免疫过氧化物酶试验诊断猪PRRS
4
作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1996年第5期3-3,共1页
1995年波兰学者建立一种免疫过氧化物酶单层细胞试验,用于诊断猪生殖—呼吸综合症(即蓝耳病,PRRS)血清抗体,从可疑猪场采集42份猪血清样本,经该法检测结果有23份为PRRS抗体阳性,其中有10份抗体滴度】1:256;另对没有感染PRRS猪场采集的6... 1995年波兰学者建立一种免疫过氧化物酶单层细胞试验,用于诊断猪生殖—呼吸综合症(即蓝耳病,PRRS)血清抗体,从可疑猪场采集42份猪血清样本,经该法检测结果有23份为PRRS抗体阳性,其中有10份抗体滴度】1:256;另对没有感染PRRS猪场采集的60份血样检测,结果全为阴性。证实该法是比较特异的。目前,波兰已将此法作为PRRS常规诊断方法应用。 展开更多
关键词 免疫过氧化物酶单层细胞试验 试验诊断 猪PRRS 呼吸综合症 血清抗体 诊断方法 抗体滴度 血清样本 蓝耳病 抗体阳性
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用间接免疫过氧化物酶试验检测鸡呼肠孤病毒
5
作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1996年第13期7-7,共1页
最近,美国阿拉巴马州农业试验站和Auburn大学兽医学院的研究人员研制生产出抗禽呼肠孤病毒株S<sub>1133</sub>的单克隆抗体(MAb),并用于诊断试验。使用MAb的间接免疫过氧化物酶(IP)试验,在检测福尔马林固定。
关键词 过氧化物 试验检测 间接免疫 成纤维细胞 单克隆抗体 禽呼肠孤病毒 诊断试验 细胞培养物 阿拉巴马州 农业试验
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间接酶联免疫吸附试验显色系统主要影响因素的探讨 被引量:3
6
作者 李俚 张连彦 +1 位作者 高明春 王君伟 《中国兽药杂志》 2008年第6期43-46,共4页
酶联免疫吸附试验(ELISA)易受多种因素影响,其中包括显色系统。本文就ELISA常用的四甲基联苯胺(TMB)显色系统的成份、含量及反应条件对ELISA显色状态的影响进行了探讨,制订了一种通用的调整包括pH值、底物成份及含量、反应时间等在内的... 酶联免疫吸附试验(ELISA)易受多种因素影响,其中包括显色系统。本文就ELISA常用的四甲基联苯胺(TMB)显色系统的成份、含量及反应条件对ELISA显色状态的影响进行了探讨,制订了一种通用的调整包括pH值、底物成份及含量、反应时间等在内的显色系统参量的方法,应用该方法为确定适用于任一特定ELISA的显色系统以及建立稳定的ELISA体系奠定了基础。 展开更多
关键词 免疫吸附试验 氧化 四甲基联苯胺 辣根过氧化物
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夹心酶联免疫吸附试验检测人表皮生长因子的方法建立及其应用研究
7
作者 夏勇 吴学诗 张美英 《实用医学杂志》 CAS 2005年第14期1588-1590,共3页
目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹... 目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹心法ELISA检测临床常见肿瘤患者及健康体检人群的血清EGF含量。结果:建立的EGF酶联免疫吸附法最小检测限达15.6ng/L,批内精密度为8.7%,批间精密度为11.6%,平均回收率为94.7%,符合临床检测要求。血清EGF含量在31名正常人为(1.305±0.382)ng/mL,24名乳腺癌病人术前值为(0.729±0.347)ng/mL,术后为(0.711±0.332)ng/mL,17名结直肠癌病人术前为(0.678±0.311)ng/mL,术后为(0.658±0.298)ng/mL,19名胃癌病人术前为(0.598±0.224)ng/mL,术后为(0.614±0.257)ng/mL。各肿瘤组患者血清EGF水平较健康对照组明显降低(P<0.01)。结论:建立了适用于临床检测的EGF酶联免疫检测方法,肿瘤患者血清中EGF含量较健康对照组明显下降,该检测方法的建立为进一步探讨肿瘤的发病机制提供了有效的手段。 展开更多
关键词 夹心免疫吸附试验 人表皮生长因子 方法建立 免疫检测方法 血清EGF ELISA检测 免疫吸附法 健康对照组 factor 含量变化规律 肿瘤患者 辣根过氧化物 病人术前 临床常见 临床检测 批间精密度 平均回收率 体检人群
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兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点
8
作者 乔飞 安彩霞 《河南畜牧兽医(综合版)》 2019年第7期35-35,共1页
1样品的基本知识主要介绍样品采集、处理以及保存的知识,ELISA测定样品很多,如血清、尿液、唾液、排泄物等。部分样品可直接开展ELISA检测,比如血清;而部分样品则需要经过预处理,比如粪便。兽医实验室一般根据常规方式采集样品,禽类采... 1样品的基本知识主要介绍样品采集、处理以及保存的知识,ELISA测定样品很多,如血清、尿液、唾液、排泄物等。部分样品可直接开展ELISA检测,比如血清;而部分样品则需要经过预处理,比如粪便。兽医实验室一般根据常规方式采集样品,禽类采心脏、翅静脉血的方式;猪采前腔静脉等处血;羊采颈静脉血;牛采颈静脉、尾静脉血。将血清分离时,避免出现溶血°现阶段,ELISA试剂盒多数使用的辣根过氧化物酶作为标记,红细胞溶解就会释放出较多的过氧化酶活性物质,在ELISA检测中,溶血会造成非特异性显色,导致假阳性,最后很难得到精确的检测结果。 展开更多
关键词 兽医实验室 免疫吸附 试验操作 ELISA检测 ELISA试剂盒 辣根过氧化物 样品采集 血清分离
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应用间接酶免疫试验检测乳中流产布氏杆菌抗体
9
作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1997年第17期7-7,共1页
加拿大Nielsen等(1996)建立了间接酶免疫试验检测牛乳中流产布氏杆菌抗体,样本来自无布氏杆菌病的加拿大6238份、阿根廷和智利布氏杆菌感染乳牛202份,所有乳样均经聚苯乙烯基质灭活。本试验用脂多糖抗原,辣根过氧化物酶标记的特异性牛... 加拿大Nielsen等(1996)建立了间接酶免疫试验检测牛乳中流产布氏杆菌抗体,样本来自无布氏杆菌病的加拿大6238份、阿根廷和智利布氏杆菌感染乳牛202份,所有乳样均经聚苯乙烯基质灭活。本试验用脂多糖抗原,辣根过氧化物酶标记的特异性牛IgG<sub>1</sub>表位的鼠单克隆抗体为抗体。结果发现本试验以智利感染畜群95%样本为参考,其敏感性为95.2±3.7%。 展开更多
关键词 流产布氏杆菌 试验检测 免疫 单克隆抗体 布氏杆菌病 脂多糖抗原 阿根廷 加拿大 过氧化物 特异性
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胃泌素释放肽前体双抗体夹心酶联免疫吸附法的建立及其应用 被引量:5
10
作者 楚振宇 周小林 +3 位作者 薛振伟 崔梅萍 蔺苏琴 李瑞华 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第1期70-73,共4页
目的胃泌素释放肽前体(pro-gastrin releasing peptide,PGRP)作为小细胞肺癌肿瘤标志物的应用价值已成为近年来的研究热点,文中建立新型双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)方法检测患者血清PGRP抗原... 目的胃泌素释放肽前体(pro-gastrin releasing peptide,PGRP)作为小细胞肺癌肿瘤标志物的应用价值已成为近年来的研究热点,文中建立新型双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)方法检测患者血清PGRP抗原浓度。方法通过人工合成PGRP抗原决定簇对本实验室自行研制的单克隆抗体进行筛选;采用改良过碘酸钠法对筛选到的单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记,建立PGRP双抗体夹心酶联免疫吸附检测法;并与IBL公司PGRP试剂盒对比检测结果。结果新型ELISA检测标准抗原浓度范围为33~1.7×104pg/m L,检测小细胞肺癌患者血清PGRP浓度灵敏度100%,特异度98.4%,IBL试剂盒检测灵敏度100%,特异度92.2%。结论新型ELISA方法可用于小细胞肺癌患者血清PGRP浓度检测。 展开更多
关键词 胃泌素释放肽前体 辣根过氧化物 单克隆抗体 免疫吸附试验 肿瘤
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应用免疫液流泳技术诊断鸡法氏囊病
11
作者 史同瑞 《畜牧兽医科技信息》 1998年第20期5-5,共1页
目前,用于鸡法氏囊病(IBD)诊断方法有琼扩试验,免疫过氧化物酶试验,反向间接血凝试验,乳胶凝集试验,在这些方法中琼扩试验是较简便、敏感的一种方法。迄今尚未见免疫液流泳(IR)技术用于禽病的诊断报道。最近印度学者建立了用于IBD诊断... 目前,用于鸡法氏囊病(IBD)诊断方法有琼扩试验,免疫过氧化物酶试验,反向间接血凝试验,乳胶凝集试验,在这些方法中琼扩试验是较简便、敏感的一种方法。迄今尚未见免疫液流泳(IR)技术用于禽病的诊断报道。最近印度学者建立了用于IBD诊断的免疫液流泳试验。 展开更多
关键词 技术诊断 鸡法氏囊病 琼扩试验 反向间接血凝试验 乳胶凝集试验 免疫过氧化物 诊断方法 IBD诊断 符合率 IR技术
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传染性喉气管炎诊断试验比较
12
作者 李秉鸿 《畜牧兽医科技信息》 1996年第14期6-7,共2页
美国俄勒冈大学的学者使用几种方法检测试验感染的鸡传染性喉气管炎病毒并作诊断比较。这些方法是:间接荧光抗体试验(IFAT)、免疫过氧化物酶(IP)、病毒分离(VI)、组织病理学、多聚酶链反应(PCR)和DNA杂交技术。以VI作为参考。
关键词 传染性喉气管炎 诊断试验 组织病理学 喉气管炎病毒 免疫过氧化物 病毒分离 灵敏度和特异性 抗体试验 间接荧光 DNA杂交
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PRV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用 被引量:5
13
作者 张超范 刘长明 +1 位作者 危艳武 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期445-449,共5页
本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),用于猪伪狂犬病病毒(PRV)血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检... 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),用于猪伪狂犬病病毒(PRV)血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检测相对于SN的敏感性为96.2%,特异性为97.7%,两者的总符合率为96.9%;该试剂盒检测的重复性好,与其它病毒参考血清无交叉反应;试剂盒可在-20℃保存12个月,用该试剂盒检测PRV人工感染猪血清,于感染后2周抗体全部阳转,健康对照组猪血清抗体检测均为阴性结果。对来自黑龙江、吉林、上海、内蒙古、河北等地采集的5个猪场后备母猪150份血清样本进行检测,PRV血清抗体阳性检出率为16.7%~50%。检测结果表明这些猪场后备猪群仍需加强疫苗免疫。该试剂盒的研制为我国PRV流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬痛病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 抗体检测试剂盒
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猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
14
作者 李鸽 刘肖 +3 位作者 李青梅 杨艳艳 王彦红 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2019年第8期129-133,共5页
为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获... 为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10^-6、1×10^-6和1×10^-5。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Westernblot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIVNP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。 展开更多
关键词 猪流感病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 NP蛋白 单克隆抗体
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IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究 被引量:3
15
作者 杨艳艳 乔松林 +8 位作者 李睿 郭军庆 李青梅 滕蔓 王丽 赵东 李学伍 邓瑞广 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期217-223,共7页
为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以... 为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 筛选 单克隆抗体
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鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
16
作者 李青梅 王丽 +9 位作者 冯丽丽 张雨杭 赵东 杨艳艳 邢广旭 柴书军 李赛赛 张丽萍 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第1期127-131,共5页
采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法... 采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 单克隆抗体 免疫过氧化物酶单层细胞试验 血凝抑制试验 中和试验 中和活性
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猪细小病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
17
作者 刘运超 杨苏珍 +6 位作者 陈玉梅 王聚财 尚延丽 魏蔷 陈维聪 冯华 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2021年第12期155-162,共8页
为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免... 为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行多轮亚克隆,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选,成功获得杂交瘤细胞株5F7和11B3,能够稳定分泌中和性单克隆抗体。单克隆抗体5F7和11B3的轻链型均为Kappa,重链型分别为IgG2a和IgG2b。经ELISA和IPMA检测,单克隆抗体5F7和11B3均能与重组PPV VP2蛋白和PPV病毒粒子发生特异反应,而与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。5F7和11B3腹水针对PPV病毒反应的ELSIA效价分别为1∶10 240和1∶20 480;针对PPV感染PK15细胞的中和效价分别为1∶2^(11)和1∶2^(10)。Western blot鉴定结果显示,单克隆抗体5F7和11B3均不与变性的VP2蛋白发生反应,说明2株单克隆抗体均识别重组PPV VP2蛋白的构象型表位。综上,成功制备了2株具有中和活性的抗PPV单克隆抗体。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 中和性单克隆抗体 免疫过氧化物酶单层细胞试验 杂交瘤细胞
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H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立 被引量:4
18
作者 石建州 李青梅 +5 位作者 王彦红 刘肖 李鸽 郭军庆 邓瑞广 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2691-2698,共8页
本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个... 本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10 2.63 TCID 50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H 2O 2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。 展开更多
关键词 H1N1亚型猪流感病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) 单克隆抗体
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猪伪狂犬病毒变异株HN1201 gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:3
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作者 程璇 付朋飞 +3 位作者 杜永坤 褚贝贝 杨国宇 王江 《河南农业科学》 北大核心 2020年第10期137-142,共6页
为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体,以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠,取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合,制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光... 为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体,以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠,取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合,制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)筛选出1株稳定分泌PRV gB蛋白抗体的单克隆细胞系,经鉴定该细胞系所分泌抗体为IgG1亚型,腹水纯化抗体的IFA效价为2^-11;细胞培养上清和腹水纯化抗体用于Western blot的最佳稀释比分别为1∶50和1∶5000;杂交瘤细胞诱导小鼠腹水的中和效价为1∶25。IPMA、IFA及Western blot试验结果显示,制备的单克隆抗体能特异性识别PRV gB蛋白。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒变异株HN1201 gB蛋白 单克隆抗体 Western blot 免疫过氧化物酶单层细胞试验 间接免疫荧光试验
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我国猪繁殖——呼吸综合征研究进展
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作者 张振兴 《畜牧兽医科技信息》 1996年第16期2-3,共2页
猪繁殖——呼吸综合征(PRRS)自1987年在美国发现以来,先后在加拿大、德、荷、比、英、法、意、奥、瑞士、波兰、西班牙、丹麦、马耳他和日本等国证实存在。PRRS在短短数年间蔓延之快、扩散之广,实不多见!近两年来,本病在我国猪群被发现... 猪繁殖——呼吸综合征(PRRS)自1987年在美国发现以来,先后在加拿大、德、荷、比、英、法、意、奥、瑞士、波兰、西班牙、丹麦、马耳他和日本等国证实存在。PRRS在短短数年间蔓延之快、扩散之广,实不多见!近两年来,本病在我国猪群被发现、证实,并进行了系统研究,进展简述如下。 展开更多
关键词 呼吸综合征 PRRSV 猪繁殖 肺泡巨噬细胞 血清样本 ELISA 诊断试剂盒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 流产胎儿 阳性检出率
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